An 8-week feeding trial was conducted to investigate the effects of dietary supplementation with probiotics as a feed additive for Juvenile olive flounder (Paralichthys olivaceus). Three experimental diets supplemented with Bacillus polyfermenticus (BP), Bacillus licheniformis (BL), or Bacillus poly...
An 8-week feeding trial was conducted to investigate the effects of dietary supplementation with probiotics as a feed additive for Juvenile olive flounder (Paralichthys olivaceus). Three experimental diets supplemented with Bacillus polyfermenticus (BP), Bacillus licheniformis (BL), or Bacillus polyfermenticus plus Saccharomyces cerevisiae, (BP+SC) at $1.0{\times}10^7CFU/kg$ diet on a dry-matter basis were prepared. The basal diet was used as a control. After the 8-week feeding trial, the respiratory burst activity (NBT assay) of fish fed the BP + SC diet was significantly higher than that of fish fed the control diet. Fish fed the BP, BL and BP + SC diets had significantly lower cumulative mortality than did fish fed the control diet after the third day of the challenge test (P<0.05). However, there were no significant differences among fish fed the experimental diets in weight gain, feed efficiency, protein efficiency ratio, hematosomatic index, condition factor, survival rate, or Iysozyme activity. Results could suggest that dietary B. polyfermenticus, B. licheniformis, and B. polyfermenticus +S. cerevisiae enhance nonspecific immunity and disease resistance in juvenile olive flounder.
An 8-week feeding trial was conducted to investigate the effects of dietary supplementation with probiotics as a feed additive for Juvenile olive flounder (Paralichthys olivaceus). Three experimental diets supplemented with Bacillus polyfermenticus (BP), Bacillus licheniformis (BL), or Bacillus polyfermenticus plus Saccharomyces cerevisiae, (BP+SC) at $1.0{\times}10^7CFU/kg$ diet on a dry-matter basis were prepared. The basal diet was used as a control. After the 8-week feeding trial, the respiratory burst activity (NBT assay) of fish fed the BP + SC diet was significantly higher than that of fish fed the control diet. Fish fed the BP, BL and BP + SC diets had significantly lower cumulative mortality than did fish fed the control diet after the third day of the challenge test (P<0.05). However, there were no significant differences among fish fed the experimental diets in weight gain, feed efficiency, protein efficiency ratio, hematosomatic index, condition factor, survival rate, or Iysozyme activity. Results could suggest that dietary B. polyfermenticus, B. licheniformis, and B. polyfermenticus +S. cerevisiae enhance nonspecific immunity and disease resistance in juvenile olive flounder.
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문제 정의
따라서 본 실험은 국내 주요 양식 대상종인 넙치를 대상으로 사료내 생균제 첨가시에 따른 성장 및 비특이적 면역반응에 미치는 영향을 평가하기 위하여 실시하였다.
제안 방법
각각의 실험종료 후, 증체율 조사와 함께 혈액성분 분석을 위하여 실험어를 채혈하기 전까지 약 24시간 동안 절식시킨 실험어를 각 수조당 3마리씩 무작위로 추출하여 실험 어의 미부정맥에서 혈액을 채혈한 후, micro-hematocrit 방법 (Brown, 1980)에 의해 헤마토크리트 (hematocrit, PCV)를측정하고, 동시에 Drabkin's 용액을 사용하여 cyan-methemo- globin 방법 (Sigma Chemical, St. Louis MO; total hemoglobin procedure No. 525)으로 헤모글로빈 (hemoglobin, Hb)을 즉정하였다. 혈청성분의 분석을 위하여 채혈한 혈액을 항응고제가 처리되지 않은 원심분리관에 넣고 실온에 30분간 방치한 후 3, 000 rpm에서 10분간 원심분리하여 냉장보관하면서 16시간 이내에 분석하였다.
실험종료 후, 증체율, 사료효율, 일간성장률, 단백질전환효율, 간중량지수, 비만도 및 생존율을 조사하였다. 간중량지수를 구하기 위해 각 수조별로 3마리씩 간의 무게를 측정하였다.
