(목적) 정상적으로 임신 제 3 기의 양수는 세균의 증식을 억제하거나 세균을 죽일 수 있는 항균활성을 보인다. 양수가 이러한 항균활성을 띠게하는 인자들은 다앙하지만 본 연구에서는 양수내 철농도와 양수의 항균활성이 어떠한 관계에 있는지, 태변이 양수내 철공급원으로서 역할을 할수 있는지, 세균 철흡수기전의 발달정도에 따라 양수내 증식이 어떻게차이를 보이는지, 양수내 세균의 철흡수를 차단찰 수 있는 항체가 존재하는지를 알아보고자 하였다. (방법 및 결과) 실험균으로 황색포도구균 ATCC 6538 을 사용하였으며모균주를 streptonigrin 에 반복적으로 노출시킴으로서 철흡수기전의 활성이 결여된 돌연변이주를 분리하여 사용하였다. ...
(목적) 정상적으로 임신 제 3 기의 양수는 세균의 증식을 억제하거나 세균을 죽일 수 있는 항균활성을 보인다. 양수가 이러한 항균활성을 띠게하는 인자들은 다앙하지만 본 연구에서는 양수내 철농도와 양수의 항균활성이 어떠한 관계에 있는지, 태변이 양수내 철공급원으로서 역할을 할수 있는지, 세균 철흡수기전의 발달정도에 따라 양수내 증식이 어떻게차이를 보이는지, 양수내 세균의 철흡수를 차단찰 수 있는 항체가 존재하는지를 알아보고자 하였다. (방법 및 결과) 실험균으로 황색포도구균 ATCC 6538 을 사용하였으며모균주를 streptonigrin 에 반복적으로 노출시킴으로서 철흡수기전의 활성이 결여된 돌연변이주를 분리하여 사용하였다. 흡광도 측정법을 이용하여 세균증식을 관찰한 결과 철이 결핍된 배지에서는 철이 풍부한 배지에비해 세균의 증식이 억제되었다 철이 결핍된 배지에서 철흡수기전의 활성이 결여된 돌연변이 균주는 철흡수기전의 활성이 높은 모균주에 비해증식이 억제되었다. 외부에서 철이나 태변이 공급되지 않은 양수에서는세균의 증식을 거의 관찰할 수 없었으나 태변이나 철을 공급한 양수에서는 세균의 증식이 활발하였다. 배지에서와 마찬가지로 철흡수기전의 활성이 결여된 돌연변이 균주는 철흡수기전의 활성이 높은 모균주에 비해 증식이 억제되었다. 배지나 양수에 철이 결합되지 않은 apotransferrin 을 첨가한 경우에는 세균의 증식이 현저하게 억제되었지만 철이 결합된holotransferrin 을 첨가한 경우는 세균의 증식이 촉진되었다. 태변에 의해촉진된 세균의 증식은 철흡수를 억제하는 철착화제 dipyridyl을 첨가하였을 때 다시 억제되었다. 양수내 태변의 양에 비례하여 양수내 철농도가증가하였다 세균의 철흡수기전중 철이 낮은 환경에서는 발현되는transferrin-binding protein(SA-tbp) 은 철이 결핍된 배지와 태변이 착색되지않은 양수에서는 발현되었으나 철이 풍부한 배지와 태변이 착색되어 철농도가 높아진 양수에서는 발현되지 않았다 양수내 SA-tbp에 대한 항체의 존재유무를 확인하기 위해서 S. aureus 의 세포벽 단백이 전이된 NC-paper 에 일차적으로 양수를 반응시키고 HRP 결합된 이차항체인antihman-IgG 로 확인한 결과 양수에는 SA-tbp 에 대한 항체가 존재하였다. 양수내 존재하는 SA-tbp에 대한 항체가 transferrin과 SA-tbp 의 결합을 차단하는지의 여부를 알아보기 위해 S. aureus 세포벽 단백이 전이된NC-paper를 먼저 양수로 차단한 다음 이차적으로 HRP가 결합된 humantransferrin으로 확인한 결과 SA-tbp와 transferrin의 결합은 첨가된 양수의양에 비례하여 차단되었다. (결론) 결론적으로 양수의 항균활성은 양수내 낮은 철농도와 밀접하게관련되어 있으며 세균의 철흡수기전의 발달정도에 따라 양수내 세균증식여부가 달라질 수 있으며 태변은 양수내 철을 공급하는 역할을 하여 세균의 증식을 촉진할 수 있고 양수내 존재하는 SA-tbp 에 대한 항체 때문에 transferrin 과 SA-tbp 사이의 receptor-ligand 결합이 차단되어 황색포도구균은 효율적으로 철을 흡수하지 못해 양수내에서 증식이 억제되는 것으로 생각된다.
