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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 DNCB로 인위적으로 접촉피부염을 유발시 킨 동물모델에서 황금열수추출물이 항산화활성능, serum Ig E 농도 및 표피 회 복능에 미 치 는 영향을 조사함으로써 황금의 항알레르기 접촉 피부염의 기능을 규명하고자 하였다.
가설 설정
- 3)Values with different superscripts within the same column are significan닌y different at p<0.05.
제안 방법
- 5%와 1%로 희석한 다음 사용되었다. 1주일간 환경에 적응시킨 후 등 부위를 제모하고 피부의 미세 상처가 치유되도록 24시간 방치 하였다. 2.
- 1주일간 환경에 적응시킨 후 등 부위를 제모하고 피부의 미세 상처가 치유되도록 24시간 방치 하였다. 2.5% DNCB용액 1 mL 를 등 부위에 도포하여 면역반응을 유발한지 4일 후, 1주일에 3회 씩 4주 동안 1% DNCB 용액 1 mL를 등 부위에 도포하여 알러지성 접촉 피부염을 유발하였으며 자연치유에 의한 오차를 없애기 위해 경구투여기간에도 DNCB를 도포하였다. CG군과 SBFG군에서의 알러지성 접촉피부염 유발 여부는 직접 육안으로 확인할 수 있었다.
- 시험 관 마개 를 닫고 95℃의 수욕상에서 60분간 가열한 후 흐르는 물에 급격히 냉각시 킨 다음 n-BuOH 5 mL를 가하여 가볍 게 교반하였다. 3, 000 rpm에서 10분간 상온에서 원심 분리한 다음 n-BuOH층(상층)을 일정량 취하여 547 nm에서 spectrophotometer(UV-1601, Shimadzu)을 사용하여 흡광도를 측정하였다. 이때 표준시료는 55 mg의 TEP(1, 1, 3, 3- tetraethoxy propane)를 평 량하여 비 이 커 에 옮긴 다음 EtOH 50 mL를 가하여 용해시 켰고(원액), 원액 0.
- 5 cm? 넓이로 생검하여 10% 포름알데히드 용액에 고정한 후 조직 염색전까지 실온에 보관하였다. Haematoxylin-eosin 염색법을 이용하여 조직을 염색하였고, 광학현미경 상에서 200배의 배율로 피 부의 전반적인 상태를 관찰하고 화상해석 장치 를 통해 촬영하였다. 표피의 두께 변화는 200배 grid의 길이와 비교한 비 례식을 이용하여 구하였다.
- 표피의 두께 변화는 200배 grid의 길이와 비교한 비 례식을 이용하여 구하였다. 각 군 6마리 흰쥐 에서 각각 3개의 조직 절편을 얻은 다음 하나의 절편에서 다섯부분의 표피 두께를 평 균화한 값을 구하여 다시 이 3개의 값을 평 균하여 1마리 rat의 평 균표피 두께로 하고, 각각 6마리의 값을 평균하여 각 군의 표피두께로 하였다.
- 간의 superoxide dismutase 효소활성 및 catalase 효소 활성 측정: 간의 SOD 활성 도는 알칼리 상태에서 pyrogallol의 자동산화에 의한 발색을 이용한 Marklund와 Marklund (21)의 방법을 수정, 보완하여 효소 활성도를 측정하였다. 간 조직 0.
- 2로 여 과하고 2회 반복 추출하여 rotary evaporator로 200 mL로 농축하였다. 농축된 황금추출액은 SBFG군에 매일 일정한 시간(오후 4 시 )에 1 mL/체중 kg/day(100 mg/체 중 kg/day) 씩 oral zonde needle(0.9*(L)50 mm)를 이용하여 경구투여하였으며 , nor- mal군과 CG군은 증류수를 1 mL/체중 kg/day씩 4주 동안 경구투여하였다.
- 본 실험은 황금열수추출물이 알레르기성 접촉 피부염 유발 시 항산화활성, serum Ig E 농도와 표피회복능에 미치는 영 향을 조사하기 위해 행 해진 것으로 l-chloro-2, 4-dinitro- chlorobenzene(DNCB: 2.5% DNCB 1 mL로 감작, 4일 경과 후 1% DNCB 1 mL로 유발) 처리 로 알레르기 성 접촉 피부염이 유발된 Sprague Dawley rat 수컷 흰쥐 에 황금 열수 추출물(1 mL/kg/day)을 경구투여한 다음 혈장과 간의 항산화 활성, 혈중 Ig E 농도, 표피두께변화를 관찰하였다. DNCB 처리 에 의해 지질과산화물 함량과 Ig E 농도, 표피두께가 증가하였으며 황금열수추출물의 경구투여에 의해 간의 지질과 산화물 함량 감소, 혈중 Ig E 농도 감소, 표피두께가 저하되는 결과를 보였다.
