Ulex europaeus agglutinin I(UEA I), succinylated wheat germ agglutinin(sWGA), Griffonia simplicifolia lectin-I(GSL-I)을 이용하여 생쥐 부정소 조직내 당쇄의 분포를 조사하였다. 당쇄의 측쇄 말단의 $\alpha$-L-fucose 잔기에 특이적으로 결합하는 UEA I은 체부 및 미부 부정소를 제외한 두부 부정소 선단의 세정관 상피를 강하게 표지하였으나 관강은 중간 정도의 강도로 모두 표지되어 $\alpha$-L-fucose 잔기를 갖는 부정소 항원들은 부정소 선단부에서 주로 합성된 후 분비되는 것으로 추정된다. 이와 반대로 당쇄 말단의 $\alpha$-D-galactose 잔기에 특이적으로 결합하는 GSL-I은 두부 부정소를 제외한 체부와 미부 부정소 상피의 투명세포의 세포질과 섬모 및 기저세포를 표지하였다. 다당 사슬 및 복잡한 구조를 갖는 glycan의 당쇄의 N-acetyl-giucosamine 잔기에 특이적으로 결합하는sWCA는 부정소 부위별로 커다란 차이를 보이지 않았으나, 체부와 미부 부정소의 투명세포는 주세포에 비해 더 강하게 표지되어 sWGA 표지는 투명세포 기능분화의 표식자로 추측된다. UEA I 및 sWGA에 의한 관강의 표지 강도는 체부보다는 미부에서 약하게 관찰되어 미부 부정소 관강내에 $\alpha$-L-fucose 및 N-acetyl-glucosamine 잔기의 절단과 관련된 효소활성이 존재하는 것으로 추정된다. 요약하면 $\alpha$-L-fucose, $\alpha$-D-galactose, N-acetyl-glucosamine 잔기를 갖는 당쇄의 분포가 상피세포의 종류 및 부정소의 길이를 따라 차이를 보임을 확인하였다. 이는 정자의 성숙을 조절하는 부정소 각 절편 및 특정 절편 내 소관상피 세포의 기능적 분화를 대변하는 것으로 사료된다.
Ulex europaeus agglutinin I(UEA I), succinylated wheat germ agglutinin(sWGA), Griffonia simplicifolia lectin-I(GSL-I)을 이용하여 생쥐 부정소 조직내 당쇄의 분포를 조사하였다. 당쇄의 측쇄 말단의 $\alpha$-L-fucose 잔기에 특이적으로 결합하는 UEA I은 체부 및 미부 부정소를 제외한 두부 부정소 선단의 세정관 상피를 강하게 표지하였으나 관강은 중간 정도의 강도로 모두 표지되어 $\alpha$-L-fucose 잔기를 갖는 부정소 항원들은 부정소 선단부에서 주로 합성된 후 분비되는 것으로 추정된다. 이와 반대로 당쇄 말단의 $\alpha$-D-galactose 잔기에 특이적으로 결합하는 GSL-I은 두부 부정소를 제외한 체부와 미부 부정소 상피의 투명세포의 세포질과 섬모 및 기저세포를 표지하였다. 다당 사슬 및 복잡한 구조를 갖는 glycan의 당쇄의 N-acetyl-giucosamine 잔기에 특이적으로 결합하는sWCA는 부정소 부위별로 커다란 차이를 보이지 않았으나, 체부와 미부 부정소의 투명세포는 주세포에 비해 더 강하게 표지되어 sWGA 표지는 투명세포 기능분화의 표식자로 추측된다. UEA I 및 sWGA에 의한 관강의 표지 강도는 체부보다는 미부에서 약하게 관찰되어 미부 부정소 관강내에 $\alpha$-L-fucose 및 N-acetyl-glucosamine 잔기의 절단과 관련된 효소활성이 존재하는 것으로 추정된다. 요약하면 $\alpha$-L-fucose, $\alpha$-D-galactose, N-acetyl-glucosamine 잔기를 갖는 당쇄의 분포가 상피세포의 종류 및 부정소의 길이를 따라 차이를 보임을 확인하였다. 이는 정자의 성숙을 조절하는 부정소 각 절편 및 특정 절편 내 소관상피 세포의 기능적 분화를 대변하는 것으로 사료된다.
To characterize the difference in glycoconjugates of mouse epididymis, lectin labeling of the tissue section was conducted using Ulex europaeus agglutinin I(UEA I), succinylated wheat germ agglutinin(sWGA), and Griffonia simplicifolia lectin-I(GSL-I). UEA I which binds to outer $\alpha$-L...
