본 연구에서는 천년초손바닥 선인장 추출분획물의 항산화 활성을 비교, 검토하고자 하였다. 추출용매별 수율 및 항산화 활성을 알아본 결과 70% ethanol로 추출 하였을 경우 추출 수율 및 항산화 활성이 우수하게 나타났다. 70% ethanol 추출물을 hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol, water로 순차 분획하여 BHA, ${\alpha}$-tocopherol과 항산화 활성을 비교하여 보았다. DPPH를 측정하여 free radical 소거활성을 검토한 결과 ethyl acetate 분획물이 가장 우수한 항산화 활성을 나타내었고 BHA와 ${\alpha}$-tocopherol 활성과 견줄만한 효과를 보여주었다. 항산화 활성이 높게 나타난 ethyl acetate 분획물을 취하여 촉진된 자동산화조건에서 AV, POV, TBA 등을 측정하여 항산화 활성을 비교하였다. BHA, ${\alpha}$-tocopherol과 비교하여 AV와 POV 측정결과 BHA가 가장 우수한 활성을 보여주었으며 ${\alpha}$-tocopherol과 ethyl acetate 분획물은 비슷한 정도의 항산화 활성이 나타났다. TBA가에 의한 지질 과산화를 측정한 결과 BHA가 가장 우수한 활성을 보여주었으며 ethyl acetate 분획물은 ${\alpha}$-tocopherol 보다 우수한 활성을 보여주었다. 전체적으로 천년초의 ethyl acetate 분획물은 ${\alpha}$-tocopherol과 비슷한 항산화 활성을 보여주었다.
본 연구에서는 천년초 손바닥 선인장 추출분획물의 항산화 활성을 비교, 검토하고자 하였다. 추출용매별 수율 및 항산화 활성을 알아본 결과 70% ethanol로 추출 하였을 경우 추출 수율 및 항산화 활성이 우수하게 나타났다. 70% ethanol 추출물을 hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol, water로 순차 분획하여 BHA, ${\alpha}$-tocopherol과 항산화 활성을 비교하여 보았다. DPPH를 측정하여 free radical 소거활성을 검토한 결과 ethyl acetate 분획물이 가장 우수한 항산화 활성을 나타내었고 BHA와 ${\alpha}$-tocopherol 활성과 견줄만한 효과를 보여주었다. 항산화 활성이 높게 나타난 ethyl acetate 분획물을 취하여 촉진된 자동산화조건에서 AV, POV, TBA 등을 측정하여 항산화 활성을 비교하였다. BHA, ${\alpha}$-tocopherol과 비교하여 AV와 POV 측정결과 BHA가 가장 우수한 활성을 보여주었으며 ${\alpha}$-tocopherol과 ethyl acetate 분획물은 비슷한 정도의 항산화 활성이 나타났다. TBA가에 의한 지질 과산화를 측정한 결과 BHA가 가장 우수한 활성을 보여주었으며 ethyl acetate 분획물은 ${\alpha}$-tocopherol 보다 우수한 활성을 보여주었다. 전체적으로 천년초의 ethyl acetate 분획물은 ${\alpha}$-tocopherol과 비슷한 항산화 활성을 보여주었다.
Antioxidative effects of several solvents extracts of cactus Cheonnyuncho (Opuntia humifusa) grown in Korea were investigated. Because 70% ethanol extract showed relatively high antioxidative activity and extraction yield, it was sequentially fractionated with hexane, chloroform, ethyl acetate, buta...
Antioxidative effects of several solvents extracts of cactus Cheonnyuncho (Opuntia humifusa) grown in Korea were investigated. Because 70% ethanol extract showed relatively high antioxidative activity and extraction yield, it was sequentially fractionated with hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol, and water, Ethyl acetate fraction showed highest scavenging activity against free radical DPPH. Antioxidative activity of ethyl acetate fraction determined based on acid and peroxide values under accelerated oxidation condition of lard was similar to that of ${\alpha}$-tocopherol, but slightly lower than that of BHA. Similar results were observed using TBA method during peroxidation of linoleic acid.
Antioxidative effects of several solvents extracts of cactus Cheonnyuncho (Opuntia humifusa) grown in Korea were investigated. Because 70% ethanol extract showed relatively high antioxidative activity and extraction yield, it was sequentially fractionated with hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol, and water, Ethyl acetate fraction showed highest scavenging activity against free radical DPPH. Antioxidative activity of ethyl acetate fraction determined based on acid and peroxide values under accelerated oxidation condition of lard was similar to that of ${\alpha}$-tocopherol, but slightly lower than that of BHA. Similar results were observed using TBA method during peroxidation of linoleic acid.
