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문제 정의
- 양식넙치의 세균성 질병에 있어서는 복합약제 내성균의 의한 감염이 많이 나타나므로 치료 및 예방대책을 세우는데 많은 어려움 이 있는 실정이다. 본 연구에서는 제주도의 넙치 양식장에서 분리된 연쇄구균의 특성 및 연쇄구균에 의해 생성된 용혈소의 특성 등을 조사하였다.
제안 방법
- 병어에서 분리한 균의 약제 감수성 시험은 1.5% NaCl을 첨가한 BHIA에서 배양한 균을 멸균 생리식염수로 탁도를 MacFarland No. 0.5가 되게 조절하여 멸균 유리봉을 이용하여 1.5% NaCl을 첨가한 Muller-Hinton medium (Difco, USA)에 균일하게 도말한 후, disc 확산법으로 실험하였다. 실험에 사용한 약제는 ampicillin (10 fig), ciprofloxacin (5 fig), doxycycline (30 pg), gentamycin (10 pg), tetracycline(30 pg), erythromycin (15 pg), streptomycin (10pg) 및 oxytetracycline(30*g)을 사용하였다.
- 병어의 환부, 간, 비장, 혈액 및 신장을 각 부위별로 1 g 또는 1 mL씩 채취 및 homogenize하여 멸균해수로 10단계씩 희석시킨 후, 희석액 O.lmL씩을 BHIA배지에 평판 도말하여 30℃에서 3일 간 배양 후 생균수를 구하였다.
- 병어의 환부에서 분리한 연쇄구균을 BHI배지에서서 증균시켜 생리식염수로 현탁한 다음 2차례에 걸쳐 건강한 넙치 (전장 17~ 20 cm) 10미에 각각 1.2X109 cells/fish, 1.3X107cells/fish 농도로 복강에 O.lmL씩 주사하였고 대조구는 생리식염수를 O.lmL씩 복 강에 주사하여 300 L FRP 수조에 수용한 후 증상의 재현 여부를 통한 병원성을 확인하였다. 실험기간중 사료는 투여하지 않고 유 수식으로 하였고 사육수온은 22~25◎로 유지하였는데 시험기간중 증상을 보이는 넙치로부터 균의 재분리를 실시하였다.
- lmL씩 복 강에 주사하여 300 L FRP 수조에 수용한 후 증상의 재현 여부를 통한 병원성을 확인하였다. 실험기간중 사료는 투여하지 않고 유 수식으로 하였고 사육수온은 22~25◎로 유지하였는데 시험기간중 증상을 보이는 넙치로부터 균의 재분리를 실시하였다. 6
- 4t, 25℃, 37t 혹은 55t에서 배양한 후 그 혼합물을 2,000rpm에서 10분간 원심분리하였다. 양 적혈구을 첨가하지 않은 배양 상충액의 세포 부유액을 대조 상충액으로 하여 용혈반 응 현상을 측정하였다.
대상 데이터
- 2000년 8월과 10월의 2회에 걸쳐 제주도 일원 넙치 육상 양식장을 대상으로 연쇄구균에 감염되어 증상을 나타낸 평균 체중 약 200g의 넙치를 연쇄구균의 분리용 시험어로 사용하였고 각 장기에서 균 분리를 시도하였다 (Table 1).
- 5% NaCl을 첨가한 Muller-Hinton medium (Difco, USA)에 균일하게 도말한 후, disc 확산법으로 실험하였다. 실험에 사용한 약제는 ampicillin (10 fig), ciprofloxacin (5 fig), doxycycline (30 pg), gentamycin (10 pg), tetracycline(30 pg), erythromycin (15 pg), streptomycin (10pg) 및 oxytetracycline(30*g)을 사용하였다.
이론/모형
- 5% NaCl이 첨가된 brain heart infusion agar (BHIA, Difco)에 무균적으로 도말하여 30℃에서 24~28시간 배양하였다. 분리균은 Mac- Faddin(2000)의 방법에 따라 생물학적, 생화학적 성상 시험을 실시한 후, Bergey's manual of- systematic bacteriology (1984) 준하여 동정하였다.
성능/효과
- 7 % 이었다. 4t, 30분의 배양후는 147%이었고 배양시간이 60분과 90분에서는 활성값이 미약하게 증가됨을 볼 수 있었다. 용혈독소에 대한 온도 안정성에 관한 결과는 Fig.
- 8종의 항생제에 대한 감수성 시험결과에서는 ampicillin (10pg), ciprofloxacin(5 /jg), doxycycline(30 户g), gentamycin (10 pg) 등에 대해서는 감수성을 보였지만 tetracycline(30俸), erythromycin (15 fig), streptomycin (10 pg) 및 oxytetracycline(30/jg)에는 내 성을 보이는 것으로 조사되어 약제 내성이 있는 것이 많았다 (Table 3).
- 운동성은 보이지 않았고, oxidase와 catalase는 음성이고 gelatinee 가수분해가 일어나지 않았으나 argininee 가수분해가 일어났다. Indole, RS의 생성은 없었고, MR-VP시험에서는 MR에 양성을 보였고, VP에는 음성이었 다. O-F시험에서는 발효특성을 나타내었고 용혈성 시험에서는 g -용혈성을 나타내었다.
- 로 명명하였다. 각 장기에서의 생균수 측정에서는 환부에서 1.7X10, CFU/g으로 가장 높게 나타났고, 신장, 혈액, 뇌순으로 생균수가 검출되었다. 이는 Sohn et al.
- 이러한 결과는 Chun (1989)의 보고와 일치하지만, 본 감염어에서는 기저부위의 출혈이 다소 심한 특징을 보였다. 감염 넙치에서 분리된 균주의 형태는 연쇄상의 구균이었으며, gram 양성으로 운동성이 없었다. Indole 및 HzS는 생성되지 않았고 VP시험에서는 음성을 나타내었다.
- 감염어의 환부 및 각 장기별 생균수는 환부에서 1.7Xl(TCFU/g으 로 가장 높게 나타났으며, 신장에서는 4.1 X104CFU/g, 혈액 3.2X 103 CFU/g, 뇌 2.7X102CFU/g 순이었다 (Fig. 1).
- (Todd, 1938). 본 연구에서 분리된 0-용혈성 연쇄구균의 용혈소에 대한 특성은 50℃, 30분 배양후의 용혈활성은 빠르게 증가 되었고 최대값에 도달하였다. pH에 대한 용혈소의 활성은 pH 5.
- 제주도 각 지역의 넙치 양식장에서 채취한 감염어의 임상적 증상은 감염어 개체마다 약간의 차이를 보이는데 이상 유영을 보이면서 체색 흑화, 안구 돌출, 각막의 백탁, 아가미와 지느러미 기저 부위의 출혈 및 체표에 궤양의 형성을 볼 수 있었다. 본 질병에 감염된 넙치 양식장의 일일 폐사율은 약 5~7% 정도로 나타났다.
- 분리한 균주를 복강에 주사하여 10일간 병원성 시험한 결과에 서는 복강내 주사후 시험 I에서는 6일째부터 폐사가 일어나기 시작하여 10일 이내에 전량 폐사되었고 시험 II에서도 3일째부터 폐사가 시작되어 10일 이내에 전량 폐사되었다. 대조구에서는 폐사 가 일어나지 않았고, 또한 폐사어에서 본 균을 분리할 수 있었다 (Fig.
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