간암세포에서 암 특이적 항원 B7-H3와 그에 대한 항체 NPB40의 기능 확인에 대한 연구 Validation of tumor-specific antigen B7-H3 and its cognate antibody NPB40 in Hepatocellular carcinoma원문보기
Oncofetal antigen은 발달중인 배아나 암세포 혹은 만능 줄기세포에서 특징적으로 관찰되는 항원이다. 성인 조직에서는 굉장히 희소하게 나타나는 그 특성에 의해 Oncofetal antigen은 암의 진단이나 치료의 대상으로 사용된다. 이전 연구에서 우리는 간암세포를 포함한 암세포에서 높게 발현하는 B7-H3를 target하는 monoclonal 항체인 NPB40을 만들고 그 기능을 확인했다. 이 논문에서는 이전 연구를 바탕으로 간암세포에서 B7-H3항원의 기능과 그에 대한 NPB40의 치료 효과를 확인하고자 했다. B7-H3의 기능 확인을 위해 SNU-449간암세포에서 CRISPR-Cas9을 통해 B7-H3의 ...
Oncofetal antigen은 발달중인 배아나 암세포 혹은 만능 줄기세포에서 특징적으로 관찰되는 항원이다. 성인 조직에서는 굉장히 희소하게 나타나는 그 특성에 의해 Oncofetal antigen은 암의 진단이나 치료의 대상으로 사용된다. 이전 연구에서 우리는 간암세포를 포함한 암세포에서 높게 발현하는 B7-H3를 target하는 monoclonal 항체인 NPB40을 만들고 그 기능을 확인했다. 이 논문에서는 이전 연구를 바탕으로 간암세포에서 B7-H3항원의 기능과 그에 대한 NPB40의 치료 효과를 확인하고자 했다. B7-H3의 기능 확인을 위해 SNU-449간암세포에서 CRISPR-Cas9을 통해 B7-H3의 녹아웃을 진행했으며 그 발현 감소를 웨스턴 블랏과 NPB40을 이용한 플로우 사이토메트리를 통해 확인했다. 녹아웃 세포에서는 세포 생존, 분열, migration 이나 전이와 같은 암 형성과 관련된 여러가지 신호전달이 감소함을 확인됐다. 녹아웃 세포에서 adhesion marker가 발현 감소된 것과는 달리 ECM에 대한 adhesion은 감소하지 않았다. 반면에 세포의 spreading과 세포간의 adhesion은 감소한 것으로 관찰됐다. 비록 세포의 분열과 migration은 변화를 보이지 않았지만, 세포의 생존과 apoptosis저항성은 녹아웃에 의해 크게 감소했다. 또한 B7-H3의 녹아웃은 다른 immune checkpoint분자들의 발현과 NK세포에 대한 세포독성 저항성을 감소시켰다. 이런 녹아웃세포에서의 결과를 기반으로 NPB40에 의한 세포 생존과 NK 세포독성을 확인했으나 NPB40의 처리는 간암 세포의 세포 생존이나 NK-세포 독성에 직접적인 영향은 주지 않는 것으로 확인됐다. 반대로, 쥐-인간 키메라 NPB40항체를 이용한 ADCC(항체 기반 세포독성)의 유도는 유효한것으로 나타났다. 최종적으로 간암 세포 xenograft 모델에서 NPB40의 처리는 암의 성장을 감소시켰으며, 이는 NPB40항체가 치료 목적으로 사용될 잠재력을 가지고 있음을 시사한다.
Oncofetal antigen은 발달중인 배아나 암세포 혹은 만능 줄기세포에서 특징적으로 관찰되는 항원이다. 성인 조직에서는 굉장히 희소하게 나타나는 그 특성에 의해 Oncofetal antigen은 암의 진단이나 치료의 대상으로 사용된다. 이전 연구에서 우리는 간암세포를 포함한 암세포에서 높게 발현하는 B7-H3를 target하는 monoclonal 항체인 NPB40을 만들고 그 기능을 확인했다. 이 논문에서는 이전 연구를 바탕으로 간암세포에서 B7-H3항원의 기능과 그에 대한 NPB40의 치료 효과를 확인하고자 했다. B7-H3의 기능 확인을 위해 SNU-449간암세포에서 CRISPR-Cas9을 통해 B7-H3의 녹아웃을 진행했으며 그 발현 감소를 웨스턴 블랏과 NPB40을 이용한 플로우 사이토메트리를 통해 확인했다. 녹아웃 세포에서는 세포 생존, 분열, migration 이나 전이와 같은 암 형성과 관련된 여러가지 신호전달이 감소함을 확인됐다. 녹아웃 세포에서 adhesion marker가 발현 감소된 것과는 달리 ECM에 대한 adhesion은 감소하지 않았다. 반면에 세포의 spreading과 세포간의 adhesion은 감소한 것으로 관찰됐다. 비록 세포의 분열과 migration은 변화를 보이지 않았지만, 세포의 생존과 apoptosis저항성은 녹아웃에 의해 크게 감소했다. 또한 B7-H3의 녹아웃은 다른 immune checkpoint분자들의 발현과 NK세포에 대한 세포독성 저항성을 감소시켰다. 이런 녹아웃세포에서의 결과를 기반으로 NPB40에 의한 세포 생존과 NK 세포독성을 확인했으나 NPB40의 처리는 간암 세포의 세포 생존이나 NK-세포 독성에 직접적인 영향은 주지 않는 것으로 확인됐다. 반대로, 쥐-인간 키메라 NPB40항체를 이용한 ADCC(항체 기반 세포독성)의 유도는 유효한것으로 나타났다. 최종적으로 간암 세포 xenograft 모델에서 NPB40의 처리는 암의 성장을 감소시켰으며, 이는 NPB40항체가 치료 목적으로 사용될 잠재력을 가지고 있음을 시사한다.
