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제안 방법
- 1998년 6월에서부터 1999년 7월 사이에 樹皮, 이끼, 토양 및 바위 위에 서식하는 地衣體를 현장에서 1차 동정을 실시하고 피도를 조사하였다. 피도는 20X 10cm의 方形 틀에 1x1cm 격자망을 부착하여 Muhle와 LeBlanc (1975)이 사용한 방법과 동일하게 조사하였다.
- 시험기간 중에 地衣體의 과도한 건조를 막기 위하여 2일 간격으로 1차 증류수를 표면이 젖을 정도로 충분히 살포하였으며, 地衣體 表 面의 가시피해의 발현 여부를 매일 관찰하였다. 2주간의 노출시험을 마친 地衣體는 생체중을 측정한 즉시 액화질소에 보관하여 오존에 대한 地衣類 의 반응을 조사하는데 필요한 시료로 사용하였다.
- 地衣體가 서식하고 있는 매체와 함께 조심스럽게 채취하여 실험실로 옮겨 구체적인 동정을 실시하였다. 실험실에서의 地衣體 동정은 우선 Park(1990) 의 분류방법과 일본 지의식물도감(吉村, 1974)을 참조하였으며, 보다 정확한 동정을 위하여 발색시약인 KOH(K), p-phenylenediamine(P), Ca (OC1)2(C)와 KC 혼합한 시약을 地衣體 皮層과 髓層(medular layer)에 직접 가하여 발색 반응 유무를 조사하는 Hale(1979)의 정색반응(spot test) 법을 이용하였다.
- 약 lOOmg의 地衣體를 5戒 DMSO(dimethylsulfoxide)에 침지시킨 후, 暗狀態에서 12시간 동안 보관하였다. 地衣體에서 광합성 색소가 완전히 추출되어 탈색된 것을 확인한 다음, UV spectrophotometer (UV-1601, Shimadzu)로 추출액의 홉광도를 415nm와 435nm 에서 측정하였다. 엽록소 파괴정도는 OD435nm/ OD415nm 비율로 표시하였다.
- 地衣體의 수용성 단백질 함량은 Von Arb와 Brunold(1989) 방법을 변형하여 측정하였다. 액화 질소로 동결된 약 300mg의 地衣體를 분말화하여 , 15mM MgCh가 함유된 0.
- rati。를 오염 지 수(pollution index : PI)로 나타내기 위하여 , 대조 地衣體에 대한 오존노출 地衣體의 비를 산출하여 전체 합으로 산출하였다(PI=MDAoz/MDAcon+HPCDoz /HPCDcon+ l/(RATIOoz/RATIOcon)). 그 결과, P.
- 백운산에서 가장 높은 출현 빈도를 나타낸 Parmeliaceae 屬의 P. austrosinense, P. tinctorum 및 C. braunsianaek 수지상 地衣類 R- yasudae (Fig. 3)를 오존에 노출한 다음 地衣體內의 수용성 단백질, MDA, HPCD, 엽록소 파괴 정도를 조사하였다(Table 2, Table 3).
- 시료를 ice bath에서 냉각 시켜 반응을 종료시킨 후 15,000rpm에서 30분간 원심 분리하였다. 상등액을 회수한 후에 532nm에서 흡광도를 측정하였으며 600nm에서 나타나는 비특이적 흡광도를 측정하여 이를 감한 흡광도를 MDA 함량 계산에 이용하였다. MDA 함량 계산은 extinction coefficient 155 mM-'em-'(Kwon et al.
- 수지상(fruticose) 地衣類를 중심으로 地衣類 분포조사를 실시하였고, 이 지역에 분포하는 地衣類 를 중심으로 대기오염원인 오존에 대한 地衣類 종류에 따른 민감 정도를 조사하였다.
- 오존노출을 위하여 오존발생기를 이용하여 고압산소가스를 방전 시켜 발생된 오존을 이용하였으며, 오존노출 생장 상의 농도조절과 두 생장상의 오존농도 모니터링은 photometric ozone analyzer(Model 400, API) 를사용하였다. 시험기간 중에 地衣體의 과도한 건조를 막기 위하여 2일 간격으로 1차 증류수를 표면이 젖을 정도로 충분히 살포하였으며, 地衣體 表 面의 가시피해의 발현 여부를 매일 관찰하였다. 2주간의 노출시험을 마친 地衣體는 생체중을 측정한 즉시 액화질소에 보관하여 오존에 대한 地衣類 의 반응을 조사하는데 필요한 시료로 사용하였다.
- 5)℃, 상대습도는 65~80%를 유지하였으며, 60“mol m-2 L의 光度로 하루 12시간(8 : 00~20 : 00) 照 射하였다. 오존노출시험은 地衣類가 생장상의 환경 조건에 적응할 수 있도록 배양 후 3일째에 실시하였으며, 하루 8시간씩(8 : 00-16 : 00) 200ppb 의 농도로 2주간 노출하였다. 대조용 생장 상의 오존 농도는 16~ 27ppb로 자연대기수준의 오존 농도보다 낮은 농도로 유지하였다.