- 05℃, 습도는 61 ±1%, 12시간 명 암주기하에서 사육되었다. 실험군은 1-chloro-2, 4-dinitrochlo- robenzene(DNCB: Aldrich, USA)를 도포하지 않은 정상대조군(normal group), DNCB를 도포한 control group(CG), DNCB를 도포하고 황금열수추출물을 경구투여한 Scutellaria baicalensis fed group(SBFG)으로 나누었으며 각 군에 6마리씩 배정하였다(Table 1).
- 1 mL를 취하여 EtOH 100 mL를 가하였다(표준시액). 표준시액 0.1 mL에 3.9 mL 증류수와 0.67% TBA 시 액 1 mL를 가한 다음 수욕상에서 가열하여 앞에 서술한 방법에 따라 흡광도를 측정하였다. 간의 지질과산화물 함량은 0.
- Haematoxylin-eosin 염색법을 이용하여 조직을 염색하였고, 광학현미경 상에서 200배의 배율로 피 부의 전반적인 상태를 관찰하고 화상해석 장치 를 통해 촬영하였다. 표피의 두께 변화는 200배 grid의 길이와 비교한 비 례식을 이용하여 구하였다. 각 군 6마리 흰쥐 에서 각각 3개의 조직 절편을 얻은 다음 하나의 절편에서 다섯부분의 표피 두께를 평 균화한 값을 구하여 다시 이 3개의 값을 평 균하여 1마리 rat의 평 균표피 두께로 하고, 각각 6마리의 값을 평균하여 각 군의 표피두께로 하였다.
대상 데이터
- 2005년 4월 경 상북도 경산시 한국생 약협 회 로부터 구입 한국 내 산 황금을 깨 끗이 세 척 한 다음 20 g을 증류수 400 mIK] 넣고 2시간 동안 가열한 후 Whatman No. 2로 여 과하고 2회 반복 추출하여 rotary evaporator로 200 mL로 농축하였다. 농축된 황금추출액은 SBFG군에 매일 일정한 시간(오후 4 시 )에 1 mL/체중 kg/day(100 mg/체 중 kg/day) 씩 oral zonde needle(0.
- DNCB 제조와 도포에 의한 알러지성 접촉피부염 유발본 실험에서 사용된 DNCB는 acetone과 olive oil이 3:1로 혼합된 용액에 2.5%와 1%로 희석한 다음 사용되었다. 1주일간 환경에 적응시킨 후 등 부위를 제모하고 피부의 미세 상처가 치유되도록 24시간 방치 하였다.
- 생후 5주령 Sprague Dawley 수컷 흰쥐를 효창사이언스로 부터 구입 하여 고형 사료((주)삼양사료)와 탈 이 온수를 자유롭게 섭취시키면서 사육실 환경에 1주일간 적응시킨 뒤체중 150 g된 흰쥐를 선별하여 실험에 사용하였다. 이때 사육실의 온도는 21.
데이터처리
- SPSS 10.0을 사용하여, 평균과 표준오차를 구하였으며, One way ANOVA에 의해 p<0.05에서 유의차가 있는 항목에 대해서는 Duncan's multiple range test로 군간 유의 차를 검증하였다.
이론/모형
- 간의 catalase 활성 도는 Aebi(23)의 방법에 따라 간 조직 0.1 g을 PBS에 넣고 1분간 균질화시 킨 후 2500 rpm에서 10 분간 원심분리하였다. 상층액을 PBS에 250배 희석하여 효소원으로 사용하였고, 상층액 2 mL를 시 험관에 넣고 30 mM H2O2 1 mL를 첨가하여 재빨리 혼합한 후 240 nm에서 2분 동안 흡광도를 측정하였다.
- 25 M sucrose 4 mL를 넣고 1분간 균질화시킨 후 2000 rpm에서 1。분간 원심분리하였다. 상층액을 PBS(pH 7.2±0.1)에 4배 희석하여 효소원으로 사용하였으며 상층액 20 UL에 Tris HC1 buffer 3 mL와 pyrogallol 20 UL를 넣어 빠르게 혼합한 다음 420 nm에서 3분 동안 흡광도를 측정 하였으며, 효소의 활성 은 1분 동안 pyrogaloll의 자동산화를 50% 억 제 하는데 요구되는 효소의 양을 1 unit로 계산하여 Lowry 등(22)의 방법에 의한 단백질 값으로 보정 하였다.
- 혈장과 간의 thiobarbituric acid reactive substance 측정: 혈장과 간의 지질과산화물 함량은 thiobarbituric acid(TBA)와 반응하여 생성된 thiobarbituric acid reactive substance(TBARS) 양으로 측정 하는 Yagi 등(20)의 방법을 이용하여 측정하였다. 즉, 마개가 있는 시험관에 혈장 20 HL 를 넣고 1/12 N 황산 4.
