본 연구에서는 염생식물의 하나인 해당화의 항산화효과를 탐색하기 위해 해당화의 dichloromethane과 methanol의 조추출물을 합하여 n-hexane, 15% aq. MeOH, n-BuOH, $H_2O$로써 순차적으로 용매 분획하여 DPPH 라디칼, peroxynitrite의 소거 활성과 지질 과산화 저해 활성을 측정하였다. 그 결과 각각의 실험에서 해당화의 유의적인 항산화 효과가 확인되었으며, 특히, 4개의 분획물들 중 n-BuOH 획분이 가장 뛰어난 항산화 효과가 있는 것으로 나타났다. 따라서 해당화의 항산화 효과는 비교적 극성이 큰 2차 대사산물에 의한 것임을 추측할 수 있으며, 해당화의 많은 생물학적인 활성들 중 peroxynitrite 소거 효과와 마우스 간 균질물을 이용한 지질 과산화물 생성 억제 활성에 관한 보고는 이것이 처음이다.
본 연구에서는 염생식물의 하나인 해당화의 항산화효과를 탐색하기 위해 해당화의 dichloromethane과 methanol의 조추출물을 합하여 n-hexane, 15% aq. MeOH, n-BuOH, $H_2O$로써 순차적으로 용매 분획하여 DPPH 라디칼, peroxynitrite의 소거 활성과 지질 과산화 저해 활성을 측정하였다. 그 결과 각각의 실험에서 해당화의 유의적인 항산화 효과가 확인되었으며, 특히, 4개의 분획물들 중 n-BuOH 획분이 가장 뛰어난 항산화 효과가 있는 것으로 나타났다. 따라서 해당화의 항산화 효과는 비교적 극성이 큰 2차 대사산물에 의한 것임을 추측할 수 있으며, 해당화의 많은 생물학적인 활성들 중 peroxynitrite 소거 효과와 마우스 간 균질물을 이용한 지질 과산화물 생성 억제 활성에 관한 보고는 이것이 처음이다.
An antioxidant activity of Rosa rugosa extract and its solvent-partitioned fractions was determined not only by measuring lipid peroxide produced when a mouse liver homogenate was exposed to the air at 37$^{\circ}C$, using thiobarbituric acid (TBA) but also by evaluating the free radical ...
An antioxidant activity of Rosa rugosa extract and its solvent-partitioned fractions was determined not only by measuring lipid peroxide produced when a mouse liver homogenate was exposed to the air at 37$^{\circ}C$, using thiobarbituric acid (TBA) but also by evaluating the free radical scavenging effect against DPPH radical, authentic peroxynitrite, and 3-morpholinsydnonimine (SIN-1). All its partitioned fractions including crude extract showed potent scavenging effect against DPPH radical, peroxynitrite, and lipid peroxidation. n-BuOH fraction, in particular, was found to be the most effective in DPPH radical scavenging ability as well as inhibition against lipid peroxidation. The 15% aqueous MeOH fraction also showed a strong potency which was slightly lower than n-BuOH fraction. Based on these results, we suggest that Rosa rugosa could be useful for preventing an oxidative damage.
An antioxidant activity of Rosa rugosa extract and its solvent-partitioned fractions was determined not only by measuring lipid peroxide produced when a mouse liver homogenate was exposed to the air at 37$^{\circ}C$, using thiobarbituric acid (TBA) but also by evaluating the free radical scavenging effect against DPPH radical, authentic peroxynitrite, and 3-morpholinsydnonimine (SIN-1). All its partitioned fractions including crude extract showed potent scavenging effect against DPPH radical, peroxynitrite, and lipid peroxidation. n-BuOH fraction, in particular, was found to be the most effective in DPPH radical scavenging ability as well as inhibition against lipid peroxidation. The 15% aqueous MeOH fraction also showed a strong potency which was slightly lower than n-BuOH fraction. Based on these results, we suggest that Rosa rugosa could be useful for preventing an oxidative damage.
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문제 정의
이런 극한 환경에 서식하는 염 생 식물은 다른 생물들과는 다른 생물학적 이용 가능성이 높은 2차 대사산물이 풍부할 것으로 기대되며, 더구나 염생식 물에 대한 생리활성이나 화학 성분에 관한 연구보고도 거의 없는 실정이다. 따라서 본 연구에서는 염생식물의 하나인해 당화의 항산화 효과를 탐색하기 위하여, 안정한 유리 라디칼 로 알려져 있는 l, l-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)에 대한 해당화의 전자 공여능을 측정하였다. 생체 내에서 생성되는 유리 라디칼의 반응성과는 달리 DPPH 라디칼은 실온에서 1시간 정도는 methanol 용액 내에서 안정한 상태를 유지하고 있는 것으로 알려져 있다.
