선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 따라서 본 실험에서는 탄저병의 전형적인 병징을 보이는 고추에서 분리한 탄저병균과 다른 기주에서 분리한 탄저병 균의 생리적인 특징을 살펴보고, 기존에 고추 탄저병의 방제를 위하여 사용하는, benzimidazole계 살균제와 보호용 살균제, 그리고 ergosterol 생합성을 저해하는 살균제를 선발하여 다른 기주에서 분리한 다른 종의 Colletotrichum 에 대한 실험실에서의 병원균 균사생육 억제 효과를 조사하였다.
- 39 ul/m의 농도에서 도 효과적으로 병 원균의 발아를 억제하고 있다고 보고하였다. 본 실험에서는 포자 발아에 대한 억제 효과를 조사하지는 않았지만, 보호용 살균제가 보이는 균사 생장 억제 효과가 C. gloeosporioides와 C. acutatum 사이에는 차이가 있었기 때문에 Colletotrichum속의 탄저병균에 대한 보호용 살균제들의 효과를 비교하고자 하였다.
제안 방법
- 고추 탄저병의 방제에 사용되는 10개의 살균제를 선발하여 실험에 사용하였다. Benzimidazole계 살균제 중에서 carbendazim (90%)을 선발해서 사용하였으며, benzimidazole계와 Nphenylcarbamate계 살균제 사이의 역상관 교차 저항성을 조사하기 위하여 carbendazim과 diethofencarb의 혼합 수화제를 사용하였다. 보호용 살균제로는 dithianon(95% 이상), chlorothalonil(97%), propineb(93%) 등을 사용하였다.
- 보호용 살균제로는 dithianon(95% 이상), chlorothalonil(97%), propineb(93%) 등을 사용하였다. Ergosterol 생합성 저해 (EBI) 살균제로는 tebuconazole (95% 이상), hexaconazole(92%), prochloraz(98.5%) 등을선발하여 다양한 탄저병균인 Colletotrichum 속에 대한 감수성 정도를 조사하였다.
- 병원균의 균사 생장 및 균총색. PDA 배지에서 3일 동안 자란 균총의 가장자리에서 떼어낸 지름 5 mm의 균사 조각을 새로운 PDA 배지에 올려놓고 25℃와 30℃의 암 조건에서 5일간 배양한 후에 균총의 직경을 측정하였다. 실험은 3반복으로 실시하였으며, 3회 실험한 결과 분석하였다.
- 실험에 사용한 Colletotrichum 균주들을 PDA 배지에 접종하여 25P 암상태에서 7일간 배양하였다. 각각 20 m/의 멸균증류수를 병원균을 배양한 plate에 붓고 멸균한 붓으로 분생포자를 수확하여 현탁액을 만들었다. 분생포자 현탁액은 4겹의 가제 (cheeze close) 에 부어 균사조각을 제거하고, 분생포자 현탁액을 준비한다.
- 플라스틱 용기에는 2겹의 키친 타월를 깔고 증류수를 50 m/씩 부어 습실을 유지하였다. 고추 열매의 탄저병 병반 위에 형성된 분생포자를 긁어내어 살균증류수에 현탁하였다. 분생포자 수는 hemacytometer를 이용하여 광학현미경 하에서 조사하면서, 포자의 농도를 약 1X106개ml로 조정하였다.
- 병원균의 균사 생장 및 균총색. 고추, 사과 및 딸기의탄저병균을 PDA 배지에 새롭게 접종하여 25℃와 3CTC의암상태에서 5일간 배양한 후 균총의 직경을 조사하였고, 동일한 조건에서 14일간 배양한 후 균총 색깔을 비교하였다(Table 1). 실험에 사용한 탄저병균들은 균사 생장에 따라서 두 group으로 구별할 수 있었다.
- 다양한 작물로부터 분리한 4종의 탄저병균, C. gloeosporioides, C. acutatum, C. coccodes 및 C. dematium 등의 균주들에 대하여 여러가지 살균제, 즉 carbendazim, carbendazim과 diethofencarb와의 혼합제, 4개의 보호용 살균제 및 3개의 ergosterol 생합성 저해 (EBI) 살균제 등에 대한 약제 반응을 조사하였다. Benzimidazole계에 속하는 carbendazim에 대해서 4종의 Colletotrichum의 반응은; C.