성능/효과
- 3)Values with different superscripts within the same column are significantly different at p<0.05.
- 5% DNCB 1 mL로 감작, 4일 경과 후 1% DNCB 1 mL로 유발) 처리 로 알레르기 성 접촉 피부염이 유발된 Sprague Dawley rat 수컷 흰쥐 에 황금 열수 추출물(1 mL/kg/day)을 경구투여한 다음 혈장과 간의 항산화 활성, 혈중 Ig E 농도, 표피두께변화를 관찰하였다. DNCB 처리 에 의해 지질과산화물 함량과 Ig E 농도, 표피두께가 증가하였으며 황금열수추출물의 경구투여에 의해 간의 지질과 산화물 함량 감소, 혈중 Ig E 농도 감소, 표피두께가 저하되는 결과를 보였다. 이상의 결과로 미루어 황금 열수 추출물이 알레르기성 접촉피부염으로 유발된 rat의 체내 항산화 활성과 IgE 농도개선, 표피두께 개선에 효과가 있는 것으로 생각된다.
- 1과 같다. Normal군, CG군, SBFG군에서 각각 0.395±0.015, 2.361 + 0.253, 0.990±0.102(mm)A로 normal군에 비해 CG군에서 표피두께가 유의적으로 증가하였으며(p<0.05), SBFG군에서 CG군에 비해 유의하게 감소하였다(P<O.O5). 표피의 두께변화는 알레르기 접촉피부염을 유도한 군에서 유의하게 증가하였으며 황금열수추출물의 경구투여에 의해 유의하게 감소하여 황금열수추출물이 표피두께 개선에 효과적인 것으로 생각된다.
- 같다. Normal군, CG군, SBFG군에서 각각 12.31 ±0.76, 16.09 ± 0.76, 12.25±0.99(ng/mL)으로 normal군에 비해 CG군에서 유의하게 증가하였으며(p<0.05), SBFG군에서 CG군에 비해 normal군의 수준으로 유의하게 감소하였다(p<0.05). 혈중 Ig E 농도는 알레르기성 접촉피부염을 유도한 군에서 normal군에 비해 유의하게 증가하였으며 황금열수추출물의 경구투여에 의해 유의하게 감소하여 황금열수추출물이 혈중 Ig E 농도 개선에 효과가 있는 것으로 나타났다.
- SOD 효소활성은 norma应, CG군, SBFG군에서 각각 9.00+1.25, 14.16 + 1.20, 17.58±2.01 (unit/min/g protein)로 효소활성 이 DNCB를 도포하지 않은 normal군에 비해 DNCB 를 도포한 CG군과 SBFG군에서 유의하게 증가하였으며 (p<0.05)s 황금열수추출물의 경구투여 한 SBFG군의 효소 활성도가 CG군에 비 해서 유의 하게 증가하여 (p<0.05) 가장 높은 활성을 나타내었다. 간조직 의 catalase 효소활성도를 측정한 결과는 Table 3과 같다.
- 05), 황금열수추출물의 경 구투여한 SBFG군이 CG군에 비해 과산화물 함량이 감소하는 경향을 보였으나 유의한 차이는 없었다. 간조직의 지질과 산화물 함량은 norma应, CG군, SBFG군에서 각각 3.12±0.15, 4.55 + 0.26, 3.92±0.19(nmole/mg protein)로 혈장의 경우와 마찬가지로 DNCB를 도포하지 않은 normal군에 비해 DNCB 를 처리한 CG군과 SBFG군에서 지질과산화물 함량이 유의하게 높았으며 (p<0.05), SBFG군이 CG군보다 과산화물 함량이 감소하는 경향을 보였으나 유의한 차이는 없었다. 알레르기성 접촉피 부염 에서 혈장과 간의 과산화물 함량이 normal 군에 비해 유의하게 증가하였으며 황금추출물의 투여에 의해 감소하는 경향을 보였으며 Kim 등(18)의 연구에서 황금 추출물의 경 구투여 는 재관류 심 근의 malondialdehyde(MDA) 생성을 억제함과 더불어 재관류 심장의 심 기능저하와 세포 손상을 현저히 방지하였다고 보고하였으며, Cho와 Oh(5)의 연구에서 황금열수추출물이 독성 약물에 의한 신장조직의 지질과 산화를 방지하는 항산화 작용을 가지고 있다고 보고하여 본 연구와 유사하였다.