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제안 방법
DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)를 사용한 항산화 활성 검정법으로 여러 농도의 시료를 4mL의 methanol에 녹여 1.5X10-4 M DPPH methanol 용액 1 mL를 첨가한 후, 30분간 실온에 방치하여 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도를 1/2로 감소시키는 데 필요한 시료의 양(μg)을 RC(Reduction Concentration)50으로 나타냈으며, 기존 항산화제인 α-tocopherol 및 BHA와 비교하였다 (23).
Lard 100 g에 DMSO(dimethyl sulfbxide)용액에 녹인 시료를 500 ppm 농도가 되도록 가하여 60°C 항온기에 저장하여 30일 후 공전 삼각플라스크에 평취해 분석하였다. 위 유지시료 5g을 취해 ethylether와 ethanol 혼합액(1:2, v/v) 100 mL를 가한 다음 완전히 용해시킨 후, phenolphthalein을 지 시약으로 0.
1). 농축한 추출물을 증류수에 희석한 후 hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol, 물순으로 각각 분액 여두에서 3회 반복 추출한 다음 rotary vacuum evaporator로 용매를 증발시킨 용액을 동결건조시켜 고형물 함량을 산출하였다 (22).
후)혹한에서도">혹한에서도 생존이 가능해 수년에서 수십년 생의 경작이 가능한 다년생 식물이다. 본 연구에서는 천년초 선인장 줄기의 항산화 활성을 평가하기 위하여 용매 추출과 분획을 행하여 acid value(AV), peroxide value(POV), TBA에 의한 지질 과산화, DPPH에 의한 free radical 소거능 등을 측정, 기존의 시판 항산화제와 비교 하였다.
01 N Na2S2O3 용액으로 적정하여 POV로 하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조군과 값을 비교하였다 (24). 산가 및 과산화물가의 계산은 다음과 같이 하였다.
5X10-4 M DPPH methanol 용액 1 mL를 첨가한 후, 30분간 실온에 방치하여 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도를 1/2로 감소시키는 데 필요한 시료의 양(μg)을 RC(Reduction Concentration)50으로 나타냈으며, 기존 항산화제인 α-tocopherol 및 BHA와 비교하였다 (23).
용매별 추출물을 얻어 항산화 활성을 검증한 결과 우수한 활성을 보여준 70% ethanol추출물을 극성을 달리 한 용매별로 분획하여 분획물을 얻었다 (Fig. 1). 농축한 추출물을 증류수에 희석한 후 hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol, 물순으로 각각 분액 여두에서 3회 반복 추출한 다음 rotary vacuum evaporator로 용매를 증발시킨 용액을 동결건조시켜 고형물 함량을 산출하였다 (22).
천년 초 선인장의 항산화 효과를 검토하기 위해 동결건조하여 마쇄한 시료를 각각 chloroform, ethyl acetate, ethanol, 70% ethanol과 증류수로 추출하였다. 이것의 일부를 110℃에서 건조시킨 후 고형분 함량을 추출 수율로 계산한 결과 추출 수율은 Table 1과 같다.
대상 데이터
오미자(22)의 경우 높은 항산화 활성을 보여주는 추출용매와 분획용매가 서로 상이함을 보여주었으며 수율 또한 추출용매와 분 획용매가 상이함을 보여주었다. 때문에 항산화물질의 추출 수율을 높이고자 수율이 높은 70% ethanol을 추출용매로 선택하였다. 대상물에 따라 추출용매의 항산화 활성에 상당한 차이가 있는 것으로 알려지고 있는데 sweet potato(28)와 붉나무(29)는 methanol, 석이버섯(30)은 diethyl ether, 산수유(31)는 물, 소목(32)은 ethyl acetate 등이 효율적인 용매로 사용되고 있어 용매의 극성에 따라 추출물질이 달라짐을 알 수 있다.
천년 초 선인 장 줄기는 충남 아산시 소재(주)여러분의 천년 초에서 재배해 동결건조한 것을 공급받아 분쇄해 사용하였다. 항산화 효과를 측정하기 위해 기질로 사용된 유지는 항산화제가 첨가되지 않은 돈지를 사용하였고 추출 및 분 획용 시약은 1급을, 나머지 시약은 특급을 사용하였다.
