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문제 정의
- 금은화의 생리활성에서 간독성에 유효하다는 보고는 없 으며 , MeOH 추출물이 시염화탄소 유발 간손상에 유효함이 1차 검색에서 나타났으므로, 본 연구에서는 금은화 추출물과 각 분획물에 대한 간보호 효능을 확인하여 간질환 치료 유효성분 규명을 위한 기초적 정보를 얻고자 하였다.
- 본 실험에서는 CC14 투여로 인하여 증가된 A1P 활성에 대하여, 각 분획물이 미치는 영향을 검색하였다. 금은화의 각 분획물을 투여한 실험에서 EtOAc, BuOH, 물 분획이 각각 27.
제안 방법
- 약물 최종 투여후 18시간 동안 절식시킨 흰쥐를 ether로 마취시키고 복부 정중선에서 약간 오른쪽으로 절개하여 심 장에서 직접 채혈하고 3000rpm에서 20분간 원심분리를 하여 필요한 혈청을 분리하였다. 간은 전체를 절취한 후 0.9% 생리식염수로 잔여 혈액을 완전히 제거한 뒤에 여과 지로 생리식염수를 모두 흡수시키고 무게를 측정하였다.
- 약물 최종투여 후에는 절식을 시켰으며 생수는 마음대로 섭취할 수 있도록 공급하였다. 검액은 흰쥐의 체 중 kg 당 10 ml가 투여되도록 하였으며, 각 검체는 0.5% CMC익에 현탁시켜 경구투여하였다.
- 약물은 CCI4를 주사하기 18시간 전, 30분전 및 CCI4 주사 6시간 후의 3회에 걸쳐서 경구로 투여하였다. 약물 최종투여 후에는 절식을 시켰으며 생수는 마음대로 섭취할 수 있도록 공급하였다. 검액은 흰쥐의 체 중 kg 당 10 ml가 투여되도록 하였으며, 각 검체는 0.
- 0ml/kg] 씩 복강내 투여하여 급 성 간손상을 유발시켰다. 약물은 CCI4를 주사하기 18시간 전, 30분전 및 CCI4 주사 6시간 후의 3회에 걸쳐서 경구로 투여하였다. 약물 최종투여 후에는 절식을 시켰으며 생수는 마음대로 섭취할 수 있도록 공급하였다.
- 금은화 MeOH 추출물이 CCle. 유발된 간손상에 미치는 효괴를 관찰하기 위해 혈청 중 GPT, GOT, LDH, A1P 활성 및 간 무게의 변화를 측정하였으며, 그 결과를 Table I 에 나타내었다.
- 또한 박 등 (1997)은 금은화의 EtOAc 분획에서 8가지 종류의 flavonoid 성분 즉 hydnocarpin, quercetin, astragalin, isoqueritrin, rhoifolin, mteolin,apigenin, Icmigin을 분리하였으며, 이 중 비교적 대량.으로 얻어진 7종의 flavonoids을 이용하여 항염증작용, 항산회작 용을 검토하여 그 효능과 기전을 밝혔다. Kawai 등(1998) 은 Lonicera japonica에서 aglycone을 가진 oleanolic acid 와 hederagenin 구조가 있는 saponin을 분리하였으며 다량의 iridoid glycoside, 즉 loganin, secoxyloganin, secolo- ganin dimethyl acetal, vogeloside, epivogeloside을 분리하였다.
- 이때 각 분획물의 투여용링으은 MeOH 엑스로부터 얻는 분획물의 수율에 비례하여 투여하였다. 이것은 MeOH엑스에서 나타난 작용물질이 어느 분획으로 이행하였는지를 추 적하기 위한 것이다.
- 를 이용한 간독성 유발법은 Rao등의 방법 (1991)에 따라서 실시하였다. 즉, 흰쥐에 CCI4 0.6 mg/kg [CC14: Olive oil=3 : 2 (v/v)로 1.0ml/kg] 씩 복강내 투여하여 급 성 간손상을 유발시켰다. 약물은 CCI4를 주사하기 18시간 전, 30분전 및 CCI4 주사 6시간 후의 3회에 걸쳐서 경구로 투여하였다.
대상 데이터
- 용하였다. 본 실험에서 기기는 Centrifuge (한신의료기 주, 힌국),DubnofF metabolic shaking incubator (Precision Scientific Co. Ltd., 미국), UV/Visible spectrophotometer (Jasco, Co, , 일본) 등을 사용하였다.
- 체중 200~ 300 g의 Sprague-Dawley 숫흰쥐를 서울대학교 천연물과학연구소로부터 분양 받아서 2주일 이상 적응 시킨 후 실험에 사용하였고, 사육시에는 삼양유지의 고형사 료 및 정제수를 자유롭게 섭취할 수 있도록 하였다. 동물실 은 22-25℃로 유지하고, 명암은 12시간씩으로 조절하였다.
데이터처리
- 모든 실험결과는 평균치와 표준오차로 나타내었고, 각 군 간의 비교는 Student's t-tes1를 사용하였으며, 대조군과 비교하여 p값이 5% 미만일 때를 통계학적 유의성이 있다고 판 정히였다.
이론/모형
- CC14를 이용한 간독성 유발법은 Rao등의 방법 (1991)에 따라서 실시하였다. 즉, 흰쥐에 CCI4 0.
