[논문]E.coli ATCC 21990이 생산하는 Aminoglycoside-3'-Phosphotransferase(APH(3')) 의 Densitometric TLC Assay

이정환; 김계원; 김기태; 나규흠; 김학주; 양주익; 김수일

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E.coli ATCC 21990이 생산하는 Aminoglycoside-3'-Phosphotransferase(APH(3')) 의 Densitometric TLC Assay
Densitometric TLC Assay of Aminoglycoside-3'-Phosphotransferase (APH(3')) Produced by E. coli ATCC 21990 원문보기

산업미생물학회지 = Korean journal of applied microbiology and biotechnology, v.19 no.4, 1991년, pp.372 - 379

이정환 (동아제약㈜연구소) , 김계원 (동아제약㈜연구소) , 김기태 (동아제약㈜연구소) , 나규흠 (동아제약㈜연구소) , 김학주 (동아제약㈜연구소) , 양주익 (동아제약㈜연구소) , 김수일 (서울대학교 농화학과)

초록
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E.coli ATCC 21990의 aminoglycoside-3'-phosphotransferase(APH(3'))의 신속하고 간편한 정량적 방법을 TLC densitometry를 이용하여 확립하였다. APH(3') 반응생산물인 3' 위치에 인산화된 kanamycin B(3'PKMB)는 silica gel plate에서 cnloroform-methanol-method-ammonia water (3:4:3) 전개용매로 반응물에서 분리되었고, 3'PKMB의 양은 ninhydrin으로 발색 후 densitometry로 측정하였다. APH(3')의 densitometric TLC assay는 좋은 정량적 결과와 재현성을 보였고, 3'-PKMB에 대한 감도는 1.56nmol이었으며 많은 시료의 분석이 한번의 실시로 가능하였다. 이 방법은 aminoglycoside 항생제의 불활화 효소 분석에 응용이 가능하리라 여겨진다.

Abstract ▼ AI-Helper

A rapid and simple quantitative assay method for aminoglycoside-3'- phosphotransferase (APH(3')) derived from E. coli ATCC 21990 was developed using the thin layer chromatographic densitometry, 3'-phosphorylated kanamycin B (3'-PKMB), product of APH (3') reaction, was separated from reaction mixtures by developing on the silica gel TLC plate with chloroform-methanol-ammonia water (3:4:3). The quantity of the 3'-PKMB was measured by densitometry after color development by ninhydrin method. Densitometric TLC assay for APH (3') was showed a good quantitative result and reproducibility. Sensitivity of this assay was 1.56 nmol of 3'-PKMB and could be analyzed many samples at same time. This method may be applicable for the analysis of inactivating enzymes of aminoglycoside antibiotics.

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