HPLC-DAD와 LC-MS/MS를 이용한 수용성 비타민 B군의 동시분석 Simultaneous determination of the B group vitamins by high performance liquid chromatography diode array detector and liquid chromatography-tandem mass spectrometry원문보기
본 연구는 HPLC-DAD (diode array detector)와 LC-MS/MS를 이용하여 식품 및 건강기능식품 중 비타민 B군을 동시에 신속하며 재현성 있게 정량하는 방법을 개발하는 것에 목적을 두었다. HPLC-DAD 분석법은 치아민, 리보플라빈, 니코틴아미드, ...
본 연구는 HPLC-DAD (diode array detector)와 LC-MS/MS를 이용하여 식품 및 건강기능식품 중 비타민 B군을 동시에 신속하며 재현성 있게 정량하는 방법을 개발하는 것에 목적을 두었다. HPLC-DAD 분석법은 치아민, 리보플라빈, 니코틴아미드, 판토텐산, 피리독신 및 엽산 등 총 6 가지 성분을 대상으로 하였고, LC-MS/MS 분석법은 비오틴, 시아노코발라민, 콜린, 판토텐산, 엽산 등 총 5 가지 성분을 대상으로 하였다. 예외적으로 일부 고상식품군에서 판토텐산과 엽산이 HPLC 분석에서 간섭물질의 영향을 받으므로, 이런 경우에 LC-MS/MS 동시분석법으로 분석하였다. HPLC-DAD 분석은 Develosil RPAQUEOUS C30 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 칼럼을 사용하여 기울기용리 조건 하에서 분석하였으며, 분석파장은 275 nm로 설정하였다. 이동상으로는 20 mM potassium phosphate buffer (pH 2.95)와 아세토니트릴을 사용하였고, 유속을 분당 0.8 mL에서 1.0 mL로 변경하며 측정하였다. LC-MS/MS 분석은 ESI (electrospray ionization) ion source 방식을 사용하였고, 분석의 선택성과 검출감도를 향상시키기 위하여 MRM (multiple reaction monitoring) mode로 분석하였다. Shiseido Capcellpak AQ C18 (2.0 × 150 mm, 5 μm) 칼럼을 사용하였으며, 이동상으로 0.05% formic acid와 아세토니트릴을 사용하여 기울기용리 조건 하에서 분석하였다. 유속은 분당 150 μL로 설정하였다. 개발한 HPLC-DAD, LC-MS/MS 분석법에 대하여 CODEX 가이드라인에 따라 분석법 검증을 실시한 결과 두가지 분석법 모두에서 양호한 선택성, 직선성, 정량한계, 정밀성, 정확성, 회수율및 안정성을 확인하였다. 본 연구팀이 개발한 비타민 B군 동시분석법은 고상 식품과 액상 식품을 포함한 다양한 식품군에 성공적으로 적용되었다.
본 연구는 HPLC-DAD (diode array detector)와 LC-MS/MS를 이용하여 식품 및 건강기능식품 중 비타민 B군을 동시에 신속하며 재현성 있게 정량하는 방법을 개발하는 것에 목적을 두었다. HPLC-DAD 분석법은 치아민, 리보플라빈, 니코틴아미드, 판토텐산, 피리독신 및 엽산 등 총 6 가지 성분을 대상으로 하였고, LC-MS/MS 분석법은 비오틴, 시아노코발라민, 콜린, 판토텐산, 엽산 등 총 5 가지 성분을 대상으로 하였다. 예외적으로 일부 고상식품군에서 판토텐산과 엽산이 HPLC 분석에서 간섭물질의 영향을 받으므로, 이런 경우에 LC-MS/MS 동시분석법으로 분석하였다. HPLC-DAD 분석은 Develosil RPAQUEOUS C30 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 칼럼을 사용하여 기울기용리 조건 하에서 분석하였으며, 분석파장은 275 nm로 설정하였다. 이동상으로는 20 mM potassium phosphate buffer (pH 2.95)와 아세토니트릴을 사용하였고, 유속을 분당 0.8 mL에서 1.0 mL로 변경하며 측정하였다. LC-MS/MS 분석은 ESI (electrospray ionization) ion source 방식을 사용하였고, 분석의 선택성과 검출감도를 향상시키기 위하여 MRM (multiple reaction monitoring) mode로 분석하였다. Shiseido Capcellpak AQ C18 (2.0 × 150 mm, 5 μm) 칼럼을 사용하였으며, 이동상으로 0.05% formic acid와 아세토니트릴을 사용하여 기울기용리 조건 하에서 분석하였다. 유속은 분당 150 μL로 설정하였다. 개발한 HPLC-DAD, LC-MS/MS 분석법에 대하여 CODEX 가이드라인에 따라 분석법 검증을 실시한 결과 두가지 분석법 모두에서 양호한 선택성, 직선성, 정량한계, 정밀성, 정확성, 회수율및 안정성을 확인하였다. 본 연구팀이 개발한 비타민 B군 동시분석법은 고상 식품과 액상 식품을 포함한 다양한 식품군에 성공적으로 적용되었다.
