팥과 녹두는 떡의 소나앙금 등 주로 전분의 특성을 이용하는 형태로 소비가 제한적인 편이다. 식생활을 통해 질병의 예방 및 개선 가능성이 대두되면서 각종 식물체로부터 여러 생리활성물질의 활성탐구 및 추출에 많은 노력이 이루어지고 있으나, 대두와 같은 두류로 분류기는 팥과 녹두의 경우 이들 생리활성물질에 대한 인구는 거의 없는 실정이다. 본 연구에서는 대두에 비해 상대적으로 연구가 미진한 팥과 녹두의 생리활성 및 이소플라본 함량을 조사하였고, 그 결과는 다음과 같다. 1.팥과 녹두에서는 daidzein이 검출되지 않았고, genistein은 건조중량 1 kg당 40.7 mg과 27.8 mg이 들어 있었다. 2. 팥과 녹두의 전자공여능은 90%의 활성을 보인 팥이 84.6%의 활성을 나타낸 녹두에 비해 유의적으로 높았다. 3. 팥과 녹두의 SOD 유사활성 역시 거의 같은 수준으로 높았고, 매우 안정적이었다. 4. 혈전용해능은 팥의 경우 원액에서는 활성이 없었으나, 추출액의 pH를 6.4로 조절한 후 18시간 동안 냉장처리한 결과 비교적 큰 활성을 보였으며, pH 3.0으로 조절시 더욱 증가하였다. 녹두는 추출액을 pH 6.4와 3.0으로 조절시 모두 비활성도가 증가하였으나 pH 3.0에서는 pH 6.4보다 활성이 낮았다. 이들 시료는 36$^{\circ}C$에서 배양시 14시간까지는 반응을 거의 보이지 않다가 15시간이 지나면서 활성이 크게 나타나는 특이성을 보였다. 5. 열처리가 혈전용해활성에 미치는 영향을 비교해보면, 팥과 녹두 모두 10$0^{\circ}C$에서 10분 처리시 가장 활성이 컸고, 그 다음이 55$^{\circ}C$에서 30분, 10$0^{\circ}C$에서 30분 순으로 유사한 양상을 보였다 특히 10$0^{\circ}C$에서 10분간의 열처리시 55$^{\circ}C$에서 30분 처리한 것에 비해 혈전용해활성이 증가한 것으로 미루어 팥과 녹두의 혈전용해활성은 열에 대한 안정성이 크다고 할 수 있다. 반면 10$0^{\circ}C$에서 30분간의 과도한 열처리는 활성의 저하를 초래했다.
팥과 녹두는 떡의 소나 앙금 등 주로 전분의 특성을 이용하는 형태로 소비가 제한적인 편이다. 식생활을 통해 질병의 예방 및 개선 가능성이 대두되면서 각종 식물체로부터 여러 생리활성물질의 활성탐구 및 추출에 많은 노력이 이루어지고 있으나, 대두와 같은 두류로 분류기는 팥과 녹두의 경우 이들 생리활성물질에 대한 인구는 거의 없는 실정이다. 본 연구에서는 대두에 비해 상대적으로 연구가 미진한 팥과 녹두의 생리활성 및 이소플라본 함량을 조사하였고, 그 결과는 다음과 같다. 1.팥과 녹두에서는 daidzein이 검출되지 않았고, genistein은 건조중량 1 kg당 40.7 mg과 27.8 mg이 들어 있었다. 2. 팥과 녹두의 전자공여능은 90%의 활성을 보인 팥이 84.6%의 활성을 나타낸 녹두에 비해 유의적으로 높았다. 3. 팥과 녹두의 SOD 유사활성 역시 거의 같은 수준으로 높았고, 매우 안정적이었다. 4. 혈전용해능은 팥의 경우 원액에서는 활성이 없었으나, 추출액의 pH를 6.4로 조절한 후 18시간 동안 냉장처리한 결과 비교적 큰 활성을 보였으며, pH 3.0으로 조절시 더욱 증가하였다. 녹두는 추출액을 pH 6.4와 3.0으로 조절시 모두 비활성도가 증가하였으나 pH 3.0에서는 pH 6.4보다 활성이 낮았다. 이들 시료는 36$^{\circ}C$에서 배양시 14시간까지는 반응을 거의 보이지 않다가 15시간이 지나면서 활성이 크게 나타나는 특이성을 보였다. 5. 열처리가 혈전용해활성에 미치는 영향을 비교해보면, 팥과 녹두 모두 10$0^{\circ}C$에서 10분 처리시 가장 활성이 컸고, 그 다음이 55$^{\circ}C$에서 30분, 10$0^{\circ}C$에서 30분 순으로 유사한 양상을 보였다 특히 10$0^{\circ}C$에서 10분간의 열처리시 55$^{\circ}C$에서 30분 처리한 것에 비해 혈전용해활성이 증가한 것으로 미루어 팥과 녹두의 혈전용해활성은 열에 대한 안정성이 크다고 할 수 있다. 반면 10$0^{\circ}C$에서 30분간의 과도한 열처리는 활성의 저하를 초래했다.
