E.coli-Lactobacillus간 shuttle vector는 유산균의 surface-layer protein에 epitope가 anchor되어 유산균을 섭취 시 사람의 장내에서 vaccine으로써의 역할을 할 수 있도록 하기 위해, Weissella cibaria KLC140균주로부터 분리한 2.2 kb의 plasmid에 E.coli의 vector인 pGEM T vector를 연결하고 cmr유전자, bacteriocin 유전자, slp A유전자와 gfp 유전자를 삽입하여 완성하였다.
slp A 유전자에는 유산균 표면에 SLP A가 발현되었을 때 이를 확인하기 위해 gfp 유전자를 삽입하였으며, 추후 gfp 유전자 대신 epitope를 삽입할 것이다. gfp 유전자를 제거 했을 때 SLP와 epitope의 단백질이 발현되는 것을 확인하기 위하여 SLP A 단백질을 정제하여 antibody를 개발하였다.
삽입 후보 epitope으로는 임상에서 분리한 Salmonella를 이용하여 adhesion과 invasion에 관여하는 단백질을 target으로 잡았다. 이 들 중에서도 분비되지는 않으나, Salmonella 외부로 노출되는 단백질들인 Fim H, Fim A, Fim F와 Sip D을 선발하고, 6종의 Salmonella strain에서 PCR을 통해 이 들 각각의 유전자를 얻어 냈다. 얻어진 유전자는 pGEM T vector에 클로닝하여 각각의 ...
E.coli-Lactobacillus간 shuttle vector는 유산균의 surface-layer protein에 epitope가 anchor되어 유산균을 섭취 시 사람의 장내에서 vaccine으로써의 역할을 할 수 있도록 하기 위해, Weissella cibaria KLC140균주로부터 분리한 2.2 kb의 plasmid에 E.coli의 vector인 pGEM T vector를 연결하고 cmr유전자, bacteriocin 유전자, slp A유전자와 gfp 유전자를 삽입하여 완성하였다.
slp A 유전자에는 유산균 표면에 SLP A가 발현되었을 때 이를 확인하기 위해 gfp 유전자를 삽입하였으며, 추후 gfp 유전자 대신 epitope를 삽입할 것이다. gfp 유전자를 제거 했을 때 SLP와 epitope의 단백질이 발현되는 것을 확인하기 위하여 SLP A 단백질을 정제하여 antibody를 개발하였다.
삽입 후보 epitope으로는 임상에서 분리한 Salmonella를 이용하여 adhesion과 invasion에 관여하는 단백질을 target으로 잡았다. 이 들 중에서도 분비되지는 않으나, Salmonella 외부로 노출되는 단백질들인 Fim H, Fim A, Fim F와 Sip D을 선발하고, 6종의 Salmonella strain에서 PCR을 통해 이 들 각각의 유전자를 얻어 냈다. 얻어진 유전자는 pGEM T vector에 클로닝하여 각각의 염기서열을 분석하였으며, S. typhimurium과 S. enteritidis에서 96%의 높은 상동성을 나타냄을 확인하였다.
E.coli-Lactobacillus간 shuttle vector는 유산균의 surface-layer protein에 epitope가 anchor되어 유산균을 섭취 시 사람의 장내에서 vaccine으로써의 역할을 할 수 있도록 하기 위해, Weissella cibaria KLC140균주로부터 분리한 2.2 kb의 plasmid에 E.coli의 vector인 pGEM T vector를 연결하고 cmr유전자, bacteriocin 유전자, slp A유전자와 gfp 유전자를 삽입하여 완성하였다.
slp A 유전자에는 유산균 표면에 SLP A가 발현되었을 때 이를 확인하기 위해 gfp 유전자를 삽입하였으며, 추후 gfp 유전자 대신 epitope를 삽입할 것이다. gfp 유전자를 제거 했을 때 SLP와 epitope의 단백질이 발현되는 것을 확인하기 위하여 SLP A 단백질을 정제하여 antibody를 개발하였다.
삽입 후보 epitope으로는 임상에서 분리한 Salmonella를 이용하여 adhesion과 invasion에 관여하는 단백질을 target으로 잡았다. 이 들 중에서도 분비되지는 않으나, Salmonella 외부로 노출되는 단백질들인 Fim H, Fim A, Fim F와 Sip D을 선발하고, 6종의 Salmonella strain에서 PCR을 통해 이 들 각각의 유전자를 얻어 냈다. 얻어진 유전자는 pGEM T vector에 클로닝하여 각각의 염기서열을 분석하였으며, S. typhimurium과 S. enteritidis에서 96%의 높은 상동성을 나타냄을 확인하였다.
In order for the epitope to be anchored at the surface-layer protein of lactobacillus and for the lactobacillus to play the role of vaccine inside the intestines of human body when it is taken in, the shuttle vector between E. coli and Lactobacillus containing the pGEM T vector, which is the vector ...
In order for the epitope to be anchored at the surface-layer protein of lactobacillus and for the lactobacillus to play the role of vaccine inside the intestines of human body when it is taken in, the shuttle vector between E. coli and Lactobacillus containing the pGEM T vector, which is the vector of E. coli, the plasmid of 2.2 kb separated from the Weissella cibaria KLC140 strain and by inserting the cmr gene, bacteriocin gene, slp A gene, and gfp gene was constructed.
The gfp gene was inserted into the slp A gene to confirm the expression of SLP A when it is expressed on the surface of lactobacillus. The antibody was developed by refining the SLP A protein in order to check that the protein of SLP and epitope is expressed when the gfp gene is removed.
For the epitope which is the candidate for insertion, the protein involving in the adhesion and invasion was made as the target by using the Salmonella separated in clinical trials. Of these, Fim H, Fim A, Fim F, and Sip D, which are the protein exposed to the exterior of Salmonella though not secreted, were selected, and the genes of each of them were obtained through PCR from 6 kinds of Salmonella strain. The cloning of the obtained genes was conducted on the pGEM T vector, and the base sequence of each of them was analyzed. In addition, it was identified that high homogeny of 96% was shown in S. typhimurium and S. enteritidis.
In order for the epitope to be anchored at the surface-layer protein of lactobacillus and for the lactobacillus to play the role of vaccine inside the intestines of human body when it is taken in, the shuttle vector between E. coli and Lactobacillus containing the pGEM T vector, which is the vector of E. coli, the plasmid of 2.2 kb separated from the Weissella cibaria KLC140 strain and by inserting the cmr gene, bacteriocin gene, slp A gene, and gfp gene was constructed.
The gfp gene was inserted into the slp A gene to confirm the expression of SLP A when it is expressed on the surface of lactobacillus. The antibody was developed by refining the SLP A protein in order to check that the protein of SLP and epitope is expressed when the gfp gene is removed.
For the epitope which is the candidate for insertion, the protein involving in the adhesion and invasion was made as the target by using the Salmonella separated in clinical trials. Of these, Fim H, Fim A, Fim F, and Sip D, which are the protein exposed to the exterior of Salmonella though not secreted, were selected, and the genes of each of them were obtained through PCR from 6 kinds of Salmonella strain. The cloning of the obtained genes was conducted on the pGEM T vector, and the base sequence of each of them was analyzed. In addition, it was identified that high homogeny of 96% was shown in S. typhimurium and S. enteritidis.
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