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문제 정의
- 6)이에 본연구에서는 에틸렌옥사이드보다 인체에 유해 정도가 덜한 알콜 가스를 사용하여 가스 멸균법을 시행하였다. 또한 황금의 미생물학적 품질관리를 위한 건열멸균 및 방사선 조사를 이용한 멸균이 관능적 품질변화 및 황금의 지표물질인 바이칼린의 양에 미치는 영향을 알아보고자 하였다.
제안 방법
- 37)의 정량은 대한약전 황금 항에 준하여 측정하였다.3)즉, 표준액은 단계별로 희석하여 0.006에서 0.1mg/ml에 해당하는 농도로 검량선 (Fig. 2, Y = 8E + 07X +81832, lT=l)을 작성하여 피크 면적을 상관관계식에 대입하여 바이칼린을 정 량하였다. 고속액체크로마토그래피는 Waters 515 pump와 Waters 2487 Dual X absorbance Detector 및 Chromolith^' RP-18e (4.
- ' 그러나 국내에서 선행된 연구에 따르면, 인삼엽록차에 대한 방사선 조사 및 에틸렌옥사이드가스 멸균법에 의해 인삼의 주요성분인 진세노사이드 함량에 대한 영향은 거의 확인되지 않은 바 있었다.6)이에 본연구에서는 에틸렌옥사이드보다 인체에 유해 정도가 덜한 알콜 가스를 사용하여 가스 멸균법을 시행하였다. 또한 황금의 미생물학적 품질관리를 위한 건열멸균 및 방사선 조사를 이용한 멸균이 관능적 품질변화 및 황금의 지표물질인 바이칼린의 양에 미치는 영향을 알아보고자 하였다.
- 5, 5, 10 kGy로 하였다.8,9) 방사선 조사 전후 생약을 생리식염수로 희석하여 평판 도말법으로 생균수를 측정하였다.
- 방법을 채택하였다. Fig. 1과 같이 알콜 가스 발생장치를 제작하였으며, 알콜 가스 발생을 위하여 공기펌프에 스파저를 연결하여 에탄올에 공기를 40ml/min의 속도로 주입함으로서 알콜 가스를 발생시켰다. 그리고 표본생약 각 100 g이 든 밀폐용기(2 L)에 알콜 가스를 30분간 연속적으로 주입하여 용기내의 공기를 알콜 가스로 치환하였다.
- 건열 멸균법 - 표본생약 각 100 g을 비이커에 넣어 각 온도(70, 100, 150℃에서 2시간 처리한 후 시료를 단계별로 희석하여 평판배지에 일정량을 도말하였다.
- 2, Y = 8E + 07X +81832, lT=l)을 작성하여 피크 면적을 상관관계식에 대입하여 바이칼린을 정 량하였다. 고속액체크로마토그래피는 Waters 515 pump와 Waters 2487 Dual X absorbance Detector 및 Chromolith^' RP-18e (4.6 x 100)컬럼을 사용하였다. 이동상으로 묽은 인산(1 - 146)과 아세토니트 릴혼합액(18:7)를 사용하여 자외부 흡광광도계(측정 파장 277 nm)에서 분석하였다.
- 이 희석액 1 ml를 Sabouraud 포도당한천배지 평판에 넣은 후 멸균된 유리봉으로 잘 도말하였다. 그리고 20〜25℃에서 5〜7일간 배양한 후 이때 곰팡이 콜로니를 육안으로 계수하였다.
- 1과 같이 알콜 가스 발생장치를 제작하였으며, 알콜 가스 발생을 위하여 공기펌프에 스파저를 연결하여 에탄올에 공기를 40ml/min의 속도로 주입함으로서 알콜 가스를 발생시켰다. 그리고 표본생약 각 100 g이 든 밀폐용기(2 L)에 알콜 가스를 30분간 연속적으로 주입하여 용기내의 공기를 알콜 가스로 치환하였다. 그 후 밸브를 잠가 25℃에서 하루 동안 처리하였다.
- 미생물 오염도 측정을 위한 시료원액 조제 및 희석 - 멸균하기 전 생약은 시료가 포장되어 있는 경우 미리 개봉부위 바깥쪽을 알코올 솜으로 충분히 닦아 내고 화염멸균을 하는 등의 방법으로 무균처리를 하였다. 생약시료를 멸균된 가위, 핀셋 등을 사용하여 가능한 한 잘게 잘라 혼합한 다음 10 g을 채취하였다.
- 방사선 조사 멸균법(gamma irradiation) - 생약 100 g을 비닐로 밀봉 포장하여 gamma irradiator(그린피아)에 넣고 방사선을 조사하였다. 이때 방사선 총 조사량은 2.
대상 데이터
- 선행된 연구에 따르면 방사선 조사는 미생물에 대하여 선택적으로 강력한 살균효과를 나타내며 생화학적 변화를 최소화하여 위생학적 위해성도 나타내지 않아 매우 안전하면서도 유용한 살균방법으로 인정되고 있다. 따라서 본 실험에서 사용한 조사량은 국제적으로 안전성이 인정된 선량(10kGy)을 사용하였다.10)
- 시료를 균질화시킬 때 블렌더를 사용하는 경우에는 컵을 본체의 모터에 접속하고 8, 000 rpm정도로 2분간 작동시켜 유체를 제조하였다. 시료원액은 필요에 따라 인산완충용액으로 단계희석을 하되 세균수를 측정하는 경우에는 이상의 전 과정이 15분을 초과하지 않도록 희석 시료액을 제조하였다. 만들어진 희석 시료액은 곧바로 배지와 혼합하도록 하였다.