This study was conducted to investigate the isoflavone (daidzein and genistein) contents, and the antioxidative and fibrinolytic activities of red and mung beans. Daidzein was not found in either the red or mung beans. The genistein contents of the red and mung beans were 40.7 and 27.8 mg/kg, respec...
This study was conducted to investigate the isoflavone (daidzein and genistein) contents, and the antioxidative and fibrinolytic activities of red and mung beans. Daidzein was not found in either the red or mung beans. The genistein contents of the red and mung beans were 40.7 and 27.8 mg/kg, respectively. Both samples had very high electron donating abilities and SOD-like activities. Fibrinolytic activities were not detected in the crude mung bean extract, but fibrinolytic substances were purified or activated under various pH conditions and with heat treatments. With heat treatment at 100 $^{\circ}C$ for 10 min, the specific activity was increased 4.61 fold. This study revealed that, although red and mung beans were poor in isoflavone, they could be good sources for functional products due to their strong antioxidative activities and heat- and acid-resistant proteolytic abilities.
This study was conducted to investigate the isoflavone (daidzein and genistein) contents, and the antioxidative and fibrinolytic activities of red and mung beans. Daidzein was not found in either the red or mung beans. The genistein contents of the red and mung beans were 40.7 and 27.8 mg/kg, respectively. Both samples had very high electron donating abilities and SOD-like activities. Fibrinolytic activities were not detected in the crude mung bean extract, but fibrinolytic substances were purified or activated under various pH conditions and with heat treatments. With heat treatment at 100 $^{\circ}C$ for 10 min, the specific activity was increased 4.61 fold. This study revealed that, although red and mung beans were poor in isoflavone, they could be good sources for functional products due to their strong antioxidative activities and heat- and acid-resistant proteolytic abilities.
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문제 정의
이에 본 연구에서는 팥과 녹두의 이소플라빈 함량 및 항산화활성을 측정하였고, 처리조건을 달리하여 혈전용해활성의 변화 양상을 알아보았다.
제안 방법
따라 측정하였다. 0.7%(w/v) fibrinogen을 함유하는 2% gelatin 용액 10 mL 와 50 mM barbital buffer(pH 7.5)에 녹인 thrombin(100 NIH units) 50 μL 를 잘 섞고 petri dish에 부어 fibrin막을 만든 다음, 시료용액을 20 mL씩 점적한 후 36℃에서 17시간 방치하여 용해된 fibrin막의 면적을 측정하였다. 혈전 용해 활성은 혈전용해효소인 plasmin(3 units)을 연속적으로 희석하여 얻은 표준곡선으로부터 3회 반복실험에서 얻어진 면적의 평균값을 비교하여 산출하였다.
SOD(superoxide dismutase) 유사활성은 김 등 功의 방법을 변형하여 사용하였다. 시료 분말 1 g에 1nW의 DTPA를 함유하는 55 mM Tris-HCl buffer(pH 8.
