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문제 정의
- 본 연구는 우유속에 포함된 비피더스균 ■그 자체와 발효유의 혈청 콜레스테롤 저하 효과를 알아보기 위하여 내산성과 내 담즙 산성이 높은 비피더스 K-7을 건강한 20대 우리나라 사람의 장에서 분리하여 첨가한 우유와 경구로 섭 취 했을 때 낮은 PH에서 급격히 감소하는 비피더스균의 생존율을 높이기 위해(20) 비피더스균을 캡슐화하여 첨가한 우유, 또한 그비피더스균으로 발효시킨 발효유를 횐쥐에게 급여하여 혈청콜레 스테 롤을 저 하시 키 는 효과를 알아보고자 시 행 하였다.
가설 설정
- 2) Values are expressed as mean±SD.
제안 방법
- 3주간의 실험 식 이를 급여 한 후 18시간 절식 시 킨 후 ether 로 마취시킨 후에 경동맥 방혈로 채혈하였으며 채혈된 혈액은 냉장고에 24시간 방치 후 3000rpm으로 20분간 원심 분리하여 혈청을 분리 후 즉시 총 콜레스테룰과 HDL-콜레스테롤을 측정하고 나머지는 냉동 보관하여 분석 에 사용하였다.
- 경구투여용 균주의 제조 : 대조구 CO와 처리구 MB, MM 및 FMe 가각 우유, 비피더스균이 첨가된 우유, 캡슐화된 비피 더 스균이 첨 가된 우유 및 비 피 더 스 발효유를 매일 2 mL씩 21 일간 경구투여하였다. 처리구 MB와 MM의 시료를 제조하기 위하여 TPYbroth에 계대 배양된 비피더스균을 0.
- 2이었다. 발효유는 5일에 한번씩 제조하였다.
- 5% 접종하여 37℃에서 24시간 혐기배양하였다. 발효유커드를 분산시 킨 후 경구투여하였다. 발효된 우유의 PH는 4.
- 생후 21일된 Sprague-Dawley계 흰쥐 수컷 32마리를 체중 200 g 정도로 성 장할 때까지 pellet 고형 사료(삼양식 품)로 적응시 킨 후 평균 체중(23 g)이 유사하도록 각 균마다 8마리씩 4군으로 나누어 완전임의 베치 하고 개별 사육하였으며 3주간 대조군(control: CO)에는 실험 식이와 우유 2 mL/일, 비피 더 스균을 첨가한 우유군(milk added with bifidobacteria: MB)에는 실험 식이오]- 비피더스균을 첨가한 우유 2 mL/일, 캡슐화된 비 피 더 스균(milk added with microencapsulated bi~ fidobacteria-' MM)을 첨가한 우유군에는 실험 식 이와 캡슐화된 비피 더스균을 첨가한 우유 2 mL/일, 발효유군(fermented milk by bifidobacteria: FM)에는 실험 식 이와 비피 더스균으로 발효된 발효유 2 mL/일을 급여하였다. 실험 식이 조성은 Table 2와 같다.
- 실험 식이 조성은 Table 2와 같다. 실험 식 이는 ad libitum으로 급여 하고 우유, 비피더스균을 녹인 우유, 캡슐화된 비피더스균을 첨가한 우유와 비 피 더 스 발효유는 매일 일정한 시간에 2 mL씩 oral jonde 로 경구 투여하였다.
- 8) 에 첨가하여 37℃에서 6시간 동안 용출시 킨 후 용출액을 1% peptone 용액으로 십 진 희석하였다. 적절한 배수로 희석된 시료는 TPY agar(25) 평 판에 도말하여 37℃에서 48시간 배 양한 후에 생성된 colony를 계수하였다. 균수는 시료 1 mL(g) 당 colony forming unit(CFU)로 계 산하였다.
- 쥐에 투여된 비피더스 균수 측정 : 쥐에 투여된 균수를 계수하기 위하여 처리구 MB와 처리구 FMe 1% peptone 용액에 십진 희석하였다. 처리구 MMe 캡슐화된 비피더스균 0.