- 6 x 100)컬럼을 사용하였다. 이동상으로 묽은 인산(1 - 146)과 아세토니트 릴혼합액(18:7)를 사용하여 자외부 흡광광도계(측정 파장 277 nm)에서 분석하였다.
- 재료 - 본 연구에 사용한 생약 검체는 한약사의 도움으로 서울 경동약령시장 한마음 약업사에서 구입하여 충남대학교 약학대학 배기환 교수님의 감별을 받아 진품으로 확인되는 시료에 대하여 연구를 수행하였다.
데이터처리
- 멸균법에 따른 지표물질 양의 변화 - 황금의 검액 및 표준액 20 ㎕씩을 가지고 Chromolith™ RP-18e (4.6 x 100) 컬럼을 사용하여 고속액체크로마토그래피를 실시하여 피크 면적으로 검체 중 표준품의 양을 측정하고 그에 대한 평균의 표준편차를 구하였다. 멸균 처리하지 않은 황금 중의 바이칼린 양은 1189.
- 통계처리 - 모든 실험은 각 생약시료에 대해 3회 반복하여 시행하였다. 실험결과는 각각 (평균값土표준편차)로 나타내었으며, 통계 분석은 Student's t tests. 행하였고 통계적 유의성은 p값이 0.
이론/모형
- HPLC법에 의한 황금 중 바이칼린의 정량 - 황금 중 baicalin(C2l1l8O11 : 446.37)의 정량은 대한약전 황금 항에 준하여 측정하였다.3)즉, 표준액은 단계별로 희석하여 0.
- 알콜 가스 멸균법 - 가스멸균법으로 에틸렌옥사이드 가스를 이 용한 방법도 활용되 나7)멸균 후 잔존되어 있을 때 미치는 독성을 고려하여 인체에 무해한 알콜 가스를 이용한 방법을 채택하였다. Fig.
성능/효과
- 3에서 보는 바와 같이 건열 처리 시 70℃에서는 생약의 색 및 형태에 영향을 미치지 않았으나, 100℃ 및 150℃ 건열처리에서 색이 진하게 변색되었고, 일부 형태도 일그러져 있었다. 따라서 100℃ 이상의 건열처리는 색 및 형태 등 외관상 생약의 품질저하를 초래하므로 적합하지 않은 것으로 판단되었다. 그러나 방사선 조사의 경우 세균 및 진균을 효과적으로 제거하면서 생약의 외부 형태에 영향을 미치지 않는 것으로 확인되었다.
- 6 x 100) 컬럼을 사용하여 고속액체크로마토그래피를 실시하여 피크 면적으로 검체 중 표준품의 양을 측정하고 그에 대한 평균의 표준편차를 구하였다. 멸균 처리하지 않은 황금 중의 바이칼린 양은 1189.90 mg/10g이었으며, 알콜가스 처리 멸균 후1183.58 mg/10g, 건열멸균 70, 100, 150℃에서 1191.47, 1197.94, 1172.87mg/10g, 방사선 2.5, 5, lOKGy씩 조사 후 1177.50, 1205.83, 1206.30 mg/10 g으로 멸균 전과 멸균 후지표성분의 변화는 1〜2% 내외로 유의성 있는 변화가 관찰되지 않았다(Fig. 4, Table I).
- 본 연구에서는 생약의 멸균법으로 건열, 방사선조사 및 알콜 가스를 이용한 멸균법을 시행한 결과, 100℃ 이상의 건열 처리 시 황금의 색 및 형태에 변화를 초래하여 적당하지 않은 것으로 사료되었다. 그러나 방사선조사 및 알콜 가스 멸균법은 세균 및 진균을 효과적으로 제거하고, 황금의 지표물질인 바이칼린의 함량 및 외부 관능의 변화를 초래하지 않아 생약의 품질관리를 위한 멸균법으로서 제안가능성이 있을 것으로 판단된다.
- 있었다. 생약재에 대한 방사선 조사 후 저분자량 성분의 양은 거의 변화가 없었으나, 황백과 같은 생약재에 들어있는 고분자량 성분은 방사선 조사에 의해 그 점도가 감소한 것을 확인한 바 있다.' 그러나 국내에서 선행된 연구에 따르면, 인삼엽록차에 대한 방사선 조사 및 에틸렌옥사이드가스 멸균법에 의해 인삼의 주요성분인 진세노사이드 함량에 대한 영향은 거의 확인되지 않은 바 있었다.
후속연구
- 본 연구에서는 생약의 멸균법으로 건열, 방사선조사 및 알콜 가스를 이용한 멸균법을 시행한 결과, 100℃ 이상의 건열 처리 시 황금의 색 및 형태에 변화를 초래하여 적당하지 않은 것으로 사료되었다. 그러나 방사선조사 및 알콜 가스 멸균법은 세균 및 진균을 효과적으로 제거하고, 황금의 지표물질인 바이칼린의 함량 및 외부 관능의 변화를 초래하지 않아 생약의 품질관리를 위한 멸균법으로서 제안가능성이 있을 것으로 판단된다. 물론 추후 다른 생약에 대한 추가적인 실험과 규모의 확대를 통해 실용화를 위한 연구가 필요할 것으로 사료된다.
- 그러나 방사선조사 및 알콜 가스 멸균법은 세균 및 진균을 효과적으로 제거하고, 황금의 지표물질인 바이칼린의 함량 및 외부 관능의 변화를 초래하지 않아 생약의 품질관리를 위한 멸균법으로서 제안가능성이 있을 것으로 판단된다. 물론 추후 다른 생약에 대한 추가적인 실험과 규모의 확대를 통해 실용화를 위한 연구가 필요할 것으로 사료된다.
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