(목적) 정상적으로 임신 제 3 기의 양수는 세균의 증식을 억제하거나 세균을 죽일 수 있는 항균활성을 보인다. 양수가 이러한 항균활성을 띠게하는 인자들은 다앙하지만 본 연구에서는 양수내 철농도와 양수의 항균활성이 어떠한 관계에 있는지, 태변이 양수내 철공급원으로서 역할을 할수 있는지, 세균 철흡수기전의 발달정도에 따라 양수내 증식이 어떻게차이를 보이는지, 양수내 세균의 철흡수를 차단찰 수 있는 항체가 존재하는지를 알아보고자 하였다. (방법 및 결과) 실험균으로 황색포도구균 ATCC 6538 을 사용하였으며모균주를 streptonigrin 에 반복적으로 노출시킴으로서 철흡수기전의 활성이 결여된 돌연변이주를 분리하여 사용하였다. 흡광도 측정법을 이용하여 세균증식을 관찰한 결과 철이 결핍된 배지에서는 철이 풍부한 배지에비해 세균의 증식이 억제되었다 철이 결핍된 배지에서 철흡수기전의 활성이 결여된 돌연변이 균주는 철흡수기전의 활성이 높은 모균주에 비해증식이 억제되었다. 외부에서 철이나 태변이 공급되지 않은 양수에서는세균의 증식을 거의 관찰할 수 없었으나 태변이나 철을 공급한 양수에서는 세균의 증식이 활발하였다. 배지에서와 마찬가지로 철흡수기전의 활성이 결여된 돌연변이 균주는 철흡수기전의 활성이 높은 모균주에 비해 증식이 억제되었다. 배지나 양수에 철이 결합되지 않은 apotransferrin 을 첨가한 경우에는 세균의 증식이 현저하게 억제되었지만 철이 결합된holotransferrin 을 첨가한 경우는 세균의 증식이 촉진되었다. 태변에 의해촉진된 세균의 증식은 철흡수를 억제하는 철착화제 dipyridyl을 첨가하였을 때 다시 억제되었다. 양수내 태변의 양에 비례하여 양수내 철농도가증가하였다 세균의 철흡수기전중 철이 낮은 환경에서는 발현되는transferrin-binding protein(SA-tbp) 은 철이 결핍된 배지와 태변이 착색되지않은 양수에서는 발현되었으나 철이 풍부한 배지와 태변이 착색되어 철농도가 높아진 양수에서는 발현되지 않았다 양수내 SA-tbp에 대한 항체의 존재유무를 확인하기 위해서 S. aureus 의 세포벽 단백이 전이된 NC-paper 에 일차적으로 양수를 반응시키고 HRP 결합된 이차항체인antihman-IgG 로 확인한 결과 양수에는 SA-tbp 에 대한 항체가 존재하였다. 양수내 존재하는 SA-tbp에 대한 항체가 transferrin과 SA-tbp 의 결합을 차단하는지의 여부를 알아보기 위해 S. aureus 세포벽 단백이 전이된NC-paper를 먼저 양수로 차단한 다음 이차적으로 HRP가 결합된 humantransferrin으로 확인한 결과 SA-tbp와 transferrin의 결합은 첨가된 양수의양에 비례하여 차단되었다. (결론) 결론적으로 양수의 항균활성은 양수내 낮은 철농도와 밀접하게관련되어 있으며 세균의 철흡수기전의 발달정도에 따라 양수내 세균증식여부가 달라질 수 있으며 태변은 양수내 철을 공급하는 역할을 하여 세균의 증식을 촉진할 수 있고 양수내 존재하는 SA-tbp 에 대한 항체 때문에 transferrin 과 SA-tbp 사이의 receptor-ligand 결합이 차단되어 황색포도구균은 효율적으로 철을 흡수하지 못해 양수내에서 증식이 억제되는 것으로 생각된다.