To characterize the difference in glycoconjugates of mouse epididymis, lectin labeling of the tissue section was conducted using Ulex europaeus agglutinin I(UEA I), succinylated wheat germ agglutinin(sWGA), and Griffonia simplicifolia lectin-I(GSL-I). UEA I which binds to outer $\alpha$-L-fucose residue that is a terminal sugar of the side chain branched from oligosaccharide chain gave the labeling in the proximal caput epithelia exclusively. Lumen was commonly labeled in all of the organ. It suggested that the glycoconjugates bearing outer $\alpha$ -L-fucose residue were largely expressed in the initial segments ot epididymis and subjected to secretion. GSL-I which binds to terminal $\alpha$ -D-galactosyl residue of glycoconjugates gave the labeling in the cytoplasm of clear cells and basal cells, and cilia in corpus and cauda regions but not in the caput region. There was no vast difference in labeling pattern by sWGA which binds to N-acetyl-glucosamine residue among the epididymal regions. Clear cells in corpus and cauda epithelia showed more intense labeling by sWGA compared to principal cells, suggesting the functional specialization of this type of cells. The labeling intensities of luminal content by UEA I and sWGA decreased in cauda region compared to corpus region suggesting the presence of enzymatic activities responsible for processing the $\alpha$-L-fucose and N-acetyl-glucosamine residues from secreted glycoconjugates. In summary, the difference in glycoconjugates bearing the $\alpha$-L-fucose, $\alpha$-D-galactose, and N-acetyl-glucosamine residues according to the type of epithelial cells and epididymal segments suggests functional specialization and different roles of each segment in the processing of sperm surface antigens during the epididymal transit.
To characterize the difference in glycoconjugates of mouse epididymis, lectin labeling of the tissue section was conducted using Ulex europaeus agglutinin I(UEA I), succinylated wheat germ agglutinin(sWGA), and Griffonia simplicifolia lectin-I(GSL-I). UEA I which binds to outer $\alpha$-L-fucose residue that is a terminal sugar of the side chain branched from oligosaccharide chain gave the labeling in the proximal caput epithelia exclusively. Lumen was commonly labeled in all of the organ. It suggested that the glycoconjugates bearing outer $\alpha$ -L-fucose residue were largely expressed in the initial segments ot epididymis and subjected to secretion. GSL-I which binds to terminal $\alpha$ -D-galactosyl residue of glycoconjugates gave the labeling in the cytoplasm of clear cells and basal cells, and cilia in corpus and cauda regions but not in the caput region. There was no vast difference in labeling pattern by sWGA which binds to N-acetyl-glucosamine residue among the epididymal regions. Clear cells in corpus and cauda epithelia showed more intense labeling by sWGA compared to principal cells, suggesting the functional specialization of this type of cells. The labeling intensities of luminal content by UEA I and sWGA decreased in cauda region compared to corpus region suggesting the presence of enzymatic activities responsible for processing the $\alpha$-L-fucose and N-acetyl-glucosamine residues from secreted glycoconjugates. In summary, the difference in glycoconjugates bearing the $\alpha$-L-fucose, $\alpha$-D-galactose, and N-acetyl-glucosamine residues according to the type of epithelial cells and epididymal segments suggests functional specialization and different roles of each segment in the processing of sperm surface antigens during the epididymal transit.
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문제 정의
또한 식물성 lectin을 탐침으 로 이용하여 조직 내 특정 당쇄의 분포에 대한 추적이 가능 하다(Lis & Sharon, 1986). 본 연구는 생쥐의 부정소 부위별로 당쇄의 조직학적 분포를 조사하고자 하였다.
제안 방법
표지가 끝난 후 PBS로 2회 세척한 후 PBS : glycerol 혼합액으로 도포하여 습식표본 을 제작하였다. Epifluorescence microscope(BX50 Olympus, Japan)하에서 관찰하고 TMAK 400 film에 사진 기록하였다.
조직절편으로부터 파라핀을 제거한 후 수화과정을 거쳐 phosphate buffered saline(PBS)에 1시간 동안 정 치 하였다. TRITC 가 결합된 Ulex europaeus agglutinin I(UEA I), 이iccinylated wheat germ agglutinin(sWGA), 및 Griffonia simplicifolia lectin-I (GSL-I)(Vector Lab, Table 1)을 10 ~20 ㎍/ml 농도로 0.1% BSA를 함유한 PBS에 희석하였다. 희석된 렉틴용액을 슬라 이드 위에 도포한 후 상온의 습윤 조건에서 20분간 정치하였다.
희석된 렉틴용액을 슬라 이드 위에 도포한 후 상온의 습윤 조건에서 20분간 정치하였다. 렉틴 결합의 특이성을 확인하기 위해 0.2 M hapten sugars(Table 1)를 첨가한 렉틴 용액에서 동일한 방법으로 표 지를 시행하였다(Cummings, 1994). 표지가 끝난 후 PBS로 2회 세척한 후 PBS : glycerol 혼합액으로 도포하여 습식표본 을 제작하였다.