천년 초 선인 장 줄기는 충남 아산시 소재(주)여러분의 천년 초에서 재배해 동결건조한 것을 공급받아 분쇄해 사용하였다. 항산화 효과를 측정하기 위해 기질로 사용된 유지는 항산화제가 첨가되지 않은 돈지를 사용하였고 추출 및 분 획용 시약은 1급을, 나머지 시약은 특급을 사용하였다.
데이터처리
본 연구의 결과는 평균으로 나타내었고, 각 실험군 간의 비교 분석은 SAS system을 이용하여 ANOVA 분석 후 α = 0.05에서 Duncan's multiple range test를 사용하여 유의성을 검증하였다.
DPPH법에 의해 항산화 효과가 우수하게 나타난 ethyl acetate 분획물의 lard에 대한 항상 화성을 평가하기 위해 가속시킨 자동산화조건에서 AV를 측정한 결과는 Table 5와 같고 POV를 측정한 결과는 Table 6과 같다. 60°C 항온기에 30일간 방치 후 AV는 BHA가 1.5로 가장 낮게 나타났고 천년 초 추출물의 ethyl acetate 분획물은 α-tocopherol과 비슷한 값을 보여주었다, POV는 BHA가 77meq/kg로 control의 절반에도 미치지 못하는 가장 낮은 값을 나타냈고 천년 초 추출물의 ethyl acetate 분획물은 BHA 다음으로 좋은 값을 보여주었으나 α-tocopherol과 큰 차이를 보여주지는 않았다.
70% Ethanol 추출물을 극성에 따라 순차적으로 용매별로 추출한 분획물을 상기와 동일한 방법으로 계산한 수율은 Table 3과 같다. 70% ethanol 추출물의 용매별 분획물의 추출 수율을 보면 물분획이 64%로 가장 높았으며 butanol, hexane, ethyl acetate, chloroform 순이었다. 거봉(33), 엉겅퀴(34) 등의 용매별 분획물의 수율 또한 hexane층을 제외하고 용매의 극성이 높을수록 분획물의 수율이 높은 것과 일치하는 결과를 보여주고 있다.
2와 같다. BHA가 51%로 가장 우수한 결과를 보여주었고 천년 초 추출물의 ethyl acetate 분획물(36%)과 α-tocopherol(25%) 순으로 활성이 높게 나타났다. DPPH법에 의한 항산화 활성평가에서 가장 좋은 활성을 보여준 α-tocopherol이 TBA가에서 가장 낮은 활성을 보여주는 이유는 α-tocopherol이 매우 효과적인 산소 소거제 (singlet oxygen quencher)로 작용함으로써 free radical의 소거능은 우수하나 linoleic acid의 자동산화에 있어서는 일정 농도 이상에서 오히려 산화촉진제로서 작용할 수 있기 때문이라고 생각되어진다(35,36).
70% Ethanol 추출물을 유기용 매별로 분획한 분획물의 DPPH 법에 의한 free radical 소거 활성을 비교한 결과는 Table 4와 같다. DPPH를 50% 환원시키는 데 필요한 추출물의 첨가 농도(RC50)를 보면 천년 초 선인장 추출물의 ethyl acetate분획물이 4.9 μg/mL로 다른 분획물보다 월등히 우수한 효과를 보여주었다. Ethyl acetate 분획물은 상업용인 BHA(4.
항산화 활성을 비교한 결과는 Table 2와 같았다. DPPH를 50% 환원시키는 데 필요한 추출물의 첨가 농도(RC50)를 보면 천년 초 선인장의 ethyl acetate 추출물이 20.6 μg/mL로 가장 우수한 효과를 보여주었고 ethanol 추출물(59.8 μg/mL)과 70% ethanol추출물(49.5 μg/mL) 또한 우수한 효과를 보여주었다. Ethyl acetate 추출물은 활성이 가장 좋지만 추출 수율이 0.
Chlorofbrm과 ethyl acetate 추출물은 아주 낮은 추출 수율을 보여주었다. 전체적으로 극성이 높을수록 추출 수율이 높은 경향을 보여주고 있다. 제주도 손바닥선인장 열매(26), 작두콩(27) 등에서도 추출용매의 극성이 높을수록 비교적 높은 추출 수율을 보여주는 데 이의 결과와 일치함을 보여주었다.
이것의 일부를 110℃에서 건조시킨 후 고형분 함량을 추출 수율로 계산한 결과 추출 수율은 Table 1과 같다. 증류수 추출물이 16%로 가장 높은 추출수율을 보였고 다음으로 70% ethanol과 ethanol 추출물이 비슷한 수율을 보여주었다. Chlorofbrm과 ethyl acetate 추출물은 아주 낮은 추출 수율을 보여주었다.
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