(Objective) Normally amniotic fluid (AF) at the third trimester of pregnancy is known to have antibacterial activity. Several factors are related to this antibacterial activity of AF. In the present study, the relationship between iron concentration and antibacterial activity of AF, the role of meco...
(Objective) Normally amniotic fluid (AF) at the third trimester of pregnancy is known to have antibacterial activity. Several factors are related to this antibacterial activity of AF. In the present study, the relationship between iron concentration and antibacterial activity of AF, the role of meconium as an iron source for bacterial growth in Af, bacterial growth in AF according to the activity of bacterial iron-uptake systems (IUS) and the effect of antibody for Staphylococcus aureus transferrin-binding protein (SA-tbp), which is well known as one of the IUS and may be exist in AF, on the antibacterial activity of Af, was investigated. (Methods and Results) S. aureus ATCC 6538 was used as the test strain. SR-1 strain with defective iron-uptake system was isolated from the parental strain, S.aureus ATCC 6538. Bacterial growth was measured by optical density of culture fluid at 600 nm of wavelength. The growth of S. aureus in the deferrated BHI (iron concentration is 0 2 ㎍/dl) was less active than in the normal BHI (iron concentration is 440 ㎍/dl) The growth of SR-1 was less active than parental strain in the deferrated BHI The growth of S aureus was inhibited and growth of SR-1 was less active than parental strain in the clear AF not containing meconium or any exogenous iron sources. The growth of S. aureus was inhibited in the deferrated medium and AF containing apotransferrin but stimulated in the deferrated medium and AF containing holotransferrin. Bacterial growth stimulated by meconium was re-inhibited by addition of iron-chelator, dipyridyl. Iron concentration, which was measured by Ferrozine assay, was increased in proportion to the meconium content in Af (Y=12,2X+6.7, p=0.0001,x^(2)=0980). SA-tbp, which Is known to be expressed only in the iron-restricted conditions and was detected by receptor-ligand assay, was expressed in the deferrated medium and clear AF not containing meconium (iron concentration Is 6.7 ㎍/dl) but not in the normal iron-sufficient medium and AF containing 5 mg/ml of meconium (iron concentration is 67.7 ㎍/dl). To verify the presence of antibody for SA-tbp on the cell wall of S. aureus, the isolated cell wall proteins were transferred to the nitrocellulose (NC)-paper, reacted primarily with AF, and then reacted secondarily with antibody conjugated with horseradish peroxidase (HRP) for human immunoglobulin G Fc portion. Antibody for SA-tbp was present in AF as well as the other body fluids used in this study. To find out whether or not antibody for SA-tbp can block the interaction between SA-tbp and transferrin, NC-paper, which cell wall proteins were transferred to, was reacted primarily with AF, and then reacted secondarily with human transferrin conjugated with HRP. Antibody for SA-tbp in AF could block completely the receptor-ligand interaction between SA-tbp and transferrin. This phenomenon was observed in the other body fluids used in this study. (Conclusion) Antibacterial activity of AF is closely related with the low iron availability in AF and bacterial growth in AF considerably depends on the activity of bacterial IUS. Meconium acts as one of the exogenous iron-sources and thus stimulates bacterial growth in AF Antibody for SA-tbp present in AF blocks the receptor-ligand interaction between SA-tbp and transferrin, and subsequently the iron-uptake of S. aureus from holotransferrin, and eventually inhibits the growth of S. aureus in AF.
