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문제 정의
- 하지만 우리나라에서 재배되고 있는 수박에 발생하는 바이러스의 종류와 분포에 대해서는 아직 연구가 미진한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 전남지역의 수박에서 바이러스 병 발생상황을 조사하고, 병의 원인인 바이러스 종류를 구명코자 하였다.
제안 방법
- 1963). Formvar film으로 막을 씌운 grid(200 mesh)에 2% phosphotungstic acid(PTA, pH 7.2)를 한 방울 떨어뜨리고식물조직의 절단면을 침지해 1분간 놓아둔 후 여액을 여과지로 제거하여 투과전자현미경 (JEM-1010, JEOL Ltd., Tokyo, Japan)으로 관찰하였다. 또한 시료는 동결건조하여 -20°C 냉동고에 보관하였다.
- , Winsconsin, USA)을 첨가한 반응액 20ul를 42<, C에서 30분간 항온처리하여 실시한 다음 95。0에서 5분간 변성시켰다. PCR은 역 전사반응액 20 B,25 pmole upstream primer, 2.5 U Taq DNA polymerase (Promega Co., Winsconsin, USA), IX PCR buffer(10 mM Tris-HCl, 50 mM KC1), 2 mM MgCl2, 0.4 mM dNTP를 첨가한 100(〃 반응액을 ±ermocycler(T-gradient, Biometra Co., Germany)에서 94°C 60초, 60°C 60초, 72°C 80초로40회 증폭시켰으며 마지막에는 721에서 7분간 처리하였다. RT-PCR 산물은 TBE(89 mM Tris-borate, 2 mM EDTA) 를 이 용하여 1% agarose 겔에서 전기영 동하여 ethidium bromide(2 mg/ml)에 5분간 염 색 하고 탈색 한 후 UV- transilluminator에서 밴드를 확인하였다.
- , Germany)에서 94°C 60초, 60°C 60초, 72°C 80초로40회 증폭시켰으며 마지막에는 721에서 7분간 처리하였다. RT-PCR 산물은 TBE(89 mM Tris-borate, 2 mM EDTA) 를 이 용하여 1% agarose 겔에서 전기영 동하여 ethidium bromide(2 mg/ml)에 5분간 염 색 하고 탈색 한 후 UV- transilluminator에서 밴드를 확인하였다.
- 1). 모자이크 증상을 보이는 수박 묘를 포장 당 300주 이상 조사하여 바이러스 감염율을 퍼센트 (%)로 산출하였다.
- 전자현미경 검경결과 막대형인 바이러스는 형태적인 특성이 CGMMV와 매우 유사하였고(Hollings 등, 1975), 사상형 바이러스는 potyvirus인 WMV, ZYMV, PRSV 일 가능성이 높았다(Lisa와 Lecoq, 1984; Purcifull 등, 1984a, b). 하지만 CMV는 전자현미경으로는 검출할 수가 없기 때문에 전자현미경상에서 바이러스입자가 검출되지 않았다고 해서 바이러스에 감염되지 않았다고 할수 없으며 (Francki 등, 1979), 또한 전자현미경으로는 potyvirus를 구별할 수 없어 정밀진단이 가능한 RT-PCR 를 실시하였다.
대상 데이터
- Disease incidence represent the percentage of mean number of infected plants per total plants in a field. More than 300 plants were investigated in a field.
- 수박의 바이러스 병 발생상황은 1998부터 2002년까지 5년 동안 전라남도 수박재배 주산지인 광주, 곡성, 장성, 나주, 영암, 담양지역의 비닐하우스 및 노지재배 지역에서 생육초기부터 과실비대기까지 조사하였다(Fig. 1). 모자이크 증상을 보이는 수박 묘를 포장 당 300주 이상 조사하여 바이러스 감염율을 퍼센트 (%)로 산출하였다.
이론/모형
- 각 포장에서 채집한 이병 시료로부터 바이러스 입자를 확인하기 위하여 병에 걸린 잎과 과육을 leaf-dip 방법으로 검경하였다(Home 등, 1963). Formvar film으로 막을 씌운 grid(200 mesh)에 2% phosphotungstic acid(PTA, pH 7.
- 바이러스 검출을 위한 primer는 Lee 등(2003) 이 보고한 박과작물 5종 바이러스 동시진단용 primer와 PRSV는 Jin 등(2003)이 보고한 primer를 참조하여 바이오니아(주) (Taejeon, Korea)에 의뢰하여 합성하였다. 역전사반응은 주형 RNA 1 |i/(2.