7kJ/g)으로 조절하였다 (NRC, 1993). 그리고 각 실험사료별 생균제의 첨가량에 따른 가용에너지의 차이는 셀룰로오스 (cellulose)를 첨가하여 동일하게 맞추어 주었다. 모든 실험사료는 원료를 혼합한 후 펠렛제조기로 압출.
모든 실험에 있어 어체 측정은 2주 간격으로 실시하였으며, 성장률을 측정하기 위하여 24시간 절식시킨 후 MS222 (100 ppm)로 마취시켜 어체무게를 측정하였다. 실험종료 후, 증체율, 사료효율, 일간성장률, 단백질전환효율, 간중량지수, 비만도 및 생존율을 조사하였다.
사육실험 종료 후 24시간 절식시킨 넙치 치어를 사용하였다. 독성이 있는 Edwardsiella tarda 부유액 (bl" cFU/mL)을 1.
실험사료의 단백질원으로 북양어 분 (white fish meal), 콘글루텐 밀 (corn gluten meal), 탈피 대 두박 (dehulled soybean meal)을 사용하였으며, 탄수화물원으로는 밀가루 (wheat flour)를, 지 질원으로는 고도불포화지 방산 (n-3 HUFA) 이 다량 함유된 오징 어간유 (squid liver oil)를 사용하였다. 생균제의 첨가효과를 확인하기 위하여 Bacillus polyfermenticus (BP), Bacillus licheniformis (BL) 및 복합종균 (Bacillus poly fermenticus + Saccharomyces cerevisiae; BL+SC)을 실험 사료 내 에 각각 107 CFU/kg diet 수준으로 첨 가하였다. 실험 사료의 조단백질 함량은 50.
양식사료연구센터로 운반하였다 . 실험 사료 및 환경에 적응시키기 위해 2주일간 기초사료를 공급하면서 예비사육을 하였다. 실험어는 평균무게 18.
생균제의 첨가효과를 확인하기 위하여 Bacillus polyfermenticus (BP), Bacillus licheniformis (BL) 및 복합종균 (Bacillus poly fermenticus + Saccharomyces cerevisiae; BL+SC)을 실험 사료 내 에 각각 107 CFU/kg diet 수준으로 첨 가하였다. 실험 사료의 조단백질 함량은 50.0%, 가용에너지는 16.4 kJ/g (단백질, 16.7 kJ/g; 지질, 37.7 kJ/g; 탄수화물, 16.7kJ/g)으로 조절하였다 (NRC, 1993). 그리고 각 실험사료별 생균제의 첨가량에 따른 가용에너지의 차이는 셀룰로오스 (cellulose)를 첨가하여 동일하게 맞추어 주었다.
충분한 산소공급을 위해 에어스톤을 설치하였으며, 실험기간 동안 평균 수온은 15±2°C로 전 실험기간 동안 자연수온에 의존 하였다. 실험사료를 1일 2회 어체중의 1.8±0.5% (오전 10시, 오후 4시) 씩 총 8주간 공급하였다.
마취시켜 어체무게를 측정하였다. 실험종료 후, 증체율, 사료효율, 일간성장률, 단백질전환효율, 간중량지수, 비만도 및 생존율을 조사하였다. 간중량지수를 구하기 위해 각 수조별로 3마리씩 간의 무게를 측정하였다.
5% NaCl이 첨가된 trypticase soy agar (RSA)에 27^에서 48시간 배양하여 준비하였다. 어류당 박테리아 부유물을 0.1 mL씩 복강주사한 후 폐사를 기록하였다. 폐사어의 폐사 원인을 확인하기 위해 매일 폐사된 어체로부터 신장을 채취하여 TSA에 배양하여 E.
그 후 2 M KOH 120以L/mL을 첨가하여 insoluble blue fbrmazan을 수용 성으로 변화시 키고 DMSO (dimethyl sulphoxide, Sigma- Aldrich) 140“L/well를 첨가하였다. 최종적으로 그 plate를 OD 620nm에서 micro-reader (Packard Spectrocount TM)로 즉정하여 실험어의 respiratory burst activity를 분석하였다.
也균에 대한 저항성을 확인한 결과 BP + SC를 공급한 실험구가 전 실험기간동안 대조 구에 비하여 폐사율이 유의하게 낮은 값을 나타내었다. 폐사 개체는 E. tarda를 접종한지 1일째부터 발생 하였으며, 접종후 7일째 종료 하였다. 모든 폐사된 개체로에서 E.
