초록 ▼

용어보기논문에서 용어와 풀이말을 자동 추출한 결과로, 시범 서비스 중입니다. AI-Helper

본 연구의 최종 목표는 아직까지 밝혀지지 않은 단백질의 3차 구조를 X-ray 분석에 의해 밝히는 데 있다. 단백질의 구조를 결정하는데 앞서 수행되어야 하는 것이 목적하는 단백질을 90% 이상의 순도와 적절한 농도로 정제하여 결정화하는 것이다. 본 연구는 CAUDAL, Human NHERF와 E3KARP 단백질 구조의 연구를 위하여 이러한 단백질을 E.coli내에서 과발현시켜 정제하고 결정화 시키는데 주력하였다. Caudal은 발생, 증식, 분화 과정에서 전사조절인자로서의 기능을 담당하고 있으며 homeodomain을 가지고 있다. Human NHERF와 E3KARP는 두 개의 PDZ1과 PDZ2 domain과 함께 C-말단을 지닌 단백질로서 이들은 55%의 유사성을 지니고 있으며 ERM family와 결합한다. NHERF와 E3KARP는 targeting과 trafficking에 중요한 역할을 하는 막 단백질로서 성장 조절에 관여하는 ...

본 연구의 최종 목표는 아직까지 밝혀지지 않은 단백질의 3차 구조를 X-ray 분석에 의해 밝히는 데 있다. 단백질의 구조를 결정하는데 앞서 수행되어야 하는 것이 목적하는 단백질을 90% 이상의 순도와 적절한 농도로 정제하여 결정화하는 것이다. 본 연구는 CAUDAL, Human NHERF와 E3KARP 단백질 구조의 연구를 위하여 이러한 단백질을 E.coli내에서 과발현시켜 정제하고 결정화 시키는데 주력하였다. Caudal은 발생, 증식, 분화 과정에서 전사조절인자로서의 기능을 담당하고 있으며 homeodomain을 가지고 있다. Human NHERF와 E3KARP는 두 개의 PDZ1과 PDZ2 domain과 함께 C-말단을 지닌 단백질로서 이들은 55%의 유사성을 지니고 있으며 ERM family와 결합한다. NHERF와 E3KARP는 targeting과 trafficking에 중요한 역할을 하는 막 단백질로서 성장 조절에 관여하는 어댑터 단백질이다. 본 연구에서는 여러 단계에 걸친 정제 과정을 설명하였다. 친화성 크로마토그래피는 가장 효율적인 정제 방법으로 이용되었고, 그 결과 순도가 높은 단백질을 얻을 수 있음을 SDS-PAGE로 확인할 수 있었다. GST와 His_(6) tag를 분리한 후 순도가 높은 단백질 정제를 위하여 이온 교환 크로마토그래피와 젤 여과 크로마토그래피를 거쳐 최종 농도 6 mg/ml CAUDAL, 26 mg/ml NHERF와 11 mg/ml E3KARP의 단백질을 얻을 수 있었다. 이를 이용하여 각각의 단백질을 결정화를 시도하였으나 아직까지 결정체의 적절한 성장 조건을 찾지 못하였다. 현재 E3KARP의 결정화가 주로 진행되고 있다. 향후 원편광 이색성 분광학을 이용하여 2차 구조의 접함 여부를 분석하려고 하고 있으며, NHERF와 E3KARP는 막 단백질의 결정화에 알맞은 MembFac 용액을 이용하여 결정체 성장 조건을 찾고 있는 중이다. 본 연구는 단백질의 3차 구조를 밝히는데 기초적 단계로써 이를 바탕으로 단백질의 생화학적 특성과 함께 이들 단백질과 관련된 질병치료에 도움이 될 것이다.

주제어