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문제 정의
- 지금까지 이 식물에 대한 연구로는, 홍화꽃 적 색소 carthamin의 효과적인 분리 및 화학구조 분석(13), 홍화순의 이화학적 특성 (1E), 홍화씨에서 N-feruloylserotonin의 분리 및 항산화홸섬 측청(1?) 듬이 보고되어 있을 뿌 셍리활성에 대한 체계적인 연구는 띠비한 실정이다. 이처럼 홍화의 각 부위별 생리활성과 그 구성성분이 다르기 때문에 본 연구에서는 홍화의 생리 활성 号질을 효과적으로 이 용하기 위한 수단으로 홍화씨, 순 및 꽃으로부터 수용성 및 메탄올 추출물을 분리 하여 이들의 총 폴리 페놀 화합물 함량 및 항산화 효과에 대하여 비교 검토하였다.
제안 방법
- 생체내에서 특히 뇌 조직이 다른조직에 비해 과산화 지질의 함량이 높게 나타나고, 이러한 과산화지■질에 관련된 질병의 발생빈도가 높은 것으로 알려져 있다. (27, 28) 따라서 생채내 다른 조직에 비해서 뇌 조직이] 서산화 스트레스에 더욱 민감하다고 추측되 어, 본 실험 에서는 brain microsome°l] Fe7ascorbate을 첨가하여 비효소적으로 과산화를 유도하여(20), 홍화씨, 순 및 꽃잎의수■夺성 및 메탄올 추출물의 영향을 조사한 결과를 Fig. 2에 나타내었다. 지질 과산화 먹제 정도는 홍화의 꽃잎 수용성 추출물(97.
- 이때 총 폴리 페놀 화합물은 tannic acid를 이용하여 작성한 표준 곡선으로부터 함량을 구하였다. Tannic acid를 이용한 표준 곡선은 tannic acid 1 mg音 50% 메탄올용액 1 mL에 녹이고 최종농도가 0, 50, 100, 150, 200 및 300 Hg/mL 용액이 되도록 취하여 위와 같은 방법으로 725 nm에서휸광도를 측정하여 작성하였다.
- Thiocyanate에 의한 항산화 활성 은 Nakatani외 방법 (22)을 변형하여 실시하였다. 즉 Linoleic acid(25 mg/mL in EtOH) 2.
- 蓍리 풰늘 화합물의 함량은 Folin-Denise (18)을 약간 변형 시켜 축정하였다. 즉, 홍화씨, 순 및 꽃의 수용성 추출물과 메탄올 주출물을 1 mg/mL에 녹인 다음 0.
- 67% TBA 1 mL를 가하여 혼한하고끓는 물 속에서 3。분간 가열하여 발■색시켰다. 냉각 후 535nm에서 흡광도를 측점하였으■며, 지질 과산화믜 억제율은 대조구의 홉광도에 대한 저 해율(知로 비교하였다.
- 시 판식 이로 사육한 6주련 의 Sprague-Daw ley 수컷 흰쥐 (Kyudo Experimental Animal Co Tosu, Japan)를 디에틸에테更로 가볍게 마취시킨 후 개복하여 적출한 brain을 냉가된 생리식볌수로 즉시 씻고 여과지로 쭐기를 훕수시 킨 다음 i.159-0 KCl-10 mM phosphate buffer (pH 7.4)를 가하여 homogenizere- 균질화시켰다. 이 묭액을 로 설정된 냉각원심분리기(Kubota, KR-20000 T, Tokyo, Japan)로 12,000 rpm에서 %분간 원심분리한 후 상징액을 丄겹의 거즈로 여과하고, 여액을 4°G로 설정된 초원심분리기 (Hitachi 55p-72, Tokyo, 岳归丑)애서 45,000 rpm으로 45분간 원심분리하여 침전된 분획 에 1.
- 1 mL를 혼합한 후 정확히 3분 후에 500 nm에서 흡광도를 축정하였다. 이때 활성의 비교를 위하여 합성 항산화제인 BHT를 시료첨가량의 1/10을 사용하여 BHT 첨가 구로 하였다.
- 축정하였다. 즉, 홍화씨, 순 및 꽃의 수용성 추출물과 메탄올 주출물을 1 mg/mL에 녹인 다음 0.2 mL 를 시험관에 취하고 증류수를 가하여 2 mL로 만든 후, 여기에 0, 2 mL Folin-ciocalteus phenol reagent를 첨가하여 잘 혼합한 후 3분간 실온에 방치하였다. 정확히 3분 후 NaaCOs 포화죵액 0.
