선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 국내 축산 분야에서도 봉독요법을 이용하여 돼지 관절염에 대한 치료 효과5), 단미 창상에 대한 생봉독 요법6), 모돈의 무유증에 대한 치료 효과7) 등에 대하여 보고한 바 있으나, 축산에서의 봉독요법은 대부분 살아있는 벌을 이용한 봉침요법으로 실제 농가에서 적용이 어렵고, 침술에 의한 효과가 병행되므로 본 연구에서는 봉침이 아닌 벌에서 채집된 봉독을 직접 가축에 투여하여 질병치료에 적용하고자 봉독 자체의 항세균 효과를 조사하기 위하여 일차적으로 가검물에서 분리된 세균에 대하여 최 소억 제 농도 (minimum in hibitory concentration, MIC), 최소살균농도 (minimum bactericidal concentration, MBC) 및 약제 내성을 조사하였다.
가설 설정
- :Growing in 512㎍/㎖ solution of bee venom.
제안 방법
- 105 CFU/㎖로 하여 24시간 배양 후 660nm에서 흡광도를 측정하여 배지의 탁도를 확인하였으며, 각 희석배수의 봉독과 균이 포함된 순수배지액의 흡광도(optical density, OD)값과 같은 결과를 나타내는 최소농도를 MIC로 결정하였다. MBC를 측정하기 위하여 각 균주별로 측정된 MIC 농도 전후의 배양액 각 0.1㎖의 배양액을 혈액 배지에 균일하게 도말하여 37℃에서 24시간 배양후균의 발육 유무를 확인하여 최종 MBC를 결정하였다.
-
측정하였다. MIC측정은 MH broth에 봉독을 넣고 2배로 단계 희석한 후, 균의 최종 희석농도를 2.5×
105 CFU/㎖로 하여 24시간 배양 후 660nm에서 흡광도를 측정하여 배지의 탁도를 확인하였으며, 각 희석배수의 봉독과 균이 포함된 순수배지액의 흡광도(optical density, OD)값과 같은 결과를 나타내는 최소농도를 MIC로 결정하였다. MBC를 측정하기 위하여 각 균주별로 측정된 MIC 농도 전후의 배양액 각 0. - 성상검사를 실시하였다. TSI agar 에서 alkine slant, acid but를 나타내고, indol 생산 음성, methyl red 양성, urease 음성인 균을 선택하여 운동성이 있는 균주는 API 20E 킷트를 사용하였고, 운동성이 없는 균주에 대하여는 API 20E 킷트 외 dulcitol, rhamnose, maltose 분해시험을 추가로 실시하였다.
- 꿀벌에서 채집된 봉독을 병성감정 의뢰된 가검물에서 분리된 세균에 대한 MIC 및 MBC를 측정한바 다음과 같은 결과를 얻었다.
- 돼지에서는 설사분변 및 장내용물, 삼출성 표피 염이 있는 가피, 닭에서는 간, 심장 등 실질 장기에서 분리된 균이며, 대장균은 Blood agar에서 용혈 유무를 확인하였고, MacConkey agar에서 lactose 를 분해하는 집락을 선택하여 TSI agar에서 acid slant, acid butt를 나타내며, SIM agar에서 운동성 유무를 확인하고 indol 생산, methyl red 음성, Voges-Pros- kauer 음성인 균을 Escherichia coli로 추정하여 API 20E (Biomerieux, France) 동정 킷트를 사용하여 당분해 등의 생화학적 성상 검사를 하였다.
- 살모넬라는 MacConkey agar에서 lactose를 비분해 하고 SS agar에서 투명하거나 H2S를 산생하는 집락을 선택하여 Mucap test reagent (Biolife, Italy)를 사용하여 암실에서 366nm의 UV lamp (UVP, USA)에서 푸른 형광색을 발하는 집락을 Salmonella속 균으로 추정하여 생화학적 성상검사를 실시하였다. TSI agar 에서 alkine slant, acid but를 나타내고, indol 생산 음성, methyl red 양성, urease 음성인 균을 선택하여 운동성이 있는 균주는 API 20E 킷트를 사용하였고, 운동성이 없는 균주에 대하여는 API 20E 킷트 외 dulcitol, rhamnose, maltose 분해시험을 추가로 실시하였다.