성능/효과
- 2000년부터 2002년까지 육안조사로 채집된 바이러스 시료에 대한 RT-PCR 검정결과 5월에 채집된 시료는 모두 CGMMV만 검출되었으며, 6월에 채집된 시료는 노지재배의 경우 WMV가 100% 검출되었고, 비닐하우스는 CGMMV, WMV, ZYMV가 각각 25.0%씩 검출되었다. 7 월에 채집된 시료의 경우 노지재배는 WMV만 100%, 비닐하우스는 CGMMV만 100% 검출되었고, 모든 시료에서 바이러스가 복합 감염된 시료는 없었다(Table 3).
- 0%씩 검출되었다. 7 월에 채집된 시료의 경우 노지재배는 WMV만 100%, 비닐하우스는 CGMMV만 100% 검출되었고, 모든 시료에서 바이러스가 복합 감염된 시료는 없었다(Table 3). 따라서 1998년과 1999년의 시료(4월 채집)에서 관찰된 막대형 바이러스는 CGMMV로 판단되었고, 종자 전염성이고 접촉전염을 하기 때문에(Hollings 등, 1975) 채집 시기에 관계없이 발생하였던 것으로 생각되었다.
- 8%) 시료에서 바이러스 입자가 관찰되었다. 그 중 CGMMV로 추정되는 300X 18 nm의 막대형 입자가 75개 시료로 58.6%를 차지하였고, potyvirus 로 추정되는 700~800Xll nm의 사상형 입자는 34개가 관찰되었다. 연도별로 보면 1998년과 1999년에는 모두 막대형 입자만 관찰되었고, 2000년부터 2002년에는 사상형 입자의 비율이 각각 71.
- 7 월에 채집된 시료의 경우 노지재배는 WMV만 100%, 비닐하우스는 CGMMV만 100% 검출되었고, 모든 시료에서 바이러스가 복합 감염된 시료는 없었다(Table 3). 따라서 1998년과 1999년의 시료(4월 채집)에서 관찰된 막대형 바이러스는 CGMMV로 판단되었고, 종자 전염성이고 접촉전염을 하기 때문에(Hollings 등, 1975) 채집 시기에 관계없이 발생하였던 것으로 생각되었다. CGMMV는 오이에서 처음 발생(Ainsworth, 1935)하여 수박(Komuro 등, 1971), 박(Ibrahim, 1992), 멜론(古吉과 小室, 1973) 등에서도 피해가 보고되었다.
- 8%에서 막대형 입자 또는 사상형 입자가 관찰되었다. 이들 시료에 대한 R<PCR 검정결과 5월에는 CGMMV만 발생하였고, 6월 이후에는 CGMMV, WMV 및 ZYMV가 발생하였는데 WMV가 우점하였으며 , 어떤 시료에서도 CMV와 PRSV 는 검출되지 않았다.
- 포장에서 육안으로 조사하여 바이러스 증상을 보인 시료를 전자현미경으로 검정한 결과, 128 개 시료 중 109개(87.8%) 시료에서 바이러스 입자가 관찰되었다. 그 중 CGMMV로 추정되는 300X 18 nm의 막대형 입자가 75개 시료로 58.
- 높은 경향이었다. 포장에서 채집한 시료에 대하여 전자현미경으로 128개 시료를 검정한 결과 87.8%에서 막대형 입자 또는 사상형 입자가 관찰되었다. 이들 시료에 대한 R<PCR 검정결과 5월에는 CGMMV만 발생하였고, 6월 이후에는 CGMMV, WMV 및 ZYMV가 발생하였는데 WMV가 우점하였으며 , 어떤 시료에서도 CMV와 PRSV 는 검출되지 않았다.
- 1998 년에 바이러스 발생포장율이 높았던 것은 CGMMV가 전국적으로 대발생하였기 때문이었으며, 2(X)0년에 노지재배의 포장율과 이병주율이 높은 이유는 생육 후기(수확기)에 조사하였기 때문으로 생각된다. 하지만 하우스재배의 경우 CGMMV 발생이 격감한 이후 수확기가 6월 이전인하우스재배작형 에서는 바이 러스발생 이 거의 없었으며 , 수확기가 6월 이후인 하우스 작형과 노지재배에서는 지속적으로 바이러스가 발생되는 경향을 보여 충매 전염 성인 바이러스 피해가 많은 것으로 나타났다.
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