이종간 장기이식을 포함한 생물의학적 연구를 위한 돼지의 중요성 증대와 상응하여, 돼지에서 O혈액형 동물의 선발 및 활용은 혈액형 항원의 차이에 의한 급성 면역 거부반응을 조절을 위해 중요하다. 본 연구는 기존에 알려진 O형 혈액형의 게놈 결손현상과의 연관성을 바탕으로, 돼지의 A형과 O형 혈액형간의 유전적 차이의 분석을 목적으로 하였다. 돼지의 A형 혈액형 ...
이종간 장기이식을 포함한 생물의학적 연구를 위한 돼지의 중요성 증대와 상응하여, 돼지에서 O혈액형 동물의 선발 및 활용은 혈액형 항원의 차이에 의한 급성 면역 거부반응을 조절을 위해 중요하다. 본 연구는 기존에 알려진 O형 혈액형의 게놈 결손현상과의 연관성을 바탕으로, 돼지의 A형과 O형 혈액형간의 유전적 차이의 분석을 목적으로 하였다. 돼지의 A형 혈액형 전이 효소 유전자는 8개의 엑손으로 구성되어 있으며, 이를 바탕으로 각각의 엑손 특이적 프라이머를 제작하였다. 사람의 ABO 혈액형 항체를 이용한 혈청학적 방법으로 결정된 A형 및 O형 혈액형 동물의 genomic DNA에 대한 PCR을 수행하였으며, O형 혈액형 동물의 게놈에서 엑손 8이 증폭되지 않음을 확인하였다. RT-PCR에 의한 유전자 발현 분석도 동일한 결과를 나타내었다. AO 유전자 (돼지 혈액형 UDP-GalNAc 전이 효소)에 가장 가까이 위치한 SURF6 유전자의 엑손에 대한 RT 및 genomic PCR 분석을 통하여 돼지의 O 혈액형 대립유전자의 경우 AO 혈액형 유전자를 제외하고는 A 형유전자와 동일한 발현을 나타내어 O형 대립유전자의 DNA 결손은 오직 AO 유전자에 특이적으로 영향을 미침을 증명하였다. O형 혈액형의 DNA 결손현상을 분석하기 위해 O형 혈액형인 한국재래돼지의 BAC 라이브러리를 스크리닝 후 AO 유전자를 포함하는 2개의 BAC 클론을 발굴하여 그 중 1개에 대하여 shotgun 염기서열분석을 수행하였다. 본 연구를 통하여 A형과 O형 혈액형 대립유전자 간의 상세한 분자생물학적 및 유전학적 차이를 규정지을 수 있었다. 흥미롭게도, 돼지의 O형 혈액형 유전자는 사람의 O형 혈액형과 유사한 무반응 대립유전자(null allele)의 턴을 나타내었다. 또한 본 결과를 바탕으로 돼지의 AO 혈액형 검사를 위한 PCR 기반의 분석방법을 개발하였다.