- 홍화(GcE口mus tinctorius L.)의 씨, 순 및 꽃잎의 수용성 및 메탄올추출물에 대하여 由 u让ra 실험계에서 항산화 활성을 비교 검토하였다. 성장기 흰쥐의 뇌 microsome을 이용한 생체 막 지질 과산화 억제정도는 꽃잎 수묘성 추출물(97.
- 홍화의 씨 및 순은 건조시켜 잘게 분쇄하고 꽃잎은 二■대로 사용하여 중량비로 W배량의 증류수로 수욕 상에서 3시간 추출을 2회 반복한 용액을 진공농축하였다. 이 농축액을 书俨C에서 동결건조한 것을 수용성 추출물로 하였으며, 메탄올 추출물은 에서 추출하여 감압 놈 축하여 전 查험에 사용하였다.
대상 데이터
- 2주일 후 홍화순이 10 cm 정도 자란 거을 수확하여 동결건조시킨 후 실힘에 사용하였다.
- 홓화씨와 건조된 꽃잎은 2000년 6월에 경남 산청군 소재 흉화원에서 구입하여 사욤하였으며, 순은홍화찌를 3~4시간 물에 불린 후 재배기 (한민족 바이오 새싹 재배기 ) 내에 골고루 파종하여 빛 을 차단하고, 뚜껑 의 통기 구를 통하여 공기를 알맞게 王절하여 재배하였다. 2주일 후 홍화순이 10 cm 정도 자란 거을 수확하여 동결건조시킨 후 실힘에 사용하였다.
이론/모형
- 3. Antioxidative activity of water soluble and MeOH extract (2 mg/mL) from each part of safflower in the linoleic acid system as measured by thiocyanate method.
- 과산화 지질함량은 Wong 등의 낭법(2。)에 따라 50 mM Tris-HCl bufferipH 7.5) 1.5 竝에 각 시昱 용액 0.2 mL(6.0 mg/mL), brain microsome 분획 (1 mL중 1 mg의 단백질 함유) 0.1 mL, 0.1 mM ascorbate 0.1 mL 및 5 mM FeSO4 0.1 mL를 차레로 가하여 반응액을 잘 혼합한 후 37℃의 shaking water bath에서 1시간 incubation 시켜 과산화를 유도시켰다. 이때 대圣구는 시료를 첨가시키지 않고 위에서와 동일한 방법으로 실시하였다 Incubatione] 끌나면 Estcrbauer 등의 방넙(21)에 준하며 3 M trichloroacetic aci妲卜 2.
성능/효과
- Linoleic acid 산화 실험 계 에서는 홍화씨 메탄올 추출물과 홍화씨 수용성 주출물에서 비교적 높은 항산화 활성을 보였다. DPFH에 의한 수소공여 능은 특히 순의 0.1% 메탄올 추출물에서 매우 높은 수소공여작욤이 나타나 대 조구인 BHT와 거의 비슷한 수준의 항산화 활성을 보였다. 이들 추출물의 폴리페놀 화합물 함량은 홍화 꽃잎 수용성 및 MeOH 추출물은 12, 70% 및 8.
- 3과 같다. DPPH를 이용한 실험의 결과와 마찬가지로, 다른 추출물에 비해 홍화씨 메탄올 및 수용성 추출물에서 비교적 높은 항산화 활성을 나타내었다. 또한, 홍화씨 추출물콰 마찬가지로 홈화순 메탄올 추출물도 반믐 8임째까지 대조구에 비해 강한 항산화 활성을 보였다.
- 99%>씨 메탄올 추출물(6495%) 순으로 나타났다. Linoleic acid 산화 실험 계 에서는 홍화씨 메탄올 추출물과 홍화씨 수용성 주출물에서 비교적 높은 항산화 활성을 보였다. DPFH에 의한 수소공여 능은 특히 순의 0.
- DPPH를 이용한 실험의 결과와 마찬가지로, 다른 추출물에 비해 홍화씨 메탄올 및 수용성 추출물에서 비교적 높은 항산화 활성을 나타내었다. 또한, 홍화씨 추출물콰 마찬가지로 홈화순 메탄올 추출물도 반믐 8임째까지 대조구에 비해 강한 항산화 활성을 보였다. Linoleic acid 산화 실힘계에서 흥화씨의 높은 항산화 활성을 나타낸 것은 홍화씨에 \-feruloylserotonin이란 항산화불질이 존재하는 것과 무관하지 않는 것으로 사료된다(17).
