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문제 정의
- 구절초의 함유성분으로는 flavonoid계의 linariii이 보 고되었다H Buddleia 如也如어서 분리되어진 linarin 의 생리활성으로는 진통과 해열작용을 검색하여 보고 되었다.' 실험적으로 구절초에서의 lina血의 함량이 높음이 확인되어 충분히 약용자원으로 활용할 가치가 있다고 판단되어& 저자등은 구절초의 성분분리실험을 하는 가운데 우선적으로 구절초의 메탄올추출물과 그것에서 주성분으로 분리된 linarin3] 생리활성 즉 항염증 작용, 해열작용 및 간보호작용을 검색하여 지견을 얻 어 보고하고자 한다.
제안 방법
- 사용된 시료는 MeOH Ex.(500 mgeg), linarin(100 ㎎/㎏), acetaminophen(AAE 200 ㎎/㎏)을 vehicle (DMSO : 玮0=3: 7)에 녹여 사용하였고, 대조군은 vehicle을 투여하였다. 각각의 시료를 경구투여한 후, 30분, 1, 2, 3, 4, 5시간 후에 체온을 측정하였고, 체온은 흰쥐의 직장에 온도계 삽입 후 45초 정도 후에 측정하였다.
- 본 실험에서 MeOH Ex., linarin, acetaminophene (AAP) 투여군이 모두 투여 30분 후부터 yeast에 의한 발열을 유의성 있게 감소시켰다. MeOH Ex 투여군은 전 시간에 걸쳐 Control group 보다 0.
- Arachidonic acid(AA» 이용한 염증반응의 실험8, 9- )각 군당 12마리의 ICR계 생쥐를 사용하였고, AA 처리 1시간 전에 대조군은 vehicle(DMSO : H2O =3 : 7)을 다른군은 시료를 투여하였다(PO). AA는 acetone 에 녹여(100 g/ml) 오른쪽 귀(2 m 以ear; 안쪽과 바깥 에 10 B)에 autopipette을 사용하여 국소적으로 적용 하였고 대조군에는 acetone을 적용하였다.
- Carrageenan 유도에 의한 부종 실험 - 채중 240±10 g의 흰쥐 Sprague-Dawley계의 8마리를 한군으로 하여 Winter101 등의 방법을 사용하여 부종실험을 실시하였다.
- 구절초 3 kg을 환류냉각장치가 부착된 추출용기를 이용하여 MeOH로 60℃에서 4시 간씩 3회 추출하고, 여과하여 여액을 수일간 방치한 후, 다시 여과하여 감압농축한 추출물 340 禮 얻었다. MeOH 추출액을 수일간 방치한 후 여과하여, 얻어진 침전물을 pyHdiii과 MeOH로 수회 재결정하여 linarin (4.2 g)을 얻어 1H-NMR을 측정하여 비교하고 아울러 표품과 TLC 전개하여 동일 Rf를 확인하여 동일물질 로 동정하였다. 성상은 미황색 결정으로 m.
- TPA(0-tetradecanoylphorlM)l 13-acetate) 염증 반응 실험8, 9)_ 각 군당 12마리의 icR계 생쥐를 사용 하였고, O-tetradecanoylphorbol 13-acetate(TPA) 는 acetone 에 녹여(200 p, g/mZ) 귀 당 4 씩(20 叫 오 른쪽 귀 안과 밖에 10 母)을, 대조군에는 acetone을 autopipette을 사용하여 국소적으로 적용하였다. 시료는 TR4 투여 30분 후에 경구투여하였고, 대조군은 vehicle을 투여하였다.
- (500 mgeg), linarin(100 ㎎/㎏), acetaminophen(AAE 200 ㎎/㎏)을 vehicle (DMSO : 玮0=3: 7)에 녹여 사용하였고, 대조군은 vehicle을 투여하였다. 각각의 시료를 경구투여한 후, 30분, 1, 2, 3, 4, 5시간 후에 체온을 측정하였고, 체온은 흰쥐의 직장에 온도계 삽입 후 45초 정도 후에 측정하였다.
- 사염화탄소 유도 간독성 실험 -Scheme 1과 같이 체중 20±2 g의 ICR계 생쥐 10마리를 한군으로 하여 시료를 2일간 투여하였다. 간 독성을 일으키기 위하여 1 m〃kg의 사염화탄소를 신선한 olive oil에 희석하여 경구투여하였다. 약물은 MeOH Ex.
- (500㎎/㎏), linarin(100 mg4<g), piroxicam (50㎎/㎏)를 vehicle(DMSO: 珏0=3:7)에 녹여 사용하였다. 부종은 1%-carrageenan 0.1 m〃rat를 피하 주사하여 유발시켰고, 발바닥의 용적을 측정하므로서 부종정도를 측정하였다. 각각의 결과에서 각 군의 평균(Vt)을 구하였고, 시료투여전 측정값(Vb)과 비교하여 그 변화량(AV)를 구하고, 시간과 변화량을 변수로 AUC를 얻었다.
- 사염화탄소 유도 간독성 실험 -Scheme 1과 같이 체중 20±2 g의 ICR계 생쥐 10마리를 한군으로 하여 시료를 2일간 투여하였다. 간 독성을 일으키기 위하여 1 m〃kg의 사염화탄소를 신선한 olive oil에 희석하여 경구투여하였다.
- TPA(0-tetradecanoylphorlM)l 13-acetate) 염증 반응 실험8, 9)_ 각 군당 12마리의 icR계 생쥐를 사용 하였고, O-tetradecanoylphorbol 13-acetate(TPA) 는 acetone 에 녹여(200 p, g/mZ) 귀 당 4 씩(20 叫 오 른쪽 귀 안과 밖에 10 母)을, 대조군에는 acetone을 autopipette을 사용하여 국소적으로 적용하였다. 시료는 TR4 투여 30분 후에 경구투여하였고, 대조군은 vehicle을 투여하였다. 약물은 MeOH Ex.