- 일간 경구투여하였다. 처리구 MB와 MM의 시료를 제조하기 위하여 TPYbroth에 계대 배양된 비피더스균을 0.2%를 접종하여 37℃에서 24시간 현기 배양하였다. 처리구 M职는배양액을 원심분리하여 얻은 비피더스균을 20% 탈지유에 분산 시켜 -20℃에서 냉동 보관된 비피더스균을 우유에 분산 시켜 쥐에게 경구투여하였다.
- 캡슐화된 비피더스균우유에 분산시킨 후 경구두여하였다. 처리구 MM의 비피더스 발효유를 제조하기 위하여 TPYbroth에 계대 배양된 비피더스균을 우유에 0.5% 접종하여 37℃에서 24시간 혐기배양하였다. 발효유커드를 분산시 킨 후 경구투여하였다.
- 처리구 M职는배양액을 원심분리하여 얻은 비피더스균을 20% 탈지유에 분산 시켜 -20℃에서 냉동 보관된 비피더스균을 우유에 분산 시켜 쥐에게 경구투여하였다. 처리구 MM의 캡슐화된 비피더스균을 제조하기 위하여 배양액을 원심분리한 후 0.4% yeast extract와 5% 탈지유를 함유한 생리식 염수 용액에 분산하였다. 분산액을 칼슘-alginate법으로 캡슐화한 후 polyTTysine 으로 coating하였다(20).
- 2%를 접종하여 37℃에서 24시간 현기 배양하였다. 처리구 M职는배양액을 원심분리하여 얻은 비피더스균을 20% 탈지유에 분산 시켜 -20℃에서 냉동 보관된 비피더스균을 우유에 분산 시켜 쥐에게 경구투여하였다. 처리구 MM의 캡슐화된 비피더스균을 제조하기 위하여 배양액을 원심분리한 후 0.
- 분산액을 칼슘-alginate법으로 캡슐화한 후 polyTTysine 으로 coating하였다(20). 캡슐화된 비피더스균우유에 분산시킨 후 경구두여하였다. 처리구 MM의 비피더스 발효유를 제조하기 위하여 TPYbroth에 계대 배양된 비피더스균을 우유에 0.
대상 데이터
- 공시 균주 : 20대의 건강한 성 인으로부터 BSI agar(21)와 Beerens' agar(22, 23)를 이용하여(Table 1) 비피더스균을 분리 하였으며 이 중 Bifidobacterium bifidum으로 동정 된 7균주 중에서 내산성 과 내 담즙성 이 높은 B. 硕血nK-7(24)을 공시 비피더스 균주로 선발하여 실험에 사용하였다.
데이터처리
- 3) Values with different letters with in a same column experimental groups are significantly different at p<0.05 by Duncan's multiple range test.
- 실험 결과는 SPSS program을 이용하여 통계 처리 하였으며 모든 결과는 평균과 표준편차(mean土SD)로 나타내었으며 각 실험 군의 평 균치 간의 통계 적 유의 성 은 F-test와 Duncan's multiple range test로 5% 유의수준에서 검증하였다.
이론/모형
- 혈청의 총 지질은 Fringe와 Dunn의 빙법 (26)■으로 측정하였고 혈청 중성지질, 인지질, 총 콜레스테롤고]"HimL-콜레스테롤은 효소법(아산제 약 kit)을 이 용해 측정하였다.
- 4% yeast extract와 5% 탈지유를 함유한 생리식 염수 용액에 분산하였다. 분산액을 칼슘-alginate법으로 캡슐화한 후 polyTTysine 으로 coating하였다(20). 캡슐화된 비피더스균우유에 분산시킨 후 경구두여하였다.
성능/효과
- 본 연구는 건강한 2。대 한국 성 인의 장에서 내산성과 내 담즙성 이 강한 비 피 더 스균을 분리 하여 비 피 더 스균의 혈청 콜레 스데 롤 저 하 효과를 알아보기 위하여 체 중 200 g정도 되 는 Sprague-Dawley종 횐쥐 숫컷을 대상으로 우유, 비피더스균을 첨가한 우유, 캡 슐화된 비 피 더 스균을 첨가한 우유와 비 피더스균에 의해 발효된 발효유를 투여한 결과 우유, 비피더스균을 첨가한 우유와 캡슐화된 비피더스균을 첨가한 우유를 투여한 실험군에서는 혈청 콜레스테롤 저하 효괴-가 나타나지 않았으나 비피더스 발효유를 먹 인 실험군에서는 혈청 콜레스테롤을 저하시키는 효과를 볼 수 있었으므로 혈청 콜레스테롤 저하 효과를 나타내는 것은 발효유에 있는 젗산균 3-자체가 아니라 발효유라는 결과를 얻었다.