이종간 장기이식을 포함한 생물의학적 연구를 위한 돼지의 중요성 증대와 상응하여, 돼지에서 O혈액형 동물의 선발 및 활용은 혈액형 항원의 차이에 의한 급성 면역 거부반응을 조절을 위해 중요하다. 본 연구는 기존에 알려진 O형 혈액형의 게놈 결손현상과의 연관성을 바탕으로, 돼지의 A형과 O형 혈액형간의 유전적 차이의 분석을 목적으로 하였다. 돼지의 A형 혈액형 전이 효소 유전자는 8개의 엑손으로 구성되어 있으며, 이를 바탕으로 각각의 엑손 특이적 프라이머를 제작하였다. 사람의 ABO 혈액형 항체를 이용한 혈청학적 방법으로 결정된 A형 및 O형 혈액형 동물의 genomic DNA에 대한 PCR을 수행하였으며, O형 혈액형 동물의 게놈에서 엑손 8이 증폭되지 않음을 확인하였다. RT-PCR에 의한 유전자 발현 분석도 동일한 결과를 나타내었다. AO 유전자 (돼지 혈액형 UDP-GalNAc 전이 효소)에 가장 가까이 위치한 SURF6 유전자의 엑손에 대한 RT 및 genomic PCR 분석을 통하여 돼지의 O 혈액형 대립유전자의 경우 AO 혈액형 유전자를 제외하고는 A 형유전자와 동일한 발현을 나타내어 O형 대립유전자의 DNA 결손은 오직 AO 유전자에 특이적으로 영향을 미침을 증명하였다. O형 혈액형의 DNA 결손현상을 분석하기 위해 O형 혈액형인 한국재래돼지의 BAC 라이브러리를 스크리닝 후 AO 유전자를 포함하는 2개의 BAC 클론을 발굴하여 그 중 1개에 대하여 shotgun 염기서열분석을 수행하였다. 본 연구를 통하여 A형과 O형 혈액형 대립유전자 간의 상세한 분자생물학적 및 유전학적 차이를 규정지을 수 있었다. 흥미롭게도, 돼지의 O형 혈액형 유전자는 사람의 O형 혈액형과 유사한 무반응 대립유전자(null allele)의 턴을 나타내었다. 또한 본 결과를 바탕으로 돼지의 AO 혈액형 검사를 위한 PCR 기반의 분석방법을 개발하였다.
The importance of pigs for biomedical research models including interest in xenotransplantation has been gradually increasing. The selection and use of animals with blood group O can positively contribute to control acute immune rejection due to the difference in blood groups. Based on a previous in...
The importance of pigs for biomedical research models including interest in xenotransplantation has been gradually increasing. The selection and use of animals with blood group O can positively contribute to control acute immune rejection due to the difference in blood groups. Based on a previous indication on the presence of possible genomic deletion in the O blood group, we initiated the detailed characterization of genetic differences between A and O blood groups in pigs. The porcine blood group A transferase gene consisted of 8 exons. We designed specific primers for each exon of the gene and performed PCR against genomic DNA from either blood group A or O animals distinguished by traditional serological method using human ABO blood group antibodies. From the result, we found the amplification failure from the exon 8 in the genome of blood group O animals. The gene expression analysis using RT-PCR showed a consistent result. The RT-PCR result from the exon 5 of SURF6 gene with its location nearest to the AO gene (porcine blood group UDP-GalNAc transferase gene), showed the same level of expression between O and A blood groups, indicating the deletion only affects on the AO gene. To characterize the DNA deletion in blood type O, we screened a BAC clone from the BAC library of a Korean native pig with the O blood group and carried out shotgun sequencing. As a result, we were able to characterize the detailed molecular difference between the blood group A and O alleles. Interestingly, the presence of null allele for blood group O in pigs is analogous to the blood group O in human. We also developed the PCR based method for AO blood group typing in pigs.
The importance of pigs for biomedical research models including interest in xenotransplantation has been gradually increasing. The selection and use of animals with blood group O can positively contribute to control acute immune rejection due to the difference in blood groups. Based on a previous indication on the presence of possible genomic deletion in the O blood group, we initiated the detailed characterization of genetic differences between A and O blood groups in pigs. The porcine blood group A transferase gene consisted of 8 exons. We designed specific primers for each exon of the gene and performed PCR against genomic DNA from either blood group A or O animals distinguished by traditional serological method using human ABO blood group antibodies. From the result, we found the amplification failure from the exon 8 in the genome of blood group O animals. The gene expression analysis using RT-PCR showed a consistent result. The RT-PCR result from the exon 5 of SURF6 gene with its location nearest to the AO gene (porcine blood group UDP-GalNAc transferase gene), showed the same level of expression between O and A blood groups, indicating the deletion only affects on the AO gene. To characterize the DNA deletion in blood type O, we screened a BAC clone from the BAC library of a Korean native pig with the O blood group and carried out shotgun sequencing. As a result, we were able to characterize the detailed molecular difference between the blood group A and O alleles. Interestingly, the presence of null allele for blood group O in pigs is analogous to the blood group O in human. We also developed the PCR based method for AO blood group typing in pigs.
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