선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 저자들은 위에 발생한 GISTs들의 임상적인 특성과 치료 방법 및 효과를 분석하고 기존의 인자들과 함께 GISTs의예후를 예측하는데 쓰일 수 있는 인자의 종류를 확인하고 이의 임상적 활용방안에 대하여 알아보고자 하였다.
- 초기 치료 실패의 원인이 불충분한 수술적 절제와 재발에 있는 만큼 수술의 목표는 GISTs를 둘러싸고 있는 막의 파열 없이 육안적인 안전거 리는 물론 병 리적으로도 충분하고 완전한 절제 범위를 확보하면서 절제를 시행하는 것이다. 특히 종괴의 파열은 종양세포의 복강 내 전이의 위험이 높고 재발 가능성이 농후해지므로 절제 시 주의하여야 한다.
제안 방법
- 중합효소 연쇄 반응이 끝난 후 효과를 더 높이기 위해 72℃에서 10분간 연장 반응을 시행 후 증폭을 종료하였다. PCR 시행 후 얻어진 산물 50 “1 중 5 “1를 2% agarose gel 에 부하하고 1 XTAE (0.4 M Tris acetate, 20 mM EDTA) 완충액 용액 속에서 100 volt로 상온에서 45분간 전기영동 하였다. 이후 agarose gel 분체로부터 gel을 잘 분리하여 Gel Doc 2000 UV Transilluminator (Bio-Rad Laboratories, Hera- cules, USA)를 사용하여 355 nm의 자외선으로 촬영하여 띠를 확인하였다.
- c-kit 유전자의 exon 9, 11, 13, 17 네 곳의 유전자 부위에 대한 시발체를 사용하여 중합효소 연쇄 반응을 시행하였다. 중합효소 연쇄 반응은 감지시발체, 항감지시발체 각 20 pmol, DNA template 2 “1, dNTP (Perkin-Elmer, Norwalk, USA) 250, ”M, Taq DNA polymerase (Perkin-Elmer, Norwalk, USA) 0.
- , Santa Cruz, USA)의 일차 항체를 사용하여 반응시킨 다음 4℃에서 하룻밤 동안 처리한 후 PBS로 세척하였다. 二L 후 LSAB Kit (Research Genetics Huntsville, USA)를 사용하여 biotin이 결합된 이차 항체(rabbit antimouse IgG; DAKO, Carpinteria, US A) 를 30 분간 반응시키고 PBS로 세척한 후 Avidin-biotin complex를 10분간 처 리 하고 나서 PBS로 세척하였다. 발색제로는 AEC를 사용하여 10분간 반응시키고 Mayer's hematoxylin으로 7분간 대조 염색하였으며 Universal mount로 봉입한 후 광학 현미경으로 관찰하였다.
- 하지만 1개의 선명한 띠와 2~3개의 흐릿한 띠가 함께 나온 경우는 나머지 45 〃1의 산물을 전기 영동하여 위와 같은 방법으로 촬영하여 띠를 확인한 후 gel상의 선명한 띠 부위를 오려서 미세원심분리기에서 원심분리한 후 65。(3의 수조에서 띠 조각을 10분간 녹였다. 그 후 Gene Clean kit (BiolOl, La jolla, USA)을 사용하여 Kit 안에 들어있는 10 “1 의 glassmilk용액과 결합되어 있는 DNA를 추출하여 다시 2 “1의 DNA template를 만들었다. 처음과 같은 방법으로 50 S의 혼합물을 만들어 PCR을 다시 시행하여 1개의 띠만 선명하게 나온 것을 확인한 후 45 “의 PCR 산물을 동일한방법으로 DNA 배열순서를 분석하였다, 국소 상도성 탐색 (Local homology serach) 은 National Center for Biotechnology Information (NCBI) 프로그램의 BLAST suite을 이용한 개인 컴퓨터 running Linux로 실행하였다.
- 관찰이 가능한 76명을 대상으로 하였다. 대상 환자는유사분열과 종양의 크기에 따라 분류한 초저위험군, 저위험군, 중위험군, 고위험군의 네 가지로 분류하였다.
