초록

해양으로부터 alginate lyase분해능이 있는 Pseudomonas sp.을 분리하여 이 균으로부터 alginate lyase 유전자를 E. coli에 cloning 하여 재조합 alginate lyase의 특성을 검토하였다. 재조합 alginate lyase는 E. coli에서 $50\%$ 이상이 expression되었다. 또한 생산된 재조합 alginate lyase는 세포외로의 분비가 없었으며, 전자현미경으로 확인한 결과 대부분이 inclusion body를 형성하지 않고 세포질내에서 soluble한 형태로 존재하고 있는 것으로 나타났다. 활성을 나타내는 최적 조건은 온도 $20^{\circ}C$, pH 7.0으로 보여주고 있으며 기질에 대한 Km값은 $0.4\%$, Vmax는 625 unit/mg이었다.

Abstract

We isolated a marine bacterium, Pseudomonas sp,, which could produce the enzyme of alginate lyase, and cloned the alginate lyase gene in Escherichia coli. The cloned DNA was overexpressed with approximately $50\%$ amount of total proteins. In addition, the expressed proteins were not secreted into the medium, and most of them existed in the cytoplasm by the soluble form, but not observed any inclusion body by TIM. For the optimum enzyme activity, temperature was $20^{\circ}C$, pH was 7.0, and Km and Vmax values of the enzyme were $0.4\%$ and 625 units/mg, respectively.

주제어

#recombinant alginate lyase   #plasmid   #Pseudomonas sp  

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