고도로 정제된 안전한 plasmid DNA에 대한 수요는 기본적인 분자 생물학에서 뿐만 아니라, 생명 공학과 의학 분야에서 계속해서 증가하고 있다. 본 연구에서는 기존의 alkaline lysis 방법 보다 편리한 plasmid DNA 정제 방법을 개발하였다. 첫 번째, 앞서 본 연구실에서 보고한 바 있는 RNase 대용의 활성탄을 사용해 다양한 크기의 단백질을 제거할 수 있었다. 두 번째, plasmid DNA를 생물체에 투여할 때 문제가 되는 endotoxin은 butanol을 처리하여 간단히 제거하였다. 세 번째, RNA 정제 시 사용하는 guanidine을 처리하여 phenol/chloroform을 대체하였는데, 그 결과 유기용매의 사용을 최소화하면서 plasmid DNA를 정제할 수 있었다. 마지막으로 membrane filter를 이용하여 plasmid DNA 정제 시 사용되는 염을 제거하였다. 본 연구를 통해 plasmid DNA 정제 전 과정에 ...
고도로 정제된 안전한 plasmid DNA에 대한 수요는 기본적인 분자 생물학에서 뿐만 아니라, 생명 공학과 의학 분야에서 계속해서 증가하고 있다. 본 연구에서는 기존의 alkaline lysis 방법 보다 편리한 plasmid DNA 정제 방법을 개발하였다. 첫 번째, 앞서 본 연구실에서 보고한 바 있는 RNase 대용의 활성탄을 사용해 다양한 크기의 단백질을 제거할 수 있었다. 두 번째, plasmid DNA를 생물체에 투여할 때 문제가 되는 endotoxin은 butanol을 처리하여 간단히 제거하였다. 세 번째, RNA 정제 시 사용하는 guanidine을 처리하여 phenol/chloroform을 대체하였는데, 그 결과 유기용매의 사용을 최소화하면서 plasmid DNA를 정제할 수 있었다. 마지막으로 membrane filter를 이용하여 plasmid DNA 정제 시 사용되는 염을 제거하였다. 본 연구를 통해 plasmid DNA 정제 전 과정에 원심분리기를 사용하지 않고 정제 과정을 간편화 하였으며, 현재 대장균 배양액 10 ml 까지 정제가 가능했다. 이렇게 얻어진 plassmid DNA는 제한효소 처리, ligase 처리, transformation 과정이 포함된 recombination DNA 제작에 사용할 수 있었다. 요약하면, rcombinant DNA 제작, 유전자 치료, DNA 백신을 위해 필요한 plasmid DNA를 편리하고 실용적으로 얻게 되었다. Guanidine을 이용한 plasmid DNA의 정제 방법은 향후 plasmid DNA 정제의 기계화에도 일조할 것으로 사료된다.
고도로 정제된 안전한 plasmid DNA에 대한 수요는 기본적인 분자 생물학에서 뿐만 아니라, 생명 공학과 의학 분야에서 계속해서 증가하고 있다. 본 연구에서는 기존의 alkaline lysis 방법 보다 편리한 plasmid DNA 정제 방법을 개발하였다. 첫 번째, 앞서 본 연구실에서 보고한 바 있는 RNase 대용의 활성탄을 사용해 다양한 크기의 단백질을 제거할 수 있었다. 두 번째, plasmid DNA를 생물체에 투여할 때 문제가 되는 endotoxin은 butanol을 처리하여 간단히 제거하였다. 세 번째, RNA 정제 시 사용하는 guanidine을 처리하여 phenol/chloroform을 대체하였는데, 그 결과 유기용매의 사용을 최소화하면서 plasmid DNA를 정제할 수 있었다. 마지막으로 membrane filter를 이용하여 plasmid DNA 정제 시 사용되는 염을 제거하였다. 본 연구를 통해 plasmid DNA 정제 전 과정에 원심분리기를 사용하지 않고 정제 과정을 간편화 하였으며, 현재 대장균 배양액 10 ml 까지 정제가 가능했다. 이렇게 얻어진 plassmid DNA는 제한효소 처리, ligase 처리, transformation 과정이 포함된 recombination DNA 제작에 사용할 수 있었다. 요약하면, rcombinant DNA 제작, 유전자 치료, DNA 백신을 위해 필요한 plasmid DNA를 편리하고 실용적으로 얻게 되었다. Guanidine을 이용한 plasmid DNA의 정제 방법은 향후 plasmid DNA 정제의 기계화에도 일조할 것으로 사료된다.
Demand for highly purified and safe plasmid DNA has been continously increased in bioengineering and medical fields as well as in basic molecular biology. In this study, a more convenient method of plasmid DNA purification was developed than existing alkaline lysis method. First, activevated charcoa...
Demand for highly purified and safe plasmid DNA has been continously increased in bioengineering and medical fields as well as in basic molecular biology. In this study, a more convenient method of plasmid DNA purification was developed than existing alkaline lysis method. First, activevated charcoal which was reported by previous our study could remove the proteins of various size. Second, the endotoxin which causes trouble during injection of plasmid DNA into organism could be removed by simple treatment of butanol. Third, guanidine which has been used during RNA preparation substituted for phenol/chloroform, resulting in the minimized using of organic solvent during plasmid DNA purification. Finally, the salt which was used for plasmid DNA was removed by filtration using membrane. In this study, the purification of plasmid DNA was carried out without centrifugation, simplifying the purification process. At Present, purification of plasmid DNA for 10 ml of E. coli culture was possible. Plasmid DNA obtained in this way can be used for DNA recombinant study which includes restriction enzyme digestion, ligation, and transformation. In summary, plasmid DNA which is needed for recombination DNA, gene therapy, and DNA vaccine was obtained coveniently and practically. It is suggested that purification method of plasmid DNA using guanidine contribute to the mechanization of plasmid DNA purification in near future.
Demand for highly purified and safe plasmid DNA has been continously increased in bioengineering and medical fields as well as in basic molecular biology. In this study, a more convenient method of plasmid DNA purification was developed than existing alkaline lysis method. First, activevated charcoal which was reported by previous our study could remove the proteins of various size. Second, the endotoxin which causes trouble during injection of plasmid DNA into organism could be removed by simple treatment of butanol. Third, guanidine which has been used during RNA preparation substituted for phenol/chloroform, resulting in the minimized using of organic solvent during plasmid DNA purification. Finally, the salt which was used for plasmid DNA was removed by filtration using membrane. In this study, the purification of plasmid DNA was carried out without centrifugation, simplifying the purification process. At Present, purification of plasmid DNA for 10 ml of E. coli culture was possible. Plasmid DNA obtained in this way can be used for DNA recombinant study which includes restriction enzyme digestion, ligation, and transformation. In summary, plasmid DNA which is needed for recombination DNA, gene therapy, and DNA vaccine was obtained coveniently and practically. It is suggested that purification method of plasmid DNA using guanidine contribute to the mechanization of plasmid DNA purification in near future.
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