Oncofetal antigens are expressed specifically in developing embryos and cancer cells, but are also detected in pluripotent stem cells. They have been used as a diagnostic and therapeutic target in cancer treatment because their expression is rarely detected in normal adult tissues. Previously, we ge...
Oncofetal antigens are expressed specifically in developing embryos and cancer cells, but are also detected in pluripotent stem cells. They have been used as a diagnostic and therapeutic target in cancer treatment because their expression is rarely detected in normal adult tissues. Previously, we generated NPB40, one of the mAbs targeting B7-H3, which bound to various cancer cells, including hepatocellular carcinoma (HCC) cells, but not to normal primary cells. Based on previous research on NPB40 and its antigen B7-H3, in this paper, I validated the role of the B7-H3 antigen on cancer and the therapeutic effect of NPB40 on HCC. To validate the function of B7-H3, B7-H3 on SNU-449 HCC cells were knocked-out using CRISPR-Cas9 and decreased expression was checked by Western blot and flow cytometry. B7-H3 knock-out cells show decreased various signaling pathways that are related to tumorigenicity, such as survival, proliferation, migration, and metastasis. B7-H3 knock-out cells also show decreased adhesion markers, but cell adhesion to the ECM did not decrease. However, cell spreading and cell-to-cell adhesion were decreased in B7-H3 knock-out cells. Knock-out of B7-H3 did not affect cell proliferation and migration, but cell survival and apoptosis resistance were significantly decreased in B7-H3 knock-out cells. In addition, B7-H3 knock-out decreased the expression of other immune checkpoint molecules and the resistance to NK cell cytotoxicity. Based on the B7-H3 knock-out cell experiments, NPB40 was tested for cell survival and NK cytotoxicity, but NPB40 did not affect cell survival and NK cytotoxicity in HCC cells. Conversely, in case of research on Chimeric-NPB40, Chimeric-NPB40 increased antibody-dependent cell cytotoxicity (ADCC) in HCC cells. Finally, NPB40 treatment in the HCC xenograft model decreased tumor growth, suggesting the therapeutic effect of NPB40 in HCC.
Oncofetal antigens are expressed specifically in developing embryos and cancer cells, but are also detected in pluripotent stem cells. They have been used as a diagnostic and therapeutic target in cancer treatment because their expression is rarely detected in normal adult tissues. Previously, we generated NPB40, one of the mAbs targeting B7-H3, which bound to various cancer cells, including hepatocellular carcinoma (HCC) cells, but not to normal primary cells. Based on previous research on NPB40 and its antigen B7-H3, in this paper, I validated the role of the B7-H3 antigen on cancer and the therapeutic effect of NPB40 on HCC. To validate the function of B7-H3, B7-H3 on SNU-449 HCC cells were knocked-out using CRISPR-Cas9 and decreased expression was checked by Western blot and flow cytometry. B7-H3 knock-out cells show decreased various signaling pathways that are related to tumorigenicity, such as survival, proliferation, migration, and metastasis. B7-H3 knock-out cells also show decreased adhesion markers, but cell adhesion to the ECM did not decrease. However, cell spreading and cell-to-cell adhesion were decreased in B7-H3 knock-out cells. Knock-out of B7-H3 did not affect cell proliferation and migration, but cell survival and apoptosis resistance were significantly decreased in B7-H3 knock-out cells. In addition, B7-H3 knock-out decreased the expression of other immune checkpoint molecules and the resistance to NK cell cytotoxicity. Based on the B7-H3 knock-out cell experiments, NPB40 was tested for cell survival and NK cytotoxicity, but NPB40 did not affect cell survival and NK cytotoxicity in HCC cells. Conversely, in case of research on Chimeric-NPB40, Chimeric-NPB40 increased antibody-dependent cell cytotoxicity (ADCC) in HCC cells. Finally, NPB40 treatment in the HCC xenograft model decreased tumor growth, suggesting the therapeutic effect of NPB40 in HCC.
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