- 포도상구균은 그람양성 이며, 혈액배지상의 용혈유무, 난황이 첨가된 Baurd-Parker agar에서 혼탁한 백색환 유무, coagulase test 및 API staph 킷트를 사용하여 생화학적 성상 검사를 하였다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용된 표준균주는 농촌진흥청에서 한국미생물보존센터로부터 분양받아 사용 중인 균주를 재분양 받아 사용하였으며, 그람 양성균으로는 Staphylococcus aureus ATCC 6538, Streptococcus mutans ATCC 25175 그리고 그람 음성균으로는 Salmonella typhimurium KCCM 40253을 사용하였다. 야외 분리균은 Table 1과 같으며, 2004년 9월부터 2005년 10월까지 병성감정 의뢰된 돼지와 닭의 병변에서 분리 보관된 균을 사용하였다.
- 본 실험에 사용한 봉독은 봉독채취기 전문업체인 청진테크와 농촌진흥청 농업과학기술원 농업생물부에서 생산된 건조상태의 봉독을 기증받아 실험 직전 멸균증류수에 필요한 농도로 희석하여 사용하였다.
- 야외 분리균은 Table 1과 같으며, 2004년 9월부터 2005년 10월까지 병성감정 의뢰된 돼지와 닭의 병변에서 분리 보관된 균을 사용하였다.
이론/모형
- 각 균주에 대한 봉독의 항균 효과를 파악하기 위하여 액체배지 희석법을 이용하여 MIC를 측정하였다. MIC측정은 MH broth에 봉독을 넣고 2배로 단계 희석한 후, 균의 최종 희석농도를 2.
- 분리균을 National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)의 기준에 준하여 disc diffusion method로 penicillin (P), ampi cillin (AM), amoxicillin / calvullanic acid (AMC), cephalothin (CF), cefazolin (CZ), clindamycin (CO, bacitracin (B), lincomycin (L), neomycin (N), gentamicin (GM), amika cin (AN), kanamycin (K), tetracycline (TE), ciprofloxacin (CIP), norfloxacin (NOR), enro~ floxacin (ENR), sulfamethoxzole/ trimetho prim (SXT) 등 17종에 대한 항균제 감수성 검사를 실시하였다.
- 혈청형 동정시험 중 somatic antigen은 salmonella O group 혈청 A, B, Cl, C2, D1, D2, E4(Difco) 를 사용하여 평판 응집법으로 실시하였고, Flagella antigen 은 Spicer- Edward rapid H antigen 1, 2, 3, 4, L-complex, EN-complex, 1 complex, i, m, s, t, q, 2, 5, 6, 7 (Difco)를 사용하여 Difco Laboratories와 Ditch- plate method에 따라 실시 하였다.
성능/효과
- !, 16㎍/㎖이며, S hyicus 와 S chromogenes MIC와 MBC는 모두 128㎍/㎖이고, 그람 음성균 중 표준 균주인 S typhimurium ATCC 6538의 MIC 와 MBC는 32㎍/㎖로 나타났으며, 야외분리균 중 S typhimurium 1주, S gallinarum 3주 및 S enteritidis 4주에서는 8주 모두 본시험에서 적용된 최고 농도인 51㎍/㎖에서도 균의 발육이 억제되지 않았으며, E coli 11주에 대하여는 MIC가 8㎍/㎖ 및 12㎍/㎖이 각각 1 주, 256㎍/㎖이 8주 및 512㎍/㎖가 1주이었고, MBC는 16㎍/㎖ 및 256㎍/㎖가 각각 1주, 512㎍/㎖가 7주 이였으며 2주에서는 본 실험에서 최고 농도인 512㎍/㎖에서도 균이 발육되었다.
- 17종의 항균제에 대한 약제 내성 검사 결과는 Table 5에 나타난바와 같으며 표준 균주는 야외분리균에 비하여 약제내성이 상대적으로 낮았으며 표준균주인 S aureus ATCC 6538 는 TE에 그리고 S mutans ATCC 25175는 페니실린 등 5종에 대하여 내성을 나타내었다. 그러나 S typhimurium ATCC 6538은 실험에 사용된 17종 모두에 대하여 감수성을 나타내어 내성약제가 없었다.