- 혈청 중 GPT 및 GOT 활성은 Reitman과 Frankel의 방법 (1957)으로 UV 스펙트럼 505 nm에서 , LDH 횔성은 효 소법 (Kawano, et al., 1982)으로 550nrn에서, A1P 횔성 은 Kind-King의 방법 (King, 1972)으로 kit를 사용하여 515 nm에서 흡광치를 측정하였다.
성능/효과
- AIP 활성은 정상군이 28.2 K-A unit/ml 인 것에 비하여 , CC14 투여대조군은 54.6 u/ml로 약 1.9배가 증가하였으며, 금은화 MeOH 추출물은 500 mg/lig 투여시 46.3%의 유의적인 저해였으며 l, 000㎎/㎏ 투여시 48.7%의유의적인 저해를 보였다. 대조약물인 silymarin 투여시 역시 42.
- CC14 투여에 의하여 GPT활성은 133.5 Karmen unit/ml로써 정싱군에 비하여 현저히 상승하였다. 이 상승된 GPT 활 성은 BuOH 분획물 115㎎/㎏을 투여시에 77.
- 8배 증가하였다. 금 은화 MeOH 추출물 500㎎/㎏을 투여한 군은 CC% 투여 데조군과 비교시 10% 의 유의적인 저해를 보였으며, 1,000 ㎎/㎏> 투여한 군은 32.4% 저해하여 유의적 이었다. 대조약물로 사용한 silymarin 투여군은 대조군에 비해 15.
- 이상의 실험에서 CCL로 유발한 간 독성에 데한 금은화 MeOH 추출물과 분획물의 간 보호작용을 확인하였다. 금은 화 MeOH 추출물을 투여하였을 때 GPT, GOT, LDH, A1P 모두 silymarin 보다 깅하게 저해함을 확인하였으며 금 은화 분획물을 투여한 실험에서는 EtOAc, BuOH, 물 분획 이 각각의 사용용량에서 유의성있게 효소 활성을 저해하는 것을 확인하였다. 특히 BuOH 분획의 경우 GPT활성을 가장 강하게 저해하였으며 LDH 및 A1P 횔성도 유의적으로 저해하였다.
- 1배가 증가하였다. 금은화 MeOH 추출물을 투여한 군은 CC0 투여로 인하여 증가한 GPT 활성을 500 ㎎/㎏와 lOOO㎎/㎏ 투여시 각각 31.6%와 30.0%를저해하여 통계학적 유의성을 나타내었다. 대조약물로 사용된 silymarin 투여군은 127.
- 6배 증가하였다. 금은화 MeOH 추춤물 500 mg/kg을 투여하였을 때, 대조군과 비교하여 7.0% 저해하몄지만 유의성은 없었으며, 1,000 ㎎/㎏ 을 투여하였을 때 5.9% 억제되어 유의적으로 저해되었다. 대조약물로 사용한 silymarin 투여군은 6.
- 0% 유의적으로 저해하였다. 대조약물로 사용된 silymarin 투여군은 27.0% 저해하였으며 이 결과를 비교할 때 EtOAc, BuOH, 물 분 획의 효과가 silymarin 보다 약간 저해율이 낮지만 큰 차이는 없었다.
- 4% 저해하여 유의적 이었다. 대조약물로 사용한 silymarin 투여군은 대조군에 비해 15.7% 저해하여 유의적인 차이가 있었다.
- 본 실험에서 CC14 투여에 의하여 혈청 LDH 활성이 약 2.5배 증가하였는데, 각 분획물을 투여한 경우 EtOAc, BuOH, 물 분획이 각각 18.9%, 17.0%, 25.0% 유의적으로 저해하였다. 대조약물로 사용된 silymarin 투여군은 27.
- 5 Karmen unit/ml로써 정싱군에 비하여 현저히 상승하였다. 이 상승된 GPT 활 성은 BuOH 분획물 115㎎/㎏을 투여시에 77.7u/ml로써 41.8%의 저해를 보였으며 , 이는 간 CCI4 투여대조군에 비하여 유의성 있는 김소로써 다른 분획물보다 제일 큰 효과를 나타니었고, 다음이 EtOAc 분획물로써 , 37%의 감소를 보였다. 그 밖의 분획물은 효과를 인정할 수 없었으며 , silymarin 150 mg/㎏ 투여시에는 25.
- Silymarin의 용량을 증기시킴이 필요하다고 본다. 이 실험 결과에서 금은화 MeOH 추출물은 GOT 활성을 유의적으로 저히]하였으나 분획별로 분리한 경우 효과가 나타나지 아니하였다. 분획물의 용량을 증가시킴이 바람직하 다고 생각된다.
- 이상의 실험에서 CCL로 유발한 간 독성에 데한 금은화 MeOH 추출물과 분획물의 간 보호작용을 확인하였다. 금은 화 MeOH 추출물을 투여하였을 때 GPT, GOT, LDH, A1P 모두 silymarin 보다 깅하게 저해함을 확인하였으며 금 은화 분획물을 투여한 실험에서는 EtOAc, BuOH, 물 분획 이 각각의 사용용량에서 유의성있게 효소 활성을 저해하는 것을 확인하였다.
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