- Cho와 Oh⑸의 연구에 따르면 황금열 수추출물과 메 탄올추출물의 독성 물질에 대한 생체 방어능력에 대한 실험결과 황금 메탄올 추출물을 처리한 군의 glutathione(GSH) 함량을 증가시켜 황금 메탄올 추출물이 체 내 항산화활성 에 영향을 줄 수 있음을 보고하였다. 본 연구에서도 황금열수추물의 투여에 의해 SOD와 catalase 효소활성이 normal군에 비해 증가하는 경향을 나타내어 지질과산화물 생성이 억제되는 것과 유사한 효과가 나타나 황금열수추출물이 항산화활성 에 유익한 효과를 가지는 것으로 생각된다.
- 또한 Park 등(11)의 연구에 의하면 황금의 기능성 성분인 baicalein이 활성산소를 소광시키거나 소거 함으로써 그리고 활성산소에 대 항하여 세포막 손상을 보호한다고 보고하여 본 연구와 유사한 것으로 나타났다. 이상에서 세포성 면역 과민반응인 알레르기성 접촉피부염에 황금열수추줄물을 투여하여 체내 항산화활성, 혈중 Ig E 농도, 표피두께변화를 조사한 바, 황금열수추출물이 DNCB로 유발된 흰쥐의 알레르기성 접촉피부염을 회복시키는 효과가 있는 것으로 나타났다. 본 실험결과를 토대로 황금이 알레르기성 접촉피부염 치료에 광범위하게 이용될 수 있고, 기존의 치료제보다 치료효능이 뛰 어나고 부작용이 없는 치료제로 개발하기 위해서 좀 더 체계적 인 연구가 필요한 것으로 생각된다.
- DNCB 처리 에 의해 지질과산화물 함량과 Ig E 농도, 표피두께가 증가하였으며 황금열수추출물의 경구투여에 의해 간의 지질과 산화물 함량 감소, 혈중 Ig E 농도 감소, 표피두께가 저하되는 결과를 보였다. 이상의 결과로 미루어 황금 열수 추출물이 알레르기성 접촉피부염으로 유발된 rat의 체내 항산화 활성과 IgE 농도개선, 표피두께 개선에 효과가 있는 것으로 생각된다.
- 2와 같다. 혈장의 지질과산화물 함량은 normal군, CG 군, SBFG군에서 각각 83.68 ±4.11, 151.39 ±19.79, 132.29 + 19.58(nmole/mL)로 DNCB를 도포하지 않은 normal군에 비해 DNCB를 처리한 CG군과 SBFG군에서 지질과산화물 함량이 유의 하게 높았으며 (p<0.05), 황금열수추출물의 경 구투여한 SBFG군이 CG군에 비해 과산화물 함량이 감소하는 경향을 보였으나 유의한 차이는 없었다. 간조직의 지질과 산화물 함량은 norma应, CG군, SBFG군에서 각각 3.
- 05). 혈중 Ig E 농도는 알레르기성 접촉피부염을 유도한 군에서 normal군에 비해 유의하게 증가하였으며 황금열수추출물의 경구투여에 의해 유의하게 감소하여 황금열수추출물이 혈중 Ig E 농도 개선에 효과가 있는 것으로 나타났다. Mayumi 등(24)과 Min(25)의 연구에서도 아토피동물모델인 NC/Nga mouse의 혈중 Ig E 농도가 증가한다고 보고하였으며, 각각 감잎추출물과 소풍산가감방의 투여에 의해 유의하게 감소하였다고 보고하였다.
- 43(unit/min/g protein)로 normal군에 비해 CG군의 효소 활성도가 감소하는 경향을 나타냈으나 유의적인 차이는 없었다. 황금열수추출물의 경구투여에 의해 SBFG군의 활성도가 CG군에 비해 normal군의 수준으로 증가하는 경향을 보였으나 역시 유의적인 차이는 없었다. Cho와 Oh⑸의 연구에 따르면 황금열 수추출물과 메 탄올추출물의 독성 물질에 대한 생체 방어능력에 대한 실험결과 황금 메탄올 추출물을 처리한 군의 glutathione(GSH) 함량을 증가시켜 황금 메탄올 추출물이 체 내 항산화활성 에 영향을 줄 수 있음을 보고하였다.
후속연구
- 이상에서 세포성 면역 과민반응인 알레르기성 접촉피부염에 황금열수추줄물을 투여하여 체내 항산화활성, 혈중 Ig E 농도, 표피두께변화를 조사한 바, 황금열수추출물이 DNCB로 유발된 흰쥐의 알레르기성 접촉피부염을 회복시키는 효과가 있는 것으로 나타났다. 본 실험결과를 토대로 황금이 알레르기성 접촉피부염 치료에 광범위하게 이용될 수 있고, 기존의 치료제보다 치료효능이 뛰 어나고 부작용이 없는 치료제로 개발하기 위해서 좀 더 체계적 인 연구가 필요한 것으로 생각된다.
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