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제안 방법
- 조제된 각 해조류 추출물 및 용매획분의 항균활성은 Lorian (1991)의 방법에 따라 액체배지 희석법으로 측정하였다. 35t에서 24시간 배양한 균액을 BHI broth에 약 103/mL 되도록 접종한 후 멸균된 시험관 (18X150mm)에 무균적으로 분주하고 각 시험액을 50, 25, 12.5, 6.3 및 3.2μL/mL 되도록 첨가한 후 35©에서 3일간 배양하여 균 증식여부는 spectrophotometer (Milton Roy, model Spectronic Genesys 5, USA.)로 660nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 동일농도마다 3개의 시험구을 사용하였으며, 또한 첨가 되는 용매의 항균력을 배제하기 위하여 모든 시험에는 positive control과 negative controls' 각각 사용하였다.
- 즉, 감압 건조한 다시마 추출물은 die버yl ether, 증류수 및 etha-nol이 10:9:1의 비율로 함유된 용매에 용해시켜 diethyl ether 획분 을 분취하고 잔여 획분은 chloroform, ethyl acetate, n-buthanol로 순차적으로 다시 분획하여 최종적으로 수용성 획분을 얻었다. 각 용매 획분은 vacuum evaporate로 농축하여 ethanol 50mL에 녹 인 후 S. mutans KCTC 3300에 대한 증식저해 활성을 측정하였다.
- 분쇄한 다시마 50 g을 80% ethanol 500 mL로 2회 추출하고 vacuum evaporator로.감압 건조한 후 Fig. 1에 나타낸 바와 같이 유기용매를 사용하여 순차적으로 분획하였다.
- 본 연구에서는 전보 (Lee et al., 1999)의 해조류의 구취억제 활 성검색에 이어 우리나라 연안에서 채취한 각종 해조류의 80% ethanol 추출물이 S. mutans의 증식에 미치는 영향을 검색하고, 그 중 가장 활성이 강하였던 다시마를 사용하여 추출용매에 따른 항 균활성 및 최소발육저해농도 (minimum inhibitory concentration, MIC) 등을 측정하였다.
- 우리나라 연안에서 채취한 해조류 27종의 80% ethanol 추출 물이 Streptococcus mutans KCTC 3300의 증식에 미치는 영향을 검색하고, 다시마의 추출용매별 항균성과, 80% ethanol 추출물을 용매분획하였을 때 획분별 MIC를 측정하였다.
- )로 660nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 동일농도마다 3개의 시험구을 사용하였으며, 또한 첨가 되는 용매의 항균력을 배제하기 위하여 모든 시험에는 positive control과 negative controls' 각각 사용하였다.
- 추출용매에 따른 해조류의 항균활성은 시험 해조류 중 항균활 성이 가장 높았던 다시마 분말을 사용하여 acetone, acetonitrile, benzene, buthanol, butyl acetate, chloroform, ethanol, ether, ethyl acetate, hexane, methanol 및 methylene chloride 등의 유기용매로 추출 ■ 여과하여 vacuum evaporator (Eyela, model N*N, Japan) 로 40℃에서 용매를 완전히 제거한 다음, 이를 다시 최초 추출액 량의 무수 ethanol에 녹여 위와 같이 여과 제균한 다음 항균활성을 측정하였다.
- 충치균의 균종에 따른 해조류 추출물에 대한 감수성의 차이를 알아보기 위하여 연안산 해조류 27종의 80% ethanol 추출물이 S. mutans KCTC 3300의 증식에 미치는 영향을 검색한 후 9종 (녹 조류 3종, 갈조류 4종, 홍조류 2종)을 선별하여 충치 원인균으로 알려진 S. mutans KCTC 3300 및 S. sobrinus KCTC 3307에 대한 MIC 측정 결과를 Table 3에 나타내었다.
대상 데이터
- 실험에 사용한 균주 Streptococcus mutans KCTC 3300과 Streptococcus sobrinus KCTC 3307은 한국과학기술연구원의 유전자은 행에서 분양받았으며, 세균배양 및 보존에는 brain heart infusion medium (BHI, Difco Co., USA.) 을 사용하였다.
- 실험에 사용한 해조류는 우리나라 연안에서 수집한 27종 (녹 조류 6종, 갈조류 10종, 홍조류 11종)으로, 원조는 수도수로 씻어 이물질을 제거한 후 음건하여 분쇄(60mesh)하고 polyethylene병 에 냉장보관하면서 실험에 사용하였다. 한편, 실험에 사용한 유기 용매는 모두 시약 특급을 사용하였다.
이론/모형
- 조제된 각 해조류 추출물 및 용매획분의 항균활성은 Lorian (1991)의 방법에 따라 액체배지 희석법으로 측정하였다. 35t에서 24시간 배양한 균액을 BHI broth에 약 103/mL 되도록 접종한 후 멸균된 시험관 (18X150mm)에 무균적으로 분주하고 각 시험액을 50, 25, 12.
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