- 우리나라의 고산지역에서 널리 분포하는 구절초와 그 주성분인 linarine 분리하여 생리활성을 검색한 결과 다음과 같은 결과를 얻었다.
- 해열효과 실험”)-체중 220±10 g의 Sprague- Dawleye] 흰쥐의 dorsal region에 20% brewers yeast suspension(10 mZ/kg)을 투여하고(S.C), 4시긴후 체온을 측정하여 TC이상 증가한 것만을 사용하여 8마리 를 한군으로 하였다.
대상 데이터
- 약물은 MeOH Ex.(250 m以kg), linarin(50 mekg), silymarin(30 ㎎/㎏)를 DMS0 에 녹여 사용하였다.
- carrageenan 투여 30분 전에 흰쥐의 오른쪽 발바닥의 용同을 측정한 후 시료를 경구투여하였고, 약물은 MeOH Ex.(500㎎/㎏), linarin(100 mg4<g), piroxicam (50㎎/㎏)를 vehicle(DMSO: 珏0=3:7)에 녹여 사용하였다. 부종은 1%-carrageenan 0.
- P)을 사용하였다. X-carrageenan, acetyl salicylic acid, arachidonic add(5, 8, 11, 14-Eicosatetraenamide, free acid, 99%), brewers yeast, Dimethyl Sulfoxide (DMSO), piroxicam과 phoibol 12-myristate 고3-acetate (O-tetradecanoylphort)ol 13-acetate, TPA)는(이상 sigma chemical Co., USA)과 olive oil(shinyo pure chemical Co., JapanX 사용하였다. 또한 s-GOT s-GPT 측정 은 commercial kit(Asan Pharm.
- 시약 및 기구 - 추출용 용매는 1급 시약(E.P)을 사용하였다. X-carrageenan, acetyl salicylic acid, arachidonic add(5, 8, 11, 14-Eicosatetraenamide, free acid, 99%), brewers yeast, Dimethyl Sulfoxide (DMSO), piroxicam과 phoibol 12-myristate 고3-acetate (O-tetradecanoylphort)ol 13-acetate, TPA)는(이상 sigma chemical Co.
- 실험 동물 - 생쥐는 ICR계의 체중 20±2 g, 25±2 g, 흰쥐는 Sprague-Dawley계의 체중200±20 g, 240 ±10 g인 것을 사용하였고, 실험동물은 대한실험동물 (주에서 구입하였다. 사육 온도는 25±2℃였고 고형 사료(삼양사료Co.
- Seoul, Korea) 을 사용하였다. 실험기구로는Micrometer (Mitutoyo Corp., Tokyo, Japen; accuracy 0.01 mm), Digital Thermometer(Fluke, 50S), Plethysmometer(Ugo Basile, ComerioAerese 7150)를 사용하였다.
-
실험방법
실험재료 - 구절초 3 kg을 경동 약령시장에서 구입 하여 사용하였고, 표본은 삼육대학교 생약학교실어】(표 본번호 He-232305) 보관하고 있다.
데이터처리
- 1 m〃rat를 피하 주사하여 유발시켰고, 발바닥의 용적을 측정하므로서 부종정도를 측정하였다. 각각의 결과에서 각 군의 평균(Vt)을 구하였고, 시료투여전 측정값(Vb)과 비교하여 그 변화량(AV)를 구하고, 시간과 변화량을 변수로 AUC를 얻었다. AUC는 trapezoidal rule에 의해 구하였고, 각 군의 부종 억제 %는 다음 식을 사용하였다.
- )나 percentagee. 나타내었으며 유의 성 검정을 위해 ANOVA test를 실시하였고 정상군 혹은 다른 군과의 비교를 위해 Neuman-keul test를 실시하였고 p values는 0.05이하인 경우 유의성이 있다고 하였다.
이론/모형
- 각각의 결과에서 각 군의 평균(Vt)을 구하였고, 시료투여전 측정값(Vb)과 비교하여 그 변화량(AV)를 구하고, 시간과 변화량을 변수로 AUC를 얻었다. AUC는 trapezoidal rule에 의해 구하였고, 각 군의 부종 억제 %는 다음 식을 사용하였다.
- , JapanX 사용하였다. 또한 s-GOT s-GPT 측정 은 commercial kit(Asan Pharm. Co. Seoul, Korea) 을 사용하였다. 실험기구로는Micrometer (Mitutoyo Corp.
- 혈청 transaminase의 측정은 Reitman-Frankel법을 사용하였고, s-GOT s-GPT측정용 시약을 사용하였다.
성능/효과
- 따라서 구절초 메탄올 추출물이 항염증작용과 간보 호작용 및 해열작용이 있음을 확인하였고 그 주성분이 Unarin임을 확인하였다.
- MeOH Ex. 투여군에서 2시간후 부터에 유의성 있는 부종의 감소가 나타나는 것으로 보아 bradykinin과 serotonine의 억제, 혹은 substance P와의 작용 등에 의해 carrageenair유도성 염증의 초기상태에 효과가 있는 것으로 사료된다.
- 본 실험에서 대조군은 정상군에 비해 s-GOT s-GPT 수치가 유의성 있게 증가하여 CCI4에 의한 독성이 유발되었음을 알 수 있고, 양 성 대조군인 silymarin 투여군과 linarin 투여군, MeOH Ex. 투여군에서 대조군보다 s-GOT, s-GPT 수치가 유의성 있게 감소하였다. 특히 linarin 투여군과 MeOH Ex.
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