10% 중성포르말린 용액에서 24시간 동안 고정한 후 해부현미경하에서 두부, 체부, 미부 부정소로 분리하였다 (Bedford, 1975). 분리된 조직은 탈수와 파라핀 포매 과정을 거쳐 박편으로 제작하였다.
2 M hapten sugars(Table 1)를 첨가한 렉틴 용액에서 동일한 방법으로 표 지를 시행하였다(Cummings, 1994). 표지가 끝난 후 PBS로 2회 세척한 후 PBS : glycerol 혼합액으로 도포하여 습식표본 을 제작하였다. Epifluorescence microscope(BX50 Olympus, Japan)하에서 관찰하고 TMAK 400 film에 사진 기록하였다.
대상 데이터
생 후 3개월 된 ICR 계의 생쥐 수컷으로부터 부정소를 적 출하였다. 10% 중성포르말린 용액에서 24시간 동안 고정한 후 해부현미경하에서 두부, 체부, 미부 부정소로 분리하였다 (Bedford, 1975).
성능/효과
결론적으로 생쥐 부정소에서 부정소관의 길이를 따라 소 관 상피 및 관강 내 당잔기의 분포에 부위별 차이가 있음을 확인하였고 이는 정자의 성숙과 관련된 부정소관 상피의 분 비 및 흡수 기능의 분화를 대변하는 것으로 사료된다.
당쇄의 a-D-galactose 잔기에 결합하는 GSL-Ie UEA I의 결합 양상과는 반대의 결과를 보여 두부를 제외한 체부와 미 부 부정소 상피의 세포질에서 미약하게 표지되었다(Fig. 2 B, C, and D). 이는 소량의 말단 a-D-galactosyl 잔기가 부정소에 존재하거나 인접한 복잡한 올리고 당쇄에 의한 GSL-I 렉틴 결합의 hinderic inhibition에 의한 결과로 사료된다.
당쇄의 Macetyl-glucosamine 잔기에 결합하는 sWGA는 부 정소 부위별로 커다란 차이를 보이지 않았다. 두부 상피세포 의 골지체와 섬모가 중간 정도의 강도로 표지되었고(Fig. 3A and B), 체부 상피 세 포는 미 약하게 표지 되 었으나 섬모, 관강 내용물 및 정자는 강하게 표지되었다(Fig. 3C). 특징적으로 체부 부정소 상피의 투명세포가 주세포들에 비해 더 강하게 표지되었다(Fig.
3C)은 중간 강도로 표지되었다. 미부 부정 소의 표지 양상은 체부와 유사하였으나 관강의 표지 강도는 체부보다 감소하였다(asterisk in Fig. 3D).
2C)은 매우 미약하게 표지되었다. 미부 부정소 상피의 투명세포의 세포질(boxes in Fig. 2D)과 섬모(arrowheads in Fig. 2D)를 중간 강도로 표지되었고, 주세포는 미약하게 표지 되 었다(solid arrow in Fig. 2D). 관강은 매우 미 약하게 표지되 었다(asterisks in Fig.
, 1997). 이를 종합하면 부정 소 길이를 따라 부정소관 조직 내 당쇄의 분포의 변화 정도와 정자의 성숙의 단계가 상관성을 발견할 수 있다. 따라서 생 쥐의 경우 부정소관 내 당쇄의 분포에 기초하여 부정소를 두 부와 체부 및 미부 부정소 2구간으로 구분할 수 있을 것이다.
2B)은 표지되지 않았다. 체부 부정소 상피의 투명세포의 세포질(box in Fig. 2C)과 섬모(arrowheads in Fig. 2C) 및 기저세포(open arrows in Fig. 2C)를 중간 강도로 표지 되었고, 주세포는 미약하게 표지되었다(solid arrow in Fig. 2C). 관강(asterisk in Fig.
3C). 특징적으로 체부 부정소 상피의 투명세포가 주세포들에 비해 더 강하게 표지되었다(Fig. 3C, arrow). 투명세포는 Mglycan의 가공에 관여하는 골지체 기원의 중요한 효소인 alpha-mannosidase를 다량으로 발현한다(Igdoura et al.
후속연구
따라서 투명세포의 골지체에서 형성되는 복잡한 구조의 Mgly- cans 형성과정에서 당쇄 내에 Macetyl-glucosamine을 다량으 로 노출하고 있음을 짐작할 수 있다. sWGA에 의해 표지되는 항원이 투명세포의 기능적 분화를 나타내는 표식자로 체부 부정소에서 투명세포를 확인할 수 있는 수단으로 이용이 가 능할 것이다. 미부 부정소의 표지 양상은 체부와 유사하지만 세포질과 관강의 전반적인 결합 강도가 감소하는 것으로 미 루어 이 항원(들)의 주요 생성부위는 체부 부정소 투명세포 로 추측된다(Fig.
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