본 연구에서는 염분 농도가 높아 일반 육상 식물이 생육할 수 없는 지역에 생육하며, 바닷가와 내륙에서는 염분이 있는 호숫가와 암염(岩鹽)이 있는 지대에서 자라는 염생식물(halophyte) 중의 하나인 해당화 (Rosa mgosa)의 항산화 효과에 관해 연구하였다.
제안 방법
따라서 해당화의 methanol 추출물과 dichloromethane 추출물을 합하여 n-hexane, 15% aq. MeOH, n-BuOH, 压0로써 순차적으로 용매 분획하여 DPPH 래디칼의 소거 활성을 측정하였다(Fig. 2). 그 결과 h-BuOH 획분이 100 “g/ml의 농도에서 92.
본 연구에서는 염생식물의 하나인 해당화의 항산화효과를 탐색하기 위해 해당화의 dichloromethane과 methanol 의 조추 출물을 합하여 n-hexane, 15% aq. MeOH, n-BuOH, 田0로써 순차적으로 용매 분획하여 DPPH 라디칼, peroxynitrite의 소거 활성과 지질 과산화 저해 활성을 측정하였다. 그 결과 각각의 실험에서 해당화의 유의적인 항산화 효과가 확인되었으며, 특히, 4개의 분획물들 중 n-BuOH 획분이 가장 뛰어난 항산화 효과가 있는 것으로 나타났다.
100 “g/ml) 50 必와 제조한 DPPH용액 을 혼합하여 1。분간 상온에서 반응시킨 후 518 nm에서 흡광도를 측정한다(9). 시료를 첨가하지 않은 대조군과 비교하여 유리 라디칼 소거활성을 백분율로 나타내었으며, 대조군의 UV-Vis 흡광도는 0.94~0.97이 되도록 조정하였다. 그리고 3회 반복 실험하여 얻은 결과를 평균한 값으로 나타내었다.
실험동물은 암수 구별없이 체중 20-25 g의 ICR mouse로 온도 20 ±2℃, 습도 50 ±10%의 동물실에서 일주일간 고형시료 (삼양유지(주))로 사육하였다. 이 실험동물을 ether로 마취 후 해부하여 간 문맥에 0.15 M ice cold KC1 용액을 관류시켜 간 내 혈액 제거 후 적출하여 0.15 M ice cold KC1 용액으로 세척한 후 신속히 간 무게의 10배량의 ice cold KC1 를 가하여 간을 세절하고 약 5분간 ice bath상에서 균질 화하였다.
해당화의 조추출물과 각 분획물들에 대한 마우스 간 균질물의 지질 과산화 억제 효과를 L-ascorbic acid의 활성과 비교하여 나타내었다(Fig. 5).
그리고 ONOO'는 Cayman (Ann Arbor, MI, USA)에서 구입하였다. 그 외 다른 모든 시약은 Sigma사 (St Louis, MO, USA)나 Junsei사 (Tokyo, Japan)의 일급 또는 특급시약을 사용하였다.
본 실험에서 사용한 해당화는 경기도 대부도에서 2002년 8~9월에 채집하였으며, 모든 원료는 그늘에서 저온 (37℃) 건조하였고 추출에 적합하도록 세절한 후 추출관에 넣고 CH2CI2와 MeOH로 연차적으로 각각 추출하였다. 각각의 시료 50g에 CHzCh (시약용 1급)을 가하여 침지하였다.
실험동물은 암수 구별없이 체중 20-25 g의 ICR mouse로 온도 20 ±2℃, 습도 50 ±10%의 동물실에서 일주일간 고형시료 (삼양유지(주))로 사육하였다. 이 실험동물을 ether로 마취 후 해부하여 간 문맥에 0.
데이터처리
냉각 후 2000 rpm에서 15분간 원심분리시킨 후 상층액을 취하여 흡광도를 spectrophotometer (532 nm)로 측정하여 정량하였다(11). TBA 값은 532 nm에서의 흡광도가 0.1일 때를 1 unit으 로 한 후, mouse 간 1 g에 대한 TBA 값을 환산하여 표시하였으며 3회 반복 실험하여 얻은 결과를 평균한 값으로 나타내었다.
97이 되도록 조정하였다. 그리고 3회 반복 실험하여 얻은 결과를 평균한 값으로 나타내었다. 시료는 100% ethanol에 용해시켜 사용하였다.
성능/효과
그리고 HQ 획분에서도 hexane 획분과 15% aq. MeOH 획분보다 는 비교적 우수한 효과가 확인되었다. 이러한 양상은 DPPH 라디칼의 소거 활성과 peroxynitrite 소거 활성에서 나타난 것과 거의 일치하였다.
