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문제 정의
- 본 실험에서는 질병 억제제로서의 항균제 개발을 위해 한약재의 항균 활성을 검사하고자 실시하였다.
제안 방법
- 제거하였다. 각 용매별 농축물은 농도를 일정하게 조절하여 각 균주별 항균활성을 측정하였다.
- 45㎛ membrane filter 로 여과한 다음 100ml의 nutrient broth에 추출물의 soluble solid를 기준으로 하여。, 100, 300 및 500ppm 농도별로첨가한후 slant 에서 배양된 각 균주 1 백금이를 취해 lOnM nutrient broth에 접종하여 37℃에서 24시간동안 배양하였다. 배양액 0.1ml씩을 취해 다시 10ml nutrient broth에 접종하여 37℃에서 24시간동안 배양한 후 활성화된 배양액 0.5ml씩을 접종하여 37℃에서 72시간까지 배양하면서 미생물의 생육정도를 확인하기 위하여 12시간마다 620nm에서 흡광도를 측정하였다. 흡광도 측정 시 nutrient broth를 blank로 사용하였다.
- 본 실험에 사용된 한약재 중에서 5mg/ml 수준에서 항균활성이 나타난 MeOH추출물과 EtOH추출물을 대상으로 12시간마다 농도별 즉 Oppmfcontrol), lOOppm, 300ppm 및 500ppm에 활성화된 균액를 첨가하여 미생물의 생육상태를 측정하였고, 그 결과는 Fig. 1부터 Fig. 3과 같다.
- 시료 추출액의 조제는 각 한약재의 특정부위를 대상으로 약재 200 g을 세절하거나 잘게 부수어 수직으로 환류냉각관을 부착시킨 round flask에 시료의 5배 정도의 MeOH(v/w) 과 EtOH(w/v) 를 첨가하여 혼합한 후, heating mantle로 80℃에서 5시간동안 3회 환류 추출하였다. 주줄액은 Whatman No.
- 저해농도 측정은 한천배지 확산법을 이용하였다. 여과하여 제균시킨 농축물을 0.2mg/ml에서 50mg/ml의 범위에서 paper disc에 첨가 한 후 건조하고 시험균을 함유한평판배지위에 놓은 후, 37℃에서 24시간배양한후육안으로 관찰 했을때 미생물이 증식되지 않는 농도를 MIC로 결정하였다
- 주줄액은 Whatman No. 2 여과지로 2회 여과한 후 rotary vac— uum evaporator (Eyela Tokyo Rikakikai Co.) 로 감압 농축하였으며, 최종적으로 각각의 농축물은 5, 10, 30 및 50mg/ml로 희석하여 사용하였다.
대상 데이터
- 본 항균활성 실험에 사용한 한약재는 본초강목, 식물도감에서 항균 작용을 가지고 있는 약재를 참고하여 선정하였고, 실험에 사용한 약재는 시중에서 유통되고 있는 약재로 건조상태가 좋은 것을 구입하여 깨끗이 손질한 후 사용하였다 약재명과 사용부위는 Table 1과 같다.
- 항균력 측정에 사용한 균주는 국립보건원에서 분양받은 Staphylo coccus aureus(ATCC 6538) 이며 균의 증식과 항균력 측정을 위한 배지로는 nutrient agar를 사용하였다.
이론/모형
- 최소 저해농도 측정은 한천배지 확산법을 이용하였다. 여과하여 제균시킨 농축물을 0.
- 항균력 검색에 사용한균주는 평판배지에 배양된 각균주 2~3 백금이를 취해 10ml nutrient broth의 균 생육 액체배지에 접종하고, 37℃ 에서 24시간 배양하여 활성화시킨 후시험균액 0.2 ml를 무균적으로 첨가하여 기층용 배지 위에 고르게 펴지도록 멸균된 유리막대로 도포한 뒤 Piddok(1990)의 paper disc에 의한 한천배지 확산법으로 측정하였다
성능/효과
- 18종의 한익자1 MeOH 추출물과 EtOH 추출물의 Staphyloco ecus aureus에 대한 항균력을 조사한 결과 하고초 소목, 오배자 및 향유는 5mg/ml 수준에서 항균활성을 나타내었으며 지실 금은화및 황금등은 10mg/ml, 오미자 초두구 및 희렴 등은 30tng/ml 이상에서 항균성을 보였다
- 소목은 추출물의 추출용매와 첨가농도에 관계없이 배양 72시간까지 완전히 증식이 억제된 상태를 보였으며 오배자는 추출용매에 관계없이 lOOppm 첨가시 증식저지 효과가 있으며 300~500ppm 첨가 시 배양 72시간까지 증식이 정지된 상태를보였고 황금은 100 ppm에서 증식 억제 효과를 보이지 않고 있으며 300ppm은 증식저지 효과를 보였고 500ppm에서는 증식억제 효과를 보이고 있다.
- 오배자의 경우모든분획물에서 항균활성이 나타났으며, 소목의 경우 핵산과 물 황금은 BuOH와 물 층을 제외한 분획물에서 항균 활성을 보였다 분획 층중 EtOAc층이 다른분획층에 비해 성장억제 효과가 가장 높게 나타났으나 MeOH추출물과 EtOH추출물의 뚜렷한 차이는 나타나지 않았다. 정 등(2000)은 오미자 종자 추출용매별 항균효과에서 모든 시험 균에 전반적으로 강한 항균활성을 나타내는 MeOH추출물을 이용하여 분획한 결과 물 분획물에서 대체적으로 항균 활성이 낮았으며 S.
- 이상의 결과로 볼 때 제대염, 부종성 피부염 및 관절염 등의 다양한 가축 질병을 일으키는 Staphylococcus aureusiA 감염을 예방하거나 또는 치료할 수 있는 한악자1 추출물 사료첨가제의 개발 가능성을 확인할 수 있었다
- 최소저해농도는 MeOH추출물에서는 l~34mg/ml, EtOH추출물에서는 l~46mg/ml 농도에서 항균활성을 보였으며 분획 증 중 EtOAc증에서 성장억제효과가 가장 높게 나타났다.
- 하고초 소목, 오배자 및 향유의 MeOH추출물과 EtOH추출물은 5mg/ml 수준에서 모두 항균활성을 나타내었으며 지실, 금은화 및 황금 등은 lWml, 오미자 초두구 및 희렴 등은 30mg/ml 이상에서 항균성을 보였으나 추출용매에 따른 항균효과의 차이는 없었다
- 항균력이 가장우수한 것으로 확인된 소목, 오배자 및 황금 추출물 의미생물 증식억제 효과를 조사하기 위해 증식배지에 각각의 추출물을 0, 100, 300 및 500ppm의 농도로 첨가하여 균주의 증식을 조사한 결과 배양후 24시간에 소목 추출물 무첨가구의 01^20값이 0.4인 반면 lOOppm 이상의 추출물 첨가시 0.02-0.03정도로 균증식이 현저히 억제되었고, 오배자 추출물 무첨가구의 0D620값이 Q4인 반면 300ppm 이상의 추출물첨가시 0.02-0.03 정도로균증식이 현저히 억제되었으며 황금추출물무첨가구의 OD620값이 0.4인 반면 300spm이상의 추출물 첨가 시 0.02~0.07 정도로 균증식이 현저히 억제되었다.
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