- 그람 양성균주의 경우 시험에 사용된 표준 균주인 S aureus ATCC 6538와 S mutans ATCC 25175의 MIC와 MBC는 모두 64㎍/㎖ 로 동일하게 나타났으며, 야외 분리균주에서는 S aureus 경우 MIC 는 8㎍/㎖, MBC는 16㎍/㎖ 으로 S hyicus와 S chromogenes는 MIC와 MBC가 모두 12㎍/㎖로 나타났다. 그람 음성균 중 Salmonella spp에서는 표준균주인 S typhimurium ATCC 6538는 MIC와 MBC 가 32㎍/㎖로 나타났으며, 야외분리균 중 S typhimurium 1주, S gallinarum 3주 및 S en-teritidis 4주에서는 8주 모두 본시험 에서 적용된 최고 농도인 512㎍/㎖에서도 균의 발육이 억제되지 않았다.
- 로 나타났다. 그람 음성균 중 Salmonella spp에서는 표준균주인 S typhimurium ATCC 6538는 MIC와 MBC 가 32㎍/㎖로 나타났으며, 야외분리균 중 S typhimurium 1주, S gallinarum 3주 및 S en-teritidis 4주에서는 8주 모두 본시험 에서 적용된 최고 농도인 512㎍/㎖에서도 균의 발육이 억제되지 않았다.
- 그람 음성균 중 야외에서 분리된 E coli 11 주에 대하여는 MIC가 8㎍/㎖이 1주, 128㎍/㎖이 1 주, 256/㎍/㎖이 8주 및 512㎍/㎖가 1 주로 대부분의 MIC는 256㎍/㎖이었으며, MBC 는 16“㎍/㎖ 이 1주, 256㎍/㎖이 1주, 512㎍/㎖가 7주이었으며 2주에서는 본 실험에서 최고 농도인 512㎍/㎖에서도 균이 발육되었다.
- 닭에서 분리된 salmonella spp 7균주중 S gallinarum 3주는 4제 내성 2주 및 5제 내성 1주로 나타났으며, S enteritidis 4주에서는 6제 내성균 1주, 5제 내성균 1주 및 4 제 내성균이 2주로 나타났다. 돼지 및 닭에서 분리된 E. coli 11주는 실험에 사용된 대부분의 약제에 대하여 내성을 나타내어 8제 내성 1 주, 10제 내성 3주, 11제 내성 3주, 12제 내성 2주 및 13제 내성 2주로 나타났다.
- 본 실험 결과에서는 표준균주의 경우 그람양성균인 S aureus 와 S mutans의 MIC는 64㎍/㎖이며, 그람 음성균인 S typhimurium은 32㎍/㎖로 나타났다. 야외분리균의 경우 그람양성균인 S aureus는 8㎍/㎖, S hyicus 와 S chromogenes는 128㎍/㎖로 나타났으며, 그람음성균에서는 Salmonella spp 8주의 경우 S typhimurium 1주, S gallinarum 3주 및 S enteritidis 4주 모두 본시험에서 적용된 최고농도인 512㎍/㎖에서도 균의 발육이 억제되지 않았다.
- 본 실험에 사용된 야외분리균 22주중 그람 양성균 3주에 대하여 약제 내성 검사를 한 결과 4주 모두 penicillin에 대하여 내성을 나타내었으며, 봉독에 대한 MIC는 최소 8㎍/㎖에서부터 128㎍/㎖로 나타나 MIC가 최소 8㎍/㎖에서부터 본 실험의 최고 농도인 512㎍/㎖에서 균 발육이 억제되지 않는 등 다양한 분포를 나타낸 그람 음성균 보다는 MIC가 낮게 나타났다.
- 나타났다. 야외분리균의 경우 그람양성균인 S aureus는 8㎍/㎖, S hyicus 와 S chromogenes는 128㎍/㎖로 나타났으며, 그람음성균에서는 Salmonella spp 8주의 경우 S typhimurium 1주, S gallinarum 3주 및 S enteritidis 4주 모두 본시험에서 적용된 최고농도인 512㎍/㎖에서도 균의 발육이 억제되지 않았다. 또한 E coli 11주에 대하여는 MIC가 8㎍/㎖이 1 주, 128㎍/㎖이 1 주, 256㎍/㎖이 8 주 및 512㎍/㎖가 1주로 대부분의 MIC는 256㎍/㎖로 나타났다.
후속연구
- 이런 점을 고려하여 추후 가축에 적용이 극히 제한적인 봉침요법을 봉독만 채취하여 주사제로 만들어 가축 질병 예방 및 치료에 적용할 수 있도록 적용하기 위하여 세균에 대한 직접적인 효과와 면역증강 효과 등에 대한 많은 실험이 이루어져야 할 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.