(Objective) Normally amniotic fluid (AF) at the third trimester of pregnancy is known to have antibacterial activity. Several factors are related to this antibacterial activity of AF. In the present study, the relationship between iron concentration and antibacterial activity of AF, the role of meconium as an iron source for bacterial growth in Af, bacterial growth in AF according to the activity of bacterial iron-uptake systems (IUS) and the effect of antibody for Staphylococcus aureus transferrin-binding protein (SA-tbp), which is well known as one of the IUS and may be exist in AF, on the antibacterial activity of Af, was investigated. (Methods and Results) S. aureus ATCC 6538 was used as the test strain. SR-1 strain with defective iron-uptake system was isolated from the parental strain, S.aureus ATCC 6538. Bacterial growth was measured by optical density of culture fluid at 600 nm of wavelength. The growth of S. aureus in the deferrated BHI (iron concentration is 0 2 ㎍/dl) was less active than in the normal BHI (iron concentration is 440 ㎍/dl) The growth of SR-1 was less active than parental strain in the deferrated BHI The growth of S aureus was inhibited and growth of SR-1 was less active than parental strain in the clear AF not containing meconium or any exogenous iron sources. The growth of S. aureus was inhibited in the deferrated medium and AF containing apotransferrin but stimulated in the deferrated medium and AF containing holotransferrin. Bacterial growth stimulated by meconium was re-inhibited by addition of iron-chelator, dipyridyl. Iron concentration, which was measured by Ferrozine assay, was increased in proportion to the meconium content in Af (Y=12,2X+6.7, p=0.0001,x^(2)=0980). SA-tbp, which Is known to be expressed only in the iron-restricted conditions and was detected by receptor-ligand assay, was expressed in the deferrated medium and clear AF not containing meconium (iron concentration Is 6.7 ㎍/dl) but not in the normal iron-sufficient medium and AF containing 5 mg/ml of meconium (iron concentration is 67.7 ㎍/dl). To verify the presence of antibody for SA-tbp on the cell wall of S. aureus, the isolated cell wall proteins were transferred to the nitrocellulose (NC)-paper, reacted primarily with AF, and then reacted secondarily with antibody conjugated with horseradish peroxidase (HRP) for human immunoglobulin G Fc portion. Antibody for SA-tbp was present in AF as well as the other body fluids used in this study. To find out whether or not antibody for SA-tbp can block the interaction between SA-tbp and transferrin, NC-paper, which cell wall proteins were transferred to, was reacted primarily with AF, and then reacted secondarily with human transferrin conjugated with HRP. Antibody for SA-tbp in AF could block completely the receptor-ligand interaction between SA-tbp and transferrin. This phenomenon was observed in the other body fluids used in this study. (Conclusion) Antibacterial activity of AF is closely related with the low iron availability in AF and bacterial growth in AF considerably depends on the activity of bacterial IUS. Meconium acts as one of the exogenous iron-sources and thus stimulates bacterial growth in AF Antibody for SA-tbp present in AF blocks the receptor-ligand interaction between SA-tbp and transferrin, and subsequently the iron-uptake of S. aureus from holotransferrin, and eventually inhibits the growth of S. aureus in AF.
주제어
#amniotic fluid staphylococcus aureus iron transferrin-binding protein 양수 태변 철 황색포도구균
학위논문 정보
저자
안영준
학위수여기관
조선대학교
학위구분
국내박사
학과
의학과
지도교수
문경래
발행연도
2002
총페이지
ⅲ, 57 p.
키워드
amniotic fluid staphylococcus aureus iron transferrin-binding protein 양수 태변 철 황색포도구균
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