간암 성장 인자인(Granulin-Epithelin Precursor)에 대한 RNA 간섭현상을 활용한 간암치료 RNA interference to Granulin-Epithelin Precursor prevents growth of hepatocellullar carcinoma cells in culture and subcutaneously implanted in mice원문보기
간암은 전 세계적으로 흔하게 발병하는 암 중의 하나이지만 지역에 따라 크게 차이가 나고 있으며 한국, 중국, 일본, 대만 등에서 높은 발생률을 보이는 질병이다. 그러나 간암 치료를 위한 효과적인 치료 방법이 없어 사망률이 높게 나타난다. 따라서 간암 치료를 위한 효과적인 치료 방법이 필수적이다. Granulin-Epithelin Precursor(GEP)는 간암에서 과발현되고 있으며 간암의 형성과 성장에 필요한 성장인자로 알려져 있다. 세포내에서 GEP 발현을 위해서 pcDNA3.1 ...
간암은 전 세계적으로 흔하게 발병하는 암 중의 하나이지만 지역에 따라 크게 차이가 나고 있으며 한국, 중국, 일본, 대만 등에서 높은 발생률을 보이는 질병이다. 그러나 간암 치료를 위한 효과적인 치료 방법이 없어 사망률이 높게 나타난다. 따라서 간암 치료를 위한 효과적인 치료 방법이 필수적이다. Granulin-Epithelin Precursor(GEP)는 간암에서 과발현되고 있으며 간암의 형성과 성장에 필요한 성장인자로 알려져 있다. 세포내에서 GEP 발현을 위해서 pcDNA3.1 벡터 내에 분비 서열 - FC 서열 - 전제 GEP 서열을 제한효소 HindIII와 XhoI을 사용하여 삽입하였다(pcDNA-GEP). 간암 세포주에서 pcDNA-GEP를 형질 주입한 후 발현되는 FC를 측정할 수 있는 ELISA kit를 이용하여 발현양을 확인하였다. CAPSID 프로그램을 이용하여 GEP에 대한 특이적인 siRNA를 위한 3가지 서열을 찾았고 이들을 합성하여(GEP-siRNA1,2,3) GEP 발현 억제 효과를 확인하였다. GEP-siRNA1,2,3 중에서 GEP-siRNA1이 가장 우수한 GEP 발현 억제 효능을 확인하였다. 따라서 siRNA의 단기간 유전자 발현 억제와 불안정성을 보완하기 위해 H1/TO 프로모터가 있는 벡터 내에 GEP-siRNA1서열을 이용하여 플라스미드 형태의 shRNA를 합성하였다. Hep3B세포에 GEP-shRNA를 형질 주입하여 GEP의 발현 억제를 통해 간암 세포의 성장이 저해되는 것을 확인 하였다. Balb/c nude mice의 대퇴부에 Hep3B세포 1X107 cells/ml을 주입하여 종양이 형성된 것을 확인한 후 GEP-shRNA와 negative control로 Luciferase-shRNA를 각각 30ug intratumoral injection하고 50mV 전압으로 8번 전기충격을 주었다. GEP-shRNA를 injection한 것이 Luciferase-shRNA 보다 종양의 성장을 저해하는 것을 확인하였다.