- 조정하였다. 병원균을 접종한 PDA는 25℃의 암조건에서 7일간 배양한 후 아래 공식에 의해서 균사 생장 억제율을 구하였다.
- 고추 열매의 탄저병 병반 위에 형성된 분생포자를 긁어내어 살균증류수에 현탁하였다. 분생포자 수는 hemacytometer를 이용하여 광학현미경 하에서 조사하면서, 포자의 농도를 약 1X106개ml로 조정하였다. 포자 현탁액은 300 μg/m/의 streptomycin0] 첨 가된 PDA(potato dextrose agar, Ditto)에 100 μ/를 도말하여 25℃ 항온기에서 배양하였다.
- 또한 장기 보관을 위해서 CryotubeTM에 병원균의 균사 조각을 넣고, 멸균증류수 대신에 6% DMSO(dimethyl solfoxide)를 사용하여 -70℃에 보관하였다. 새로운 실험을 위해서는 보관하는 균주를 2VC의 PDA에서 배양하여 접종원으로 사용하였다.
- 선발에 사용한 살균제의 원제는 DMSO에 용해시켜 적정 농도가 되게 PDA 배지에 희석하여 첨가하였으며, 모든 배지에서의 DMSO 농도는 1%가 되도록 조정하였다. 병원균을 접종한 PDA는 25℃의 암조건에서 7일간 배양한 후 아래 공식에 의해서 균사 생장 억제율을 구하였다.
- Benzimidazolee] 살균제에 대한 Colletotrichunte 탄저병균의 반응. 실험에 사용한 4가지 종(C. acutatum, C. coccodes, C. dematium, C. gloeosporioides)의 탄저병균을 carbendazim에 대한 EC5O(50% 균사생장억제 농도)과 MIC(100% 균사생장을 억제하는 최소 농도) 값을 조사하였다(Table 2). 고추에서 분리한 C.
- PDA 배지에서 3일 동안 자란 균총의 가장자리에서 떼어낸 지름 5 mm의 균사 조각을 새로운 PDA 배지에 올려놓고 25℃와 30℃의 암 조건에서 5일간 배양한 후에 균총의 직경을 측정하였다. 실험은 3반복으로 실시하였으며, 3회 실험한 결과 분석하였다. 탄저병균을 접종한 PDA 배지를 25℃의 암상태에서 14일간 배양하고 배지 뒷면에서의 균총의 색깔을 조사하였다.
- 분생포자 현탁액은 4겹의 가제 (cheeze close) 에 부어 균사조각을 제거하고, 분생포자 현탁액을 준비한다. 접종원의 분생포자 농도는 hemocytometer를 이용하여 광학현미경에서 분생포자 현탁액의 농도를 1X106개/m/ 로 조정하였다. 온실에서 재배한 고추(품종 : 녹광)의 열매는 70% 메탄올로 표면을 세척하고 혈당측정계(ACCU-CHEK, SoftclixR)를 이용하여 상처를 낸 후 5 ul의 포자 현탁액을 점적하여 접종하였다.
- 온실에서 재배한 고추(품종 : 녹광)의 열매는 70% 메탄올로 표면을 세척하고 혈당측정계(ACCU-CHEK, SoftclixR)를 이용하여 상처를 낸 후 5 ul의 포자 현탁액을 점적하여 접종하였다. 접종한 고추 열매는 플라스틱 용기에 넣고, 2주간 습실 상태로 25℃에서 보관하며 발병정도를 조사하였다.
- 탄저병 균 4종(C. acutatum, C. coccodes, C. dematium, C. gloeo-sporioides)의 3가지 EBI 살균제 (tebuconazole, hexaconazole, prochloraz)에 대한 EC50 값을 조사하였다(Table 5). Colle-totrichum의 종간에는 EBI 살균제에 대한 EC50 값에 있어서의 차이가 보이지 않았다.
- 실험은 3반복으로 실시하였으며, 3회 실험한 결과 분석하였다. 탄저병균을 접종한 PDA 배지를 25℃의 암상태에서 14일간 배양하고 배지 뒷면에서의 균총의 색깔을 조사하였다.
대상 데이터
- gk>eosporiodes(14균주') 등 4종의 탄저병균을 사용하였다. 고주에서 분리한 C. gloeosporioides와 C. acutatkme고추 열매의 탄저병 병반에서 단포자 분리하여 실험에 사용하였다. 채집한 병든 고추 열매는 플라스틱 용기(200 X250X70 mm, LXWXH)에 넣고 24시간 동안 25℃에습실 처리하여 병반 위에 분생포자를 형성시켰다.