In this study, the fast, simple and reliable HPLC-DAD (diode array detector) and LC-MS/MS method was used to enhance reproducibility and sensitivity of detection for analysis of small amount B group vitamins in food products. Thiamin, riboflavin, nicotinamide, pantothenic acid, pyridoxine and folic ...
In this study, the fast, simple and reliable HPLC-DAD (diode array detector) and LC-MS/MS method was used to enhance reproducibility and sensitivity of detection for analysis of small amount B group vitamins in food products. Thiamin, riboflavin, nicotinamide, pantothenic acid, pyridoxine and folic acid were analysed by HPLC-DAD and biotin, cyanocobalamin, choline, pantothenic acid and folic acid were analysed by LC-MS/MS. Pantothenic acid and folic acid were analysed by LC-MS/MS for several solid food products. The HPLC-DAD chromatographic analysis was carried out using gradient elution with a Develosil RPAQUEOUS C30 (4.6 × 250 mm, 5 μm) column and wavelength was set at 275 nm. The mobile phase was composed of 20 mM phosphate buffer (pH 2.95) and acetonitrile at a flow rate from 0.8 mL/min to 1.0 mL/min. The determination of vitamins was also accomplished by a triple quadrupole tandem mass spectrometer equipped with an electrospray ionization source (ESI). Multiple reaction monitoring (MRM) in the positive mode was used to enhance selectivity of detection. Vitamins were separated by Shiseido Capcellpak AQ C18 (2.0 × 150 mm, 5 μm) column with gradient elution composed of 0.05% formic acid and acetonitrile at a flow rate of 150 μL/min. The calibration curves of ten vitamins showed good linearity, and the determination of vitamins was validated with respect to the Specificity, linearity, limit of quantitation, precision. accuracy, Recovery and stability. The results indicate that the established HPLC-DAD and LC-MS/MS methods are suitable for quantitative analysis and quality control of vitamin B groups. This method was successfully applicable to the monitoring of vitamin B groups in both solid and liquid foods.
In this study, the fast, simple and reliable HPLC-DAD (diode array detector) and LC-MS/MS method was used to enhance reproducibility and sensitivity of detection for analysis of small amount B group vitamins in food products. Thiamin, riboflavin, nicotinamide, pantothenic acid, pyridoxine and folic acid were analysed by HPLC-DAD and biotin, cyanocobalamin, choline, pantothenic acid and folic acid were analysed by LC-MS/MS. Pantothenic acid and folic acid were analysed by LC-MS/MS for several solid food products. The HPLC-DAD chromatographic analysis was carried out using gradient elution with a Develosil RPAQUEOUS C30 (4.6 × 250 mm, 5 μm) column and wavelength was set at 275 nm. The mobile phase was composed of 20 mM phosphate buffer (pH 2.95) and acetonitrile at a flow rate from 0.8 mL/min to 1.0 mL/min. The determination of vitamins was also accomplished by a triple quadrupole tandem mass spectrometer equipped with an electrospray ionization source (ESI). Multiple reaction monitoring (MRM) in the positive mode was used to enhance selectivity of detection. Vitamins were separated by Shiseido Capcellpak AQ C18 (2.0 × 150 mm, 5 μm) column with gradient elution composed of 0.05% formic acid and acetonitrile at a flow rate of 150 μL/min. The calibration curves of ten vitamins showed good linearity, and the determination of vitamins was validated with respect to the Specificity, linearity, limit of quantitation, precision. accuracy, Recovery and stability. The results indicate that the established HPLC-DAD and LC-MS/MS methods are suitable for quantitative analysis and quality control of vitamin B groups. This method was successfully applicable to the monitoring of vitamin B groups in both solid and liquid foods.
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