- 이후 agarose gel 분체로부터 gel을 잘 분리하여 Gel Doc 2000 UV Transilluminator (Bio-Rad Laboratories, Hera- cules, USA)를 사용하여 355 nm의 자외선으로 촬영하여 띠를 확인하였다. 띠가 잘 나오지 않은 것은 위의 과정을 반복하였고, 1개의 띠만 선명하게 나온 경우는 바로 나머지 45 의 PCR산물을 QIAquick PCR purification 방법 (QIAGEN Inc., Valencia, USA)을 거쳐 ABI 3700 sequence (Applied Biosystems, Foster City, USA)로 DNA 배열 순서를 분석하였다. 하지만 1개의 선명한 띠와 2~3개의 흐릿한 띠가 함께 나온 경우는 나머지 45 〃1의 산물을 전기 영동하여 위와 같은 방법으로 촬영하여 띠를 확인한 후 gel상의 선명한 띠 부위를 오려서 미세원심분리기에서 원심분리한 후 65。(3의 수조에서 띠 조각을 10분간 녹였다.
- 二L 후 LSAB Kit (Research Genetics Huntsville, USA)를 사용하여 biotin이 결합된 이차 항체(rabbit antimouse IgG; DAKO, Carpinteria, US A) 를 30 분간 반응시키고 PBS로 세척한 후 Avidin-biotin complex를 10분간 처 리 하고 나서 PBS로 세척하였다. 발색제로는 AEC를 사용하여 10분간 반응시키고 Mayer's hematoxylin으로 7분간 대조 염색하였으며 Universal mount로 봉입한 후 광학 현미경으로 관찰하였다. 항원에 대한 정확한 반응성을 평가하기 위해 일차 항체를 제외하고 위의 염색 과정을 단계적으로 시행한 조직을 음성 대조군으로 사용하였다.
- 3% 과산화수소에 15분간 처리한 후 phosphorylated buffered saline (PBS)로 5분씩 3회 세척하였다. 비특이적 염색을 억제하기 위해 소혈청 (bovine serum)으로 30분간 반응시키고 Ki67 (7B11, mouse monoclonal, 1 : 50, ZYMED, San Francisco, USA)과 p53 (sc-126, mouse monoclonal, 1 : 50, Santa Cruz biotechnology, Inc., Santa Cruz, USA)의 일차 항체를 사용하여 반응시킨 다음 4℃에서 하룻밤 동안 처리한 후 PBS로 세척하였다. 二L 후 LSAB Kit (Research Genetics Huntsville, USA)를 사용하여 biotin이 결합된 이차 항체(rabbit antimouse IgG; DAKO, Carpinteria, US A) 를 30 분간 반응시키고 PBS로 세척한 후 Avidin-biotin complex를 10분간 처 리 하고 나서 PBS로 세척하였다.
- 수술 후 얻어진 포르말린 고정 파라핀 포매 조직 을 4“m 두께로 박절한 후 건조용 오븐에 넣어 90분간 55~59℃로처치하고 xylene과 100%, 90%, 80%, 70%을 사용하여 탈 파라핀 과정을 시행하였다. 항원성을 되살리기 위해 고압멸균기에서 15분간 전처치를 하고 효소 활성을 억 제하기 위해 0.
- 4 M Tris acetate, 20 mM EDTA) 완충액 용액 속에서 100 volt로 상온에서 45분간 전기영동 하였다. 이후 agarose gel 분체로부터 gel을 잘 분리하여 Gel Doc 2000 UV Transilluminator (Bio-Rad Laboratories, Hera- cules, USA)를 사용하여 355 nm의 자외선으로 촬영하여 띠를 확인하였다. 띠가 잘 나오지 않은 것은 위의 과정을 반복하였고, 1개의 띠만 선명하게 나온 경우는 바로 나머지 45 의 PCR산물을 QIAquick PCR purification 방법 (QIAGEN Inc.
- 중합효소 연쇄 반응은 감지시발체, 항감지시발체 각 20 pmol, DNA template 2 “1, dNTP (Perkin-Elmer, Norwalk, USA) 250, ”M, Taq DNA polymerase (Perkin-Elmer, Norwalk, USA) 0.1 “1, 10XPCR 완충액(6.7 mM Tris (pH8.8), 16.6 mM NH4SO, 6.7 mM EDTA, 10 mM g-mercaptoethanol: Perkin- Elmer, Norwalk, USA) 등의 혼합물에 증류수를 첨가하여 최종용량이 50 “1가 되 게 하였고 thermal cycler인 GeneAmp PCR System 9600 (Perkin-Elmer, Norwalk, USA)를 이용하여 첫 단계로 95℃에서 5분간 반응시킨 후 변성 (denaturation: 95℃, 30초) 아닐링 (annealing) 및 확장(extension: 72℃, 1분) 과정 을 통하여 35회 를 반복하여 증폭시 켰고 아닐 링 은 exon 9와 exon 13은 63℃, exon 17은 57℃에서 30초간 시행하였다. 중합효소 연쇄 반응이 끝난 후 효과를 더 높이기 위해 72℃에서 10분간 연장 반응을 시행 후 증폭을 종료하였다.