1 mL씩 복강주사한 후 폐사를 기록하였다. 폐사어의 폐사 원인을 확인하기 위해 매일 폐사된 어체로부터 신장을 채취하여 TSA에 배양하여 E. 如也의 존재를 확인하였다.
525)으로 헤모글로빈 (hemoglobin, Hb)을 즉정하였다. 혈청성분의 분석을 위하여 채혈한 혈액을 항응고제가 처리되지 않은 원심분리관에 넣고 실온에 30분간 방치한 후 3, 000 rpm에서 10분간 원심분리하여 냉장보관하면서 16시간 이내에 분석하였다. 혈청성분은 임상용 kit (아산제약주식회사, 대 한민국)를 사용하여 종단백 질 (total protein)은 biuret법으로, 트라이 글라이 세 라이드 (triglyeride)와 글루코스 (glucose) 는 효소법으로 그리고 GOT (glutamic oxaloacetic acids)와 GPT (glutamic pyruvic acid)는 Reitman-Frankel법으로 분석하였다.
본 연구는 부경대학교 사료영양연구소와 (주)바이넥스가 산학연 컨소시엄으로 수행된 .결과이며, 연구개발비 지원과 함께 시료를 제공해 주신 (주)바이넥스에 감사드립니다.
실험사료의 단백질원으로 북양어 분 (white fish meal), 콘글루텐 밀 (corn gluten meal), 탈피 대 두박 (dehulled soybean meal)을 사용하였으며, 탄수화물원으로는 밀가루 (wheat flour)를, 지 질원으로는 고도불포화지 방산 (n-3 HUFA) 이 다량 함유된 오징 어간유 (squid liver oil)를 사용하였다. 생균제의 첨가효과를 확인하기 위하여 Bacillus polyfermenticus (BP), Bacillus licheniformis (BL) 및 복합종균 (Bacillus poly fermenticus + Saccharomyces cerevisiae; BL+SC)을 실험 사료 내 에 각각 107 CFU/kg diet 수준으로 첨 가하였다.
실험어는 경상북도 포항에 위치한 양식장에서 구입한 후, 국립수산과학원 양식사료연구센터로 운반하였다 . 실험 사료 및 환경에 적응시키기 위해 2주일간 기초사료를 공급하면서 예비사육을 하였다.
실험 사료 및 환경에 적응시키기 위해 2주일간 기초사료를 공급하면서 예비사육을 하였다. 실험어는 평균무게 18.0±0.2g (mean± SD)인 넙치를 사용하였으며 150 L 원형수조에 각 실험구 당각각 20마리씩 3반복으로 무작위 배치하였다. 각 실험 수조는 유수 식으로 유수량은 2-4 L/min으로 조절하였다.
데이터처리
모든 자료의 통계처리는 Computer Program Statistix 3.1 (Analytical Software, St. Paul MN. USA)로 분산분석 (ANOVA test)을 실시하여 최소유의차검정 (LSD: Least Significant Difference)으로 평균간의 유의성 (Pv0.05)을 검정하였다.
이론/모형
Respiratory burst activity는 Secombes (1990) 방법 에 따라 분석하였다. 먼저 실험어의 head kidney를 무균적으로 적출하고 teflon-glass homogenizer (099C K.
실험사료 및 전어체의 일반성분은 실험사료와 각 수조별로 3마리씩 무작위로 추출하여 분쇄한 전어체를 분석하였으며, AOAC (2000) 방법에 따라 수분은 상압가열건조법 (125°C, 3시간), 조단백질은 Kjeldahl 질소정 량법 (N><6.25), 조회분은 직접 회화법으로 분석하였다. 조지방은 샘플을 12시간 동결건조한 후 Soxtec system 1046 (Tacator AB, Sweden)을 사용하여 soxhlet 추출법으로 분석하였다.
25), 조회분은 직접 회화법으로 분석하였다. 조지방은 샘플을 12시간 동결건조한 후 Soxtec system 1046 (Tacator AB, Sweden)을 사용하여 soxhlet 추출법으로 분석하였다.