- 실험에 사용한 살균제 및 살균제 배지 준비. 고추 탄저병의 방제에 사용되는 10개의 살균제를 선발하여 실험에 사용하였다. Benzimidazole계 살균제 중에서 carbendazim (90%)을 선발해서 사용하였으며, benzimidazole계와 Nphenylcarbamate계 살균제 사이의 역상관 교차 저항성을 조사하기 위하여 carbendazim과 diethofencarb의 혼합 수화제를 사용하였다.
- Benzimidazole계 살균제 중에서 carbendazim (90%)을 선발해서 사용하였으며, benzimidazole계와 Nphenylcarbamate계 살균제 사이의 역상관 교차 저항성을 조사하기 위하여 carbendazim과 diethofencarb의 혼합 수화제를 사용하였다. 보호용 살균제로는 dithianon(95% 이상), chlorothalonil(97%), propineb(93%) 등을 사용하였다. Ergosterol 생합성 저해 (EBI) 살균제로는 tebuconazole (95% 이상), hexaconazole(92%), prochloraz(98.
- 2~3일 후에 PDA에서 자라나온 균사 끝을 떼어내어 새로운 PDA로 옮겨 25℃ 항온기에서 배양하였다. 사과와 딸기에서 분리한 탄저병 균은 경 북대 학교와 논산의 딸기 시험 장으로부터 분양받아 실 험에 사용하였다.
- 병원균의 병원성 검정. 실험에 사용한 Colletotrichum 균주들을 PDA 배지에 접종하여 25P 암상태에서 7일간 배양하였다. 각각 20 m/의 멸균증류수를 병원균을 배양한 plate에 붓고 멸균한 붓으로 분생포자를 수확하여 현탁액을 만들었다.
- 병원균 분리 및 사용한 균주. 실험에는 고추, 사과, 딸기 등의 기주식물에서 단포자 분리한 Colletotrichum coccodesQ균주'), C. dematium(6균주), C. acutatiim(6균주'), C. gk>eosporiodes(14균주') 등 4종의 탄저병균을 사용하였다. 고주에서 분리한 C.
성능/효과
- gloeosporioides의 감수성 균주들의 반응과 유사한 반응을 보였다. 4종의 보호용 살균제에 대해서는 C. agati/me C. gloeosporioides보다도 높은 저항성인 반응을 보였다. 그러나 ergosterol 생합성 저해 살균제에 대해서는 4종의탄저병균이 일정한 경향을 보였다.
- 1 mm/일로 나머지의 다른 탄저병균과 비교할 때 생장 속도가 늦었다(group I). B88을 제외한 사과 탄저병균 9 균주, 2001-44와 2001-45와 같은 고추 탄저병균과 그리고 실험에 사용한 딸기 탄저병균 모두는 25℃와 30℃에서의 균사 생장이 비슷하였으며, 3CTC에서의 균사 생장은 9.7~ 16.0 mm/일로 group I보다 빠르게 생장하는 것을 알 수 있었다(group II). 고추에서 분리한 2001-44와 2001-45의균총의 색은 흰색이었다.
- dematium 등의 균주들에 대하여 여러가지 살균제, 즉 carbendazim, carbendazim과 diethofencarb와의 혼합제, 4개의 보호용 살균제 및 3개의 ergosterol 생합성 저해 (EBI) 살균제 등에 대한 약제 반응을 조사하였다. Benzimidazole계에 속하는 carbendazim에 대해서 4종의 Colletotrichum의 반응은; C. aciitatiwne 사용한 6개의 균주 모두 ECSo 값은 0.001 ~ 3.04 ng/mZ 사이에 있었으며, 모든 균주의 MIC 값은 100 pg/rnZ 이상이었다. 고추와 사과, 딸기에서 분리한 C.