37%로써 유의적인 DPPH 래디칼 소거활성이 있는 것을 알 수 있었다 그 외 n-hexane 획분이나, 15% aq. MeOH 획분의 DPPH 래디칼 소거활성은 거의 없는 것으로 확인되었다. 이러한 결과는 EtOAc 획분과 /7-BuOH 획분에서 가장 DPPH 래디칼 소거 활성이 강한 것으로 보고묀 문헌치와 잘 일치하는 결과였다(13).
해당화 조추출물의 门-hexane, 15% aq. MeOH, /1-BuOH, HQ획분을 authentic ON。。과 SIN-1에 대해서 실험한 결과 4가지 분획물들 모두 농도 의존적인 peroxynitrite 소거 효과를 나타내었다(Fig. 3, 4). SIN-1은 in vitro 상에서 nitric oxide 와 superoxide anion 을 동시에 발생시켜서 신속하게 peroxynitrite를 생성시키기 때문에 흔히 사용되는 화합물이다.
2). 그 결과 h-BuOH 획분이 100 “g/ml의 농도에서 92.11%, 50 g/tnl 의 농도에서 9L79%로써 L- ascorbic acid와 비슷한 효과를 가지는 가장 강력한 DPPH 래디칼 소거 활성능이 있는 것을 확인하였다. 그리고 H2O 획분에서 100 μg/ml의 농도에서 84.
MeOH, n-BuOH, 田0로써 순차적으로 용매 분획하여 DPPH 라디칼, peroxynitrite의 소거 활성과 지질 과산화 저해 활성을 측정하였다. 그 결과 각각의 실험에서 해당화의 유의적인 항산화 효과가 확인되었으며, 특히, 4개의 분획물들 중 n-BuOH 획분이 가장 뛰어난 항산화 효과가 있는 것으로 나타났다. 따라서 해당화의 항산화 효과는 비교적 극성이 큰 2차 대사산물에 의한 것임을 추측할 수 있으며, 해당화의 많은 생물학적인 활성들 중 peroxynitrite 소거 효과와 마우스 간 균질물을 이용한 지질 과산화물 생성 억제 활성에 관한 보고는 이것이 처음이다.
MeOH, n-hexane 순이었다. 그 중에서도 n-BuOH 분획물이 DPPH 라디칼이나 peroxynitrite 소거 활성에서와 마찬가지로 지질과 산화 저해 활성이 매우 뛰어난 것으로 나타났다. 마우스 간 균질물의 지질 과산화물 생성 억제 효과가 표준 물질로 사용한 L-ascorbic acid보다도 강한 것을 알 수 있었다.
그 중에서도 n-BuOH 분획물이 DPPH 라디칼이나 peroxynitrite 소거 활성에서와 마찬가지로 지질과 산화 저해 활성이 매우 뛰어난 것으로 나타났다. 마우스 간 균질물의 지질 과산화물 생성 억제 효과가 표준 물질로 사용한 L-ascorbic acid보다도 강한 것을 알 수 있었다. 그리고 HQ 획분에서도 hexane 획분과 15% aq.
1-5 mg/ml의 농도로 첨가하였을 때 지질 과산화물 생성을 농도 의존적으로 억제하는 것을 알 수 있었다. 실험한 2개의 조추출물인 methanol 조추출물과 dichloromethane 조추출물의 지질 과산화 저해 활성은 5 mg/ml 농도의 시료를 첨가하였을 때 각각 70.03%, 50.35%의 효과를 나타내었다. 그리고 해당화 분획물들의 지질 과산화 억제 활성 정도는 n-BuOH, H2O, 15% aq.
SIN-1은 in vitro 상에서 nitric oxide 와 superoxide anion 을 동시에 발생시켜서 신속하게 peroxynitrite를 생성시키기 때문에 흔히 사용되는 화합물이다. 특히, n-BuOH 획분은 authentic peroxynitrite 에 대해서 99.03%, SIN-1에 대해서는 98.59%로서 대조군으로 사용한 penicillamine 화합물의 효과와 비슷한 효과였으며, 10 “g/ml 의 농도에서는 오히려 월등히 뛰어난 peroxynitrite 소거 효과가 확인되었다. 또한 15% aq.
해당화의 조추출물과 각 분획물을 0.1-5 mg/ml의 농도로 첨가하였을 때 지질 과산화물 생성을 농도 의존적으로 억제하는 것을 알 수 있었다. 실험한 2개의 조추출물인 methanol 조추출물과 dichloromethane 조추출물의 지질 과산화 저해 활성은 5 mg/ml 농도의 시료를 첨가하였을 때 각각 70.
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