). pH 6.4로 조절한 조효소액은 4℃ 에서 18시간 동안 냉장 후, 그리고 pH 3.0으로 조정한 것은 즉시 원심분리하여 각각의 상층액을 얻었으며, 최종 pH를 8.0으로 재조정하여 원심분리한 상층액을 산처리에 따른 혈전용해활성 비교 실험의 시료로 사용하였다. 열처리 및 산처리 후의 원심분리 과정은 모두 4℃, 12,000xg에서 30분간 행하였다.
단백질 분해효소와 공존하는 저해제들을 제거하기 위하여 조효소액을 가열 및 산처리하였다. 가열조건에 따른 혈전용해활성 비교는 조효소액을 55℃ 에서 30분, 100℃ 에서 10분, 100℃ 에서 30분간 각각 열처리한 후 원심분리하여 얻은 상층액을 사용하였다.
시료의 수분함량은 생 시료를 분쇄 기 (후드믹 서 CGS-2500/2700, 선보정밀)로 갈아 각각 2~3 g을 정확히 취해 적외선 수분측정기(Moistwe Balance HA 300, Precisa Co., Switzerland)# 이용하여 3회 반복 측정하였다.
0으로 재조정하여 원심분리한 상층액을 산처리에 따른 혈전용해활성 비교 실험의 시료로 사용하였다. 열처리 및 산처리 후의 원심분리 과정은 모두 4℃, 12,000xg에서 30분간 행하였다.
2) 20 mL를 가하고 10분간 방치하여 수화시켰다. 이를 균질화(1,000 rpm, 2 min, GTR-1000, Eyela Co., Japan), 원심분리 (4℃, 12,000 x g, 60 min, Supra 21, 한일과학) 및 여과하였고(Whatman; No. 1), 0.5 g의 활성탄을 가하여 24시간 탈색시킨 여액의 pH를 8.2로 조정하였다. 시료액 2.
팥과 녹두의 항산화활성은 전자공여능 및 SOD 유사활성을 통해 추정하였다. 찰옥수수'즈나 유색미何 등과 같이 유색의 껍질을 지닌 팥과 녹두는 전자공여 능이 높은 것으로 나타났다.
Daidzein과 genistein 정량은 Franke 등?해의 방법을 일부 수정하여 사용하였다 이소플라본을 추출하기 위해 껍질째 곱게 분쇄한 시료 2 g에 96% 에틸알콜 40 niL와 10 mL의 10 N HC1 을 가하고 10분간 sonicating한 후 3시간 동안 열수추출하였다. 96% 에틸알콜은 가수분해과정 중의 산화를 방지하기 위해 BHT 0.
5)에 녹인 thrombin(100 NIH units) 50 μL 를 잘 섞고 petri dish에 부어 fibrin막을 만든 다음, 시료용액을 20 mL씩 점적한 후 36℃에서 17시간 방치하여 용해된 fibrin막의 면적을 측정하였다. 혈전 용해 활성은 혈전용해효소인 plasmin(3 units)을 연속적으로 희석하여 얻은 표준곡선으로부터 3회 반복실험에서 얻어진 면적의 평균값을 비교하여 산출하였다. 사진자료는 2.
대상 데이터
10월 중순경 서울 경동시장에서 구입하였다. Daidzein, genistein, flavone, butylated hydroxytoluene (이하 BHT 라 표기), diethylenetriaminepentaacetic acid(이하 DTPA라 표기), Trizma base, pyrogallol, l, l-diphenyl-2-picrylhydrazyl(이하 DPPH라 표기), fibrinogen, plasmin, thrombin, bovine serum albumin, agarose 등은 Sigma사에서 구입하였으며, 이소플라본 추출 및 측정시 사용한 ethyl alcohol과 acetonitrile 등의 용매는 HPLC 둥급의 Fisher사 제품이었고, 기타 다른 시약은 특급 시약을 사용하였다.