- Kataria 등(1991)은 Rhizoctonia sokmi의 균사 융합 군에 따라서 살균제에 대한 반응이 다르다고 보고하였고, Lyr(1995)는 난균문의 병원균의 방제를 위해서 사용되는 살균제에 대한 Phytophthra 속에 속하는 여러 가지종의 반응을 보고하였는데, 살균제에 따라서는 Phytophthora 의 종에 대한 반응이 크게 차이가 나는 경우가 있었다. Cymoxanil을 배지에 lOOpg/m/로 첨가하였을 때, P. crypogaea와 P. citricola는 균사 생육이 전혀 억제되지 않은 반면에, P. infestans와 같은 병원균의 균사 생육은 100% 억제되었다. 이처럼 살균제에 대한 병원균의 반응은 병원균의 분류상의 근연 관계와는 무관하게 상이한 반응을 나타내는 경우도 있다.
- Lyr(1995)는 난균문에 속하는 Phytophthora속의 다양한 종을 가지고 난균문의 방제를 위해서 등록되어 있는 살균제들의 실험을 수행하였다. Metalaxyl을 0.1 pg/m/ 첨가한 배지에서 P. cactorum의 균사 생육은, 살균제 무처리 배지에서의 균사 생장에 비하여 100% 억제되었지만, P. infestans는 85%만 균사 생장이 억제 되었고, cymoxanyl을 첨가한 경우에도 P. infestans 의 균사 생장은 100% 억제되지만, R cactonmie 3% 밖에 균사의 생육을 억제하지 못하였다고 발표하였다. 이처럼 살균제는 그 종류에 따라서 병원균의 종간에, 또는 가까운 근연 그룹간에서도 그 감수성의 차이가 크게 나타나고 있다.
- Ergosterol 생합성 저해 살균제는 병원균의 ergosterol 생합성 과정 중에서 C14-demethylase의 활성을 저해하는 것으로 알려져 있으며, 병원균의 포자 발아 억제 효과는 미미하나, 균사 생장은 아주 낮은 농도에서도 강하게 억제하는 것으로 보고되어 있다. 결과에서 보는 것과 같이 ergosterol 생합성 저해 살균제에 대한 탄저병균들의 반응은 종이 달라진다고 해서 변화되는 것이 아님을 알 수 있었다.
- 실험에 사용한 탄저병균들은 균사 생장에 따라서 두 group으로 구별할 수 있었다. 고추 탄저병균 10개의 균주와 사과 탄저병균 B88은 균사 생장이 30℃ 보다 25℃에서 빨랐으며, 25℃에서의 균사 생장이 6.7-8.1 mm/일로 나머지의 다른 탄저병균과 비교할 때 생장 속도가 늦었다(group I). B88을 제외한 사과 탄저병균 9 균주, 2001-44와 2001-45와 같은 고추 탄저병균과 그리고 실험에 사용한 딸기 탄저병균 모두는 25℃와 30℃에서의 균사 생장이 비슷하였으며, 3CTC에서의 균사 생장은 9.
- 97 |ig/mZ, MIC값은 4와 20μg/mZ로 나타났다. 고추, 사과, 딸기 에서 분리한 C. gloeosporioidese: carbendazim에 대해서 감수성 균주와 저항성 균주로 분류가 가능하였다. 고추에서 분리한 2001-44와 2001-45, 사과의 B13과 B138, 딸기에의 CGF89, CGF94, CGF252는 모두 감수성 균주로서 EC50 값이 0.
- Table 1에서도 균사 생장 속도와 생장적온을 가지고서 두 개의 group으로 실험에 사용한 탄저병 균의 균주를 나눌 수가 있었다. 고추를 기주로 하는 탄저병 균은 2001-44와 2001-45를 제외한 모든 균사의 생장 속도가 느리고 생장 적온 역시 25℃인 것을 보면, C. 에 가까운 특성을 보이며 , 예외적이 었던 두 균주는 C. gloeosporioidese] 특성을 보이고 있었다. 사과에서 분리한 탄저병균들도 두 개의 group으로 구분할 수 있었지만, 딸기의 탄저병균들은 C.
- gloeosporioidese: carbendazim에 대해서 감수성 균주와 저항성 균주로 분류가 가능하였다. 고추에서 분리한 2001-44와 2001-45, 사과의 B13과 B138, 딸기에의 CGF89, CGF94, CGF252는 모두 감수성 균주로서 EC50 값이 0.001-0.55 μg/mZ로 매우 낮았고 MIC 값도 CGF252 가 100 |ig/m/, CGF89가 10 ul/m이 었으며 나머지 균주는 1 μg/m/로 나타났다. 사과에서 분리한 B90, B92, B147과 딸기 의 CGF50, CGF54, CGF222는 EC50 값과 MIC 값이 모두 lOOpig/m/가 넘어가는 높은 저항성을 보였다.