혈청성분의 분석을 위하여 채혈한 혈액을 항응고제가 처리되지 않은 원심분리관에 넣고 실온에 30분간 방치한 후 3, 000 rpm에서 10분간 원심분리하여 냉장보관하면서 16시간 이내에 분석하였다. 혈청성분은 임상용 kit (아산제약주식회사, 대 한민국)를 사용하여 종단백 질 (total protein)은 biuret법으로, 트라이 글라이 세 라이드 (triglyeride)와 글루코스 (glucose) 는 효소법으로 그리고 GOT (glutamic oxaloacetic acids)와 GPT (glutamic pyruvic acid)는 Reitman-Frankel법으로 분석하였다. 비특이적 면역반응
성능/효과
仞.也균에 대한 저항성을 확인한 결과 BP + SC를 공급한 실험구가 전 실험기간동안 대조 구에 비하여 폐사율이 유의하게 낮은 값을 나타내었다. 폐사 개체는 E.
如袒g균에대한 양성반응을 나타내었으며, 생균제를 첨가한 실험 사료 구가 대조구에 비해 초기폐사율이 낮게 나타났다. 공격 실험을 실시한 5일째부터 종료시 까지는 BP + SC를 공급한 실험구가 BP 및 BL을 공급한 실험구들 보다 유의하게 낮은 값을 나타내었으며, BP 및 BL을 공급한 실험구들은 대조구 (Control)에비하여 유의하게 낮게 나타났다.
tarda를 접종한지 1일째부터 발생 하였으며, 접종후 7일째 종료 하였다. 모든 폐사된 개체로에서 E. 如袒g균에대한 양성반응을 나타내었으며, 생균제를 첨가한 실험 사료 구가 대조구에 비해 초기폐사율이 낮게 나타났다. 공격 실험을 실시한 5일째부터 종료시 까지는 BP + SC를 공급한 실험구가 BP 및 BL을 공급한 실험구들 보다 유의하게 낮은 값을 나타내었으며, BP 및 BL을 공급한 실험구들은 대조구 (Control)에비하여 유의하게 낮게 나타났다.
미생물 균체인 생균제 첨가에 따른 증체율 (WG), 일간성장율(SGR), 사료효율 (FE) 및 단백질 전화효율 (PER)에 있어서 모든 실험구간에 유의한 차이가 나타나지 않았다.
본 실험의 결과를 통하여 배합사료 내 B. p시yferme沛cus와 B. lich아lijbrmis의 단독 첨가시 및 B. p이yfermenticus와 S. ce尸彖s况의 혼합하여 각각 107 CFU/kg diet 수준으로 첨 가하여 공급할 경우 넙치의 비특이적 면역반응 증가와 E. tarda 균에 대한 질병 저항성에 가장 좋은 효과를 나타낼 수 있을 것으로 사료된다.
비특이적 면역반응 분석 방법으로 NBT법과 혈청내 lysozyme 활성을 확인하였으며, BP + SC를 공급한 실험구의 NBT 활성이 대조 구에 비 해 유의 하게 높은 값을 보였으나 (P<0.05), BP, BL 및 BP + SC를 공급한 실험구간에는 유의적인 차이가 나타나지 않았다. 그러나 혈청의 lysozyme 활성에 있어서는 전 실험구간에 있어서 유의 한 차이가 없었다 (Table 5).
그러나 혈청의 lysozyme 활성에 있어서는 전 실험구간에 있어서 유의 한 차이가 없었다 (Table 5). 하지만, 넙 치 사료내 B. polyfermenticus와 S. cerevfsiae의 혼합 첨가 시비 특이적 면역반응을 증가시키는 결과를 확인할 수 있었다. Taoka et al.
생균제를 첨가한 실험사료를 넙치 치어의 혈액 및 혈청 성분변화는 Table 3에 나타내었다. 혈청의 GOT에 있어서 BL 을 첨가하여 공급한 실험구가 BP와 BP+SC를 복합 첨가하여 공급한 실험구보다 유의하게 높은 값을 나타내었으며 (P< 0.05), 대조구와는 유의한 차이가 없었다. Hemoglobin, Hema tocrit, Serum Total protein, Serum glucose 및 Serum GPT는 모든 실험구간에 유의한 차이가 없었다.
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