- 따라서 본 실험 의 결과는 발효유의 혈 청 콜레 스테 롤을 낮추는 효과는 발효유 속의 비피더스균 자체보다는 발효유가더 효과적이라는 결과를 얻었다. 따라서 발효 중 생성되는 대사물질의 정확한 성분 규명을 위한 계속적인 연구의 필요성이 앞으로의 과제로 남아 있다.
- Rao 등(15)도 전유와 발효유의 메탄올 용해 물질을 취 에게 투입하여 혈청 콜레스테롤을 측정한 걸과 발효유에서 추출한 메탄올 용해물질이 혈청 콜레스테롤을 낮추는데 가장 효과적 이 었다. 또한 이 실험 에서 는 in vitro 실험 도 병 행 되 었는데 간조직 균질액의 콜레스테롤 합성을 측정한 결과 발효유의 경우 콜레스테롤 흡착이 많아 간조직의 콜레스테롤 수준은 발효유군이 탈지유군보다 낮있.다.
- 본 실험 에서도 대조군과 비피더스균을 첨가한 우유와 캡슐화된 젖산균을 첨가한 우유를 먹 인 군에서는 헐 청 콜레스테롤 저하 효과가 나타나지 않았는데 이는 발효유의 혈청 콜레스테롤을 낮추는 효과가 젖산균 그 자체보다는 우유가 발효되는 과정에서 생성된 대사물질일 가능성을 확인해 주고 있다. Rao 등(15)도 전유와 발효유의 메탄올 용해 물질을 취 에게 투입하여 혈청 콜레스테롤을 측정한 걸과 발효유에서 추출한 메탄올 용해물질이 혈청 콜레스테롤을 낮추는데 가장 효과적 이 었다.
- thermophilus 발효유에서 추출한 메탄올 용해물을 쥐에게 먹였을 때 혈청콜레스테롤이 낮아진다는 보고를 하였다. GilHIand 등(16)과 Rasic 등(17)은 Lactobacillus 균종을 담즙의 존재 하에 배 양되는 능력과 콜레스테롤 홉착능력을 비교하였고 Gilliland 등(16)은 돼지 에게 이 균종들을 투여한 결과 in 切7厂。에서 콜레스테롤흡착은 균의 배양조건이 혐기적이고 담즙이 있을 때에만 일어 났고 in I点r。에서 콜레스테롤 홉착능력 이 높을수록 돼지의 혈청콜레스테롤을 낮추는 효과가 큰 것으로 나타났다. 위의 연구에서는 乙 ac酒如湖us의 몇몇 종이 소화관의 콜레스테롤에 직접 작용해서 콜레스테롤에 직접 홉착함으로서 혈청의 콜레스테롤을 떨어뜨린다고 하였고 Mott 등(18)도 장내 무균상태인 돼지 에게 L.
- Gilliland 등(16)은 in uz'Z厂。에서 콜레스테롤 흡착 효과가 높은 Z. acidophilus를 돼지 에 게 입으로 투여 했을때 혈청 콜레스테롤의 효괴-가 있다는 보고를 했는데, 본 실험에서 비피더 스균을 첨가한 우유와 캡 슐화된 비 피 더 스균을 첨가한 우유는 효과가 나타나지 않았다.
- 균수는 시료 1 mL(g) 당 colony forming unit(CFU)로 계 산하였다. 처리 군 MB, MM 및 FM에서 매일 쥐 1마리 당 투여된 비피더스 균수는 각각 약 揷 CFU, 109 CFU 및 1010 CFU이었다
후속연구
- 효과적이라는 결과를 얻었다. 따라서 발효 중 생성되는 대사물질의 정확한 성분 규명을 위한 계속적인 연구의 필요성이 앞으로의 과제로 남아 있다.
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