본 실험에서 시료로 사용한 팥과 녹두는 국산품종을 2000년 10월 중순경 서울 경동시장에서 구입하였다. Daidzein, genistein, flavone, butylated hydroxytoluene (이하 BHT 라 표기), diethylenetriaminepentaacetic acid(이하 DTPA라 표기), Trizma base, pyrogallol, l, l-diphenyl-2-picrylhydrazyl(이하 DPPH라 표기), fibrinogen, plasmin, thrombin, bovine serum albumin, agarose 등은 Sigma사에서 구입하였으며, 이소플라본 추출 및 측정시 사용한 ethyl alcohol과 acetonitrile 등의 용매는 HPLC 둥급의 Fisher사 제품이었고, 기타 다른 시약은 특급 시약을 사용하였다.
데이터처리
45 //m)로 다시 여과한 후, HPLC를 사용하여 Table 1과 같은 조건으로 분석하였다. 각 시료 모두 추출과정부터 세번 반복 실험하여 평균값을 구하였고, 건조중량 기준으로 표시하였다.
이론/모형
Blois® 및 김 등29)의 실험 과정 에 따라 전자공여능을 측정하였다. 분말화한 시료 2~3 g을 취해 3배 분량(w/v)의 증류수를 가한 다음 10분간 수화시켰다.
Fibrin 분해 활성은 Haverkate-Trass 의 fibrin plate 법30) 에 따라 측정하였다. 0.
0 unit/ml 의 plasmin과 팥 추출물을 같이 점적한 것으로 용해면적을 상대비교할 수 있도록 한 예이다. 비활성도 산출에 필요한 단백질 농도는 Lowry 등의 방법에 의하여 bovine serum albumin 표준곡선에 의하여 환산하였다.
팥과 녹두의 생리활성의 유의적 차이 여부는 T-검정에 의해 비교하였다.
성능/효과
찰옥수수'즈나 유색미何 등과 같이 유색의 껍질을 지닌 팥과 녹두는 전자공여 능이 높은 것으로 나타났다. Table 3에서 볼 수 있는 바와 같이 전자공여능은 90%의 활성을 보인 팥이 84.6%의 활성을 나타낸 녹두에 비해 유의적으로 높았다. 이를 동일한 조건에서 측정한 7종의 밥밑콩류와 비교해보면幽, 울타리콩, 황태, 강남콩, 거두 및 서리태와 유사하였으며, 각각 57%와 50%를 나타낸 선비콩 및 청태에 비하면 매우 강한 항산화 활성을 지닌다고 할 수 있다.
열처리 결과를 비교해보면, 팥과 녹두 모두 100℃ 에서 10분 처리시 가장 활성이 컸고, 그 다음이 55℃ 에서 30분, 100℃ 에서 30분 순으로 유사한 양상을 보였다. 특히 열처리 강도가 높은 100’C에서 10 분간처리 시 55℃에서 30분 처리한 것에 비해 혈전 용해 활성이 중가한 것으로 미루어 팥과 녹두의 혈전 용해 활성은 열에 대한 안정성이 크다고 할 수 있다.
통해 추정하였다. 찰옥수수'즈나 유색미何 등과 같이 유색의 껍질을 지닌 팥과 녹두는 전자공여 능이 높은 것으로 나타났다. Table 3에서 볼 수 있는 바와 같이 전자공여능은 90%의 활성을 보인 팥이 84.
팥의 혈전용해활성은 조추출물에서는 활성이 나타나지 않았으나, 산처리 및 열처리에 의해 활성이 발현되었으며, 녹두 역시 산 및 열처리에 의해 비활성도가 증가하였다(Table 4, 5). 이들 시료는 36℃ 에서 배양시 14시간까지는 반응을 거의 보이지 않다가 15시간이 지나면서 급격히 활성을 나타내는 특이성을 보였는데, 이는 혈전용해성분 저해제의 작용 때문으로 여겨진다.
측정한 결과이다. 혈전용해물질과 공존하고 있는 것으로 여겨지는 저해성분을 부분적으로 제거하기 위해 추출액의 pH를 6.4로 조절한 후 18시간 동안 냉장처리한 결과, 원액에서 활성이 없었던 팥은 비교적 큰 활성을 보였으며, pH 3.0으로 조절 시 더욱 증가하였다. 녹두의 경우 pH 6.
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