- 04 ng/mZ 사이에 있었으며, 모든 균주의 MIC 값은 100 pg/rnZ 이상이었다. 고추와 사과, 딸기에서 분리한 C. gloeosporioides는 carbendazim에 대해서 저항성과 감수성 반응이 뚜렷하게 구별되었는데, 고추의 두 균주는 ECS0 값은 0.24와 0.01 ug/m이었으며 MIC 값 역시 1.0 ug/m/ 이었다. 이러한 반응은 사과와 딸기에서 분리한 균주 중에서 감수성 반응을 보이는 균주인 B13과 138, 그리고 CGF89와 94, 252에서도 비슷한 경향을 보였다.
- 딸기에서 분리한 균주는 모두 회색의 균총을 형성하였다. 균총의 색은 고추와 딸기의 경우와 같이 동일한 기주 식물에서 분리한 탄저병균은 모두 동일한 색인 회색의 균총을 형성하고 있었으나, 사과에서 분리한탄저병균은 다른 기주에서 분리한 균주와는 다르게 그 색이 흰색, 회색, 주황색으로 다양하게 나타났다. 균총의 색이 탄저병균의 분류의 기준이 되기 때문에 탄저병균을 동정하고자 할 경우 균총의 색을 관찰하는 경우가 있었다.
- Bernstein 등(1995)은 균총의 색과 균주의 균사 생장 속도와 관련이 있으며, 균총색이 오렌지색을 띄는 균주의 균사생육은 느리지만, 회색을 띄는 균주의 색은 빠르다고 보고하고 있다. 본 실험에서는 균총의 색이 Colletotrichum속을 분류, 동정하는 기준이 될 수는 없는 것 같지만, 균사의 생장 속도는 Colletotrichum속을 동정하는 기준이 될 수 있을 것으로 판단한다. Adaskaveg와 Forster (2000)는 균사 생장의 속도를 가지고서 C.
- 55 μg/mZ로 매우 낮았고 MIC 값도 CGF252 가 100 |ig/m/, CGF89가 10 ul/m이 었으며 나머지 균주는 1 μg/m/로 나타났다. 사과에서 분리한 B90, B92, B147과 딸기 의 CGF50, CGF54, CGF222는 EC50 값과 MIC 값이 모두 lOOpig/m/가 넘어가는 높은 저항성을 보였다. 몇몇의 연구자들에 의해서 C.
- gloeosporioidese] 특성을 보이고 있었다. 사과에서 분리한 탄저병균들도 두 개의 group으로 구분할 수 있었지만, 딸기의 탄저병균들은 C. gloeosporioides의 group II 에 속하는 특성을 보이고 있었다. 병원균의 분류, 동정을 균사의 생장 특성만을 가지고서 실시할 수는 없지만, 최소한 고추, 사과 딸기에서 분리한 탄저병균들을 두 개의 group으로 구별할 수는 있었다.
- 결국 Colletotrichum 속의 탄저병균의 정확한 동정을 위해서는 분자생물학적인 방법을 통해야하며, 살균제의 반응은 분류, 동정에 필요한 기본적인 정보만을 제공한다고 할 수 있다. 하지만 본 실험에 사용한 균주에서는 Table 3와 같이, Ishii 등 (1998)이 보고한 것과 같은 예외적인 균주를 발견할 수 없었으며, 국내의 균주는 아직까지 benzimidazole계와 Nphenylcarbamate계 살균제에 대한 반응을 가지고서 두 종의 탄저병균을 분류할 수 있을 것으로 생각된다.
후속연구
- 이러한 상황에서 병원균이 방제를 위하여 사용하는 살균제에 대한 반응이 다르다면, 포장에서 살균제를 사용하였을 때의 방제 효과도 변화할 것으로 예상한다. 본 실험의 결과와 같이 benzimidazole계 살균제와 보호용 살균제에 속하는 살균제들을 포장에서 직접 사용할 때에는 우점종의 변화를 감안하여 방제 시스템을 확립해야 할 것이다. 그러나 살균제 중에는 ergosterol 생합성을 저해하는 살균제와 같이 CoHetotfichiirri의 종에 관계없이 유사한 반응을 보이는 살균제들도 있었다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.