- 이때 생장상의 온도는 25(±0.5)℃, 상대습도는 65~80%를 유지하였으며, 60“mol m-2 L의 光度로 하루 12시간(8 : 00~20 : 00) 照 射하였다. 오존노출시험은 地衣類가 생장상의 환경 조건에 적응할 수 있도록 배양 후 3일째에 실시하였으며, 하루 8시간씩(8 : 00-16 : 00) 200ppb 의 농도로 2주간 노출하였다.
- 전남 광양에 위치한 백운산(해발 1, 218m)에서 N 35° 01”~08”, E 127° 35”~40”의 약 84ktf 면적에 해당하는 지역의 地衣類 분포를 조사하였다. 조사 지점은 11개 지점으로 Fig.
- 0)로 단백질을 추출하였다. 추출한 시료 200以에 10% TCA(trichloroacetic acid) 100必, 를 첨가하여 10, 00gpm에서 10분간 원심분리 하였다. 침전물에 IM Tris-HCl buffer(pH 9.
대상 데이터
- 1. Simplified map of Backwoon mountain, Korea, presenting 11 locations where lichens were collected.
- 부착매처}(수피, 바위)와 함께 채집한 地衣體를 초순수로 세척하여 2대(오존노출용, 대조용)의 生 長箱(L600xW600xH700mm)에서 엽상체 地衣類 는 각각 5개체, 수지상 地衣類는 각각 25개체를 배양하였다. 이때 생장상의 온도는 25(±0.
- tinctorum, Certrelia braunsiana와 수지상 地衣類 Ramalina yasudae를 대상으로 실시하였다. 엽상체 地衣類 3종은 착생면적이 약 50而인 地衣體를 1개체로 간주하였으며, 수지상 地衣類는 크기가 작고 바위에 직립형으로 착생하므로 약 3cm 높이 이상의 地衣體 만을 선발하여 사용하였다.
- 오존노출시험은 백운산 지역에 분포하는 地衣類 중에서 비교적 동정이 쉽고 넓은 지역에 분포하는 엽상체 地衣類 P. austrosinense, P. tinctorum, Certrelia braunsiana와 수지상 地衣類 Ramalina yasudae를 대상으로 실시하였다. 엽상체 地衣類 3종은 착생면적이 약 50而인 地衣體를 1개체로 간주하였으며, 수지상 地衣類는 크기가 작고 바위에 직립형으로 착생하므로 약 3cm 높이 이상의 地衣體 만을 선발하여 사용하였다.
이론/모형
- 엽록소 파괴정도는 Garty et 冰.(1992)의 방법을 이용하여 조사하였다. 약 lOOmg의 地衣體를 5戒 DMSO(dimethylsulfoxide)에 침지시킨 후, 暗狀態에서 12시간 동안 보관하였다.
- 균질화된 시료를 15,000rpm에서 30분간 원심분리 시킨 후, 상등액의 OD값을 234nm에서 측정하였다. HPCD 의 함량은 extinction coefficient 2.74x 104cirf'(Fishwick과 Swoboba, 1977)을 적용하여 계산하였다.
- 상등액을 회수한 후에 532nm에서 흡광도를 측정하였으며 600nm에서 나타나는 비특이적 흡광도를 측정하여 이를 감한 흡광도를 MDA 함량 계산에 이용하였다. MDA 함량 계산은 extinction coefficient 155 mM-'em-'(Kwon et al., 1965)을 적용하여 실 시 하였다.
- MDA 함량은 비색법(Heath와 Packer, 19洗8)을 이용하여 측정하였다. 이를 위하여 액화 질소로 동결한 地衣體 약 100mg을 분말화시킨 다음, 2.
- 0) 200 以를 첨가하여 완전히 녹인 후에 동일한 조건으로 원심분리를 실시하였다. 상등액 50叫를 취하여 Bradford(1976)방법을 이용하여 수용성 단백질 함량을 측정하였으며, 단백질 정량을 위하여 BSA (bovine serum altaimin)을 표준물질로 이용하였다.
- 실험실에서의 地衣體 동정은 우선 Park(1990) 의 분류방법과 일본 지의식물도감(吉村, 1974)을 참조하였으며, 보다 정확한 동정을 위하여 발색시약인 KOH(K), p-phenylenediamine(P), Ca (OC1)2(C)와 KC 혼합한 시약을 地衣體 皮層과 髓層(medular layer)에 직접 가하여 발색 반응 유무를 조사하는 Hale(1979)의 정색반응(spot test) 법을 이용하였다.
- 대조용 생장 상의 오존 농도는 16~ 27ppb로 자연대기수준의 오존 농도보다 낮은 농도로 유지하였다. 오존노출을 위하여 오존발생기를 이용하여 고압산소가스를 방전 시켜 발생된 오존을 이용하였으며, 오존노출 생장 상의 농도조절과 두 생장상의 오존농도 모니터링은 photometric ozone analyzer(Model 400, API) 를사용하였다. 시험기간 중에 地衣體의 과도한 건조를 막기 위하여 2일 간격으로 1차 증류수를 표면이 젖을 정도로 충분히 살포하였으며, 地衣體 表 面의 가시피해의 발현 여부를 매일 관찰하였다.
- 조사하였다. 피도는 20X 10cm의 方形 틀에 1x1cm 격자망을 부착하여 Muhle와 LeBlanc (1975)이 사용한 방법과 동일하게 조사하였다.
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