- 1과 같다. 부위벌로 살펴보면, 농도 증가에 따라 그 효과도 상승하였으며 , 씨 에서 는 0.1% 메탄올 추출물>0.1% 수용성 추출물>0.05% 수용성 추출물>0.05% 메탄올 추출물 순이었으며, 꽃에서는 0.1% 수용성 추출물>0.05% 수욤성 추출물>0.1% 메탄올 추출물>005% 메탄올 추출물 순이 었고, 순에서는 0.1 % 메탄올 추출물>0.05% 메탄올 추출물>0.1% 수용성 추출물>0.05% 수용성 추출물 순으로 나타났다. 특히, 홍화 순의 0.
- 높았다. 생체막 microsome 지질 과산화 억제정도는 홍화 꽃잎추출물, linoleic acid 산화 실험계에서는 홍화씨 추출물에서 항산화 효과가 높았다.
- )의 씨, 순 및 꽃잎의 수용성 및 메탄올추출물에 대하여 由 u让ra 실험계에서 항산화 활성을 비교 검토하였다. 성장기 흰쥐의 뇌 microsome을 이용한 생체 막 지질 과산화 억제정도는 꽃잎 수묘성 추출물(97.19%>순 메탄올 주출물(8L 38%)>꽂잎메탄올 추출물(80.97%)>찌 수용성 추출물(68.86%)>순수용성 추출물(64.99%>씨 메탄올 추출물(6495%) 순으로 나타났다. Linoleic acid 산화 실험 계 에서는 홍화씨 메탄올 추출물과 홍화씨 수용성 주출물에서 비교적 높은 항산화 활성을 보였다.
- 이들은 phenolic hyHroxyl기를 가지기 때문에 단백질 및 기타 거대 분자들과 결합하는 성질을 가지며, 항산화 효과 등의 생 리 활성 기 능도 가진 다. 여 기 서 는 tannic acid 표준 곡선을 이묭하여 홍화의 씨, 순 및 꽃의 수용성 및 메탄올 추출물 중의 폴리페놀의 함량을 측정하였다(Table D 폴리 페놀의 함량은 홍화꽃밒 수용성 추출물이 1270%이였으며 홍화씨 메탄올 추출물은 12.34% 함유하고 있었으며 , 다음으로 홍화순 수용성 추출물이 8.75%, 홍화 꽃잎메탄올 추출물이 8.05%, 홍화씨 수용성 추출물이 6 96%, 홍화순 메탄올 추출물이 5.10% 순으로 나타났다. 국내산식 용성 식 품중의 총폴리 페놀 화합물 함량을 분석한 결과를 보면, 침.
- 1% 메탄올 추출물에서 매우 높은 수소공여작욤이 나타나 대 조구인 BHT와 거의 비슷한 수준의 항산화 활성을 보였다. 이들 추출물의 폴리페놀 화합물 함량은 홍화 꽃잎 수용성 및 MeOH 추출물은 12, 70% 및 8.05%, 홍화씨 수용성 및 메탄올 추출물은 6.96% 및 12.韵%, 홍화 순 주용성 추출물 및 메 탄올 추출물이 8.75% 및 510% 로 나타났다.
- 그러나, 이들 추출물에 비해 상용되고 있는 BHT는 강한 항산화 작용을 보였다. 이러한 결과는 홍화꽂잎 수용성 추출물이 폴리 페놀 화합물 함량과 brain 막 과산화 억제정도도 높았지 반, linoleic acid 산화 실험 계에서는 오히려 홍화씨 주출물에서 보다 높은 항산화 활성을 보였다.
- 이상의 결과로부터 항산화 활성의 정도를 나타내는 DPFH방법에서는 홍화 꽃잎, 순 및 씨에서 각각의 메탄올 추출물과 수용성 추출물에서 항산화 효과가 높았다. 생체막 microsome 지질 과산화 억제정도는 홍화 꽃잎추출물, linoleic acid 산화 실험계에서는 홍화씨 추출물에서 항산화 효과가 높았다.
- 2에 나타내었다. 지질 과산화 먹제 정도는 홍화의 꽃잎 수용성 추출물(97.19%)>순 메탄올 추출물(8L38%)>꽃잎 메탄올 추출물(80.97%)>씨 수룡성 추출물(6&86%)> 순 수용성 추출물(64.99%)>씨 메탄올 추출물(64.95%) 순으로 나타나 꽃잎의 수용성 추출물에서 강한 항산화 활성을 나타내었다.
- 05% 수용성 추출물 순으로 나타났다. 특히, 홍화 순의 0.1% 메탄올 추출물에서 대조구인 0.05% BHT 와 거의 비슷한 수준으로 메우 높은 수소공여작용이 나타났다. 홍화꽃잎의 경우.
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