간암은 전 세계적으로 흔하게 발병하는 암 중의 하나이지만 지역에 따라 크게 차이가 나고 있으며 한국, 중국, 일본, 대만 등에서 높은 발생률을 보이는 질병이다. 그러나 간암 치료를 위한 효과적인 치료 방법이 없어 사망률이 높게 나타난다. 따라서 간암 치료를 위한 효과적인 치료 방법이 필수적이다. Granulin-Epithelin Precursor(GEP)는 간암에서 과발현되고 있으며 간암의 형성과 성장에 필요한 성장인자로 알려져 있다. 세포내에서 GEP 발현을 위해서 pcDNA3.1 벡터 내에 분비 서열 - FC 서열 - 전제 GEP 서열을 제한효소 HindIII와 XhoI을 사용하여 삽입하였다(pcDNA-GEP). 간암 세포주에서 pcDNA-GEP를 형질 주입한 후 발현되는 FC를 측정할 수 있는 ELISA kit를 이용하여 발현양을 확인하였다. CAPSID 프로그램을 이용하여 GEP에 대한 특이적인 siRNA를 위한 3가지 서열을 찾았고 이들을 합성하여(GEP-siRNA1,2,3) GEP 발현 억제 효과를 확인하였다. GEP-siRNA1,2,3 중에서 GEP-siRNA1이 가장 우수한 GEP 발현 억제 효능을 확인하였다. 따라서 siRNA의 단기간 유전자 발현 억제와 불안정성을 보완하기 위해 H1/TO 프로모터가 있는 벡터 내에 GEP-siRNA1서열을 이용하여 플라스미드 형태의 shRNA를 합성하였다. Hep3B세포에 GEP-shRNA를 형질 주입하여 GEP의 발현 억제를 통해 간암 세포의 성장이 저해되는 것을 확인 하였다. Balb/c nude mice의 대퇴부에 Hep3B세포 1X107 cells/ml을 주입하여 종양이 형성된 것을 확인한 후 GEP-shRNA와 negative control로 Luciferase-shRNA를 각각 30ug intratumoral injection하고 50mV 전압으로 8번 전기충격을 주었다. GEP-shRNA를 injection한 것이 Luciferase-shRNA 보다 종양의 성장을 저해하는 것을 확인하였다.
Hepatocellular carcinoma (HCC) is the fifth most common cancer in the world. However, still little is known about the molecular mechanism of HCC development, progression and effective therapeutic method yet. Recently, grannulin-epithelin precursor (GEP) has been reported as a novel growth factor tha...
Hepatocellular carcinoma (HCC) is the fifth most common cancer in the world. However, still little is known about the molecular mechanism of HCC development, progression and effective therapeutic method yet. Recently, grannulin-epithelin precursor (GEP) has been reported as a novel growth factor that can control the HCC cell proliferation. Using CAPSID program, we designed three small interfering RNAs (siRNAs) which targets GEP gene (GEP-siRNA1, GEP-siRNA2, and GEP-siRNA3) and examined their tumor regression as well as cell proliferation suppression effect. GEP-siRNA1 showed the strongest anti-cell proliferative effects among GEP-siRNAs in a time dependant manner. To increase the bio-stability of siRNA, we also constructed short hairpin RNA (shRNA) using an H1/TO promoter with the same sequences of GEP-siRNA1 (GEP-shRNA). The GEP-shRNA showed decreasing an expression level of GEP and tumor cell proliferation through arresting G2/M stage. Furthermore, the GEP-shRNA showed a significant tumor growth inhibition effect after intratumoral injection into tumor bearing Balb/C nude mice. These results provides the first tools of RNA interference for GEP as an approach for the suppression of HCC cell proliferation as a promising target molecule for HCC treatment.
Hepatocellular carcinoma (HCC) is the fifth most common cancer in the world. However, still little is known about the molecular mechanism of HCC development, progression and effective therapeutic method yet. Recently, grannulin-epithelin precursor (GEP) has been reported as a novel growth factor that can control the HCC cell proliferation. Using CAPSID program, we designed three small interfering RNAs (siRNAs) which targets GEP gene (GEP-siRNA1, GEP-siRNA2, and GEP-siRNA3) and examined their tumor regression as well as cell proliferation suppression effect. GEP-siRNA1 showed the strongest anti-cell proliferative effects among GEP-siRNAs in a time dependant manner. To increase the bio-stability of siRNA, we also constructed short hairpin RNA (shRNA) using an H1/TO promoter with the same sequences of GEP-siRNA1 (GEP-shRNA). The GEP-shRNA showed decreasing an expression level of GEP and tumor cell proliferation through arresting G2/M stage. Furthermore, the GEP-shRNA showed a significant tumor growth inhibition effect after intratumoral injection into tumor bearing Balb/C nude mice. These results provides the first tools of RNA interference for GEP as an approach for the suppression of HCC cell proliferation as a promising target molecule for HCC treatment.
AI-Helper
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.