- 그 후 Gene Clean kit (BiolOl, La jolla, USA)을 사용하여 Kit 안에 들어있는 10 “1 의 glassmilk용액과 결합되어 있는 DNA를 추출하여 다시 2 “1의 DNA template를 만들었다. 처음과 같은 방법으로 50 S의 혼합물을 만들어 PCR을 다시 시행하여 1개의 띠만 선명하게 나온 것을 확인한 후 45 “의 PCR 산물을 동일한방법으로 DNA 배열순서를 분석하였다, 국소 상도성 탐색 (Local homology serach) 은 National Center for Biotechnology Information (NCBI) 프로그램의 BLAST suite을 이용한 개인 컴퓨터 running Linux로 실행하였다.
- 파라핀 제거 과정을 거친 후 QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN Inc, Valencia, USA)을 이용하여 DNA를 추출하였다. 추출된 DNA는 UV/VIS Spectrophotomete (Bio-Rad Laboratories, Hercules, US A) 를 사용하여 260/280 nm 에서 DNA 농도 및 순도를 측정한 후 사용할 때까지 - 20℃에 보관하였다.
- 과정을 시행하였다. 항원성을 되살리기 위해 고압멸균기에서 15분간 전처치를 하고 효소 활성을 억 제하기 위해 0.3% 과산화수소에 15분간 처리한 후 phosphorylated buffered saline (PBS)로 5분씩 3회 세척하였다. 비특이적 염색을 억제하기 위해 소혈청 (bovine serum)으로 30분간 반응시키고 Ki67 (7B11, mouse monoclonal, 1 : 50, ZYMED, San Francisco, USA)과 p53 (sc-126, mouse monoclonal, 1 : 50, Santa Cruz biotechnology, Inc.
- 발색제로는 AEC를 사용하여 10분간 반응시키고 Mayer's hematoxylin으로 7분간 대조 염색하였으며 Universal mount로 봉입한 후 광학 현미경으로 관찰하였다. 항원에 대한 정확한 반응성을 평가하기 위해 일차 항체를 제외하고 위의 염색 과정을 단계적으로 시행한 조직을 음성 대조군으로 사용하였다.
대상 데이터
- 1992년 1월부터 2002년 12월까지 가톨릭대학교 부속병원에서 위장관의 간엽 종양으로 수술한 117명의 환자 중 CD117을 이용한 면역조직화학 검사에서 GISTs로 확진된환자에서 조직의 고정 및 보관 상태가 양호하여 최근까지추적 관찰이 가능한 76명을 대상으로 하였다. 대상 환자는유사분열과 종양의 크기에 따라 분류한 초저위험군, 저위험군, 중위험군, 고위험군의 네 가지로 분류하였다.
데이터처리
- 다변량분석에는 Cox regression방법을 사용하였고 장기 생존율과무병 생존율은 Kaplan-Meier 방법을 이용하였으며 Log-rank test로 검증하였다. 신뢰구간은 95%로 설정하였으며 P값이 0.
- 자료의 통계학적 비교분석은 SPSS를 사용하였다. 다변량분석에는 Cox regression방법을 사용하였고 장기 생존율과무병 생존율은 Kaplan-Meier 방법을 이용하였으며 Log-rank test로 검증하였다.
성능/효과
- 하는 것으로 밝혀지고 있다.(11) c-kit 유전자 다양한 변이는 exon 11의 거의 모든 codon 안에서 발생하며(70~85%) 이 경우 다른 곳에서 발생하는 것보다 상대적으로 예후는 좋다.(12, 13) exon 9로 부호화된 세포 외 영역 (EC domain) 의변이가 5~13%에서 나타나며 대부분 소장 혹은 대장에서 발현되고 이 경우 예후가 나쁘며(14) 또 다른 exon 13, 17에서도 4% 정도 변이가 나타나는 것으로 보고되고 있다.
- 장간막 및 후복막(10%) 순으로 나타난다.(7) 평균 호발 연령은 60세 전후이며 40세 이전에 발견되는 경우는 드물고 남녀의 발병차이는 보이지 않는다. 본 연구의 경우 평균 연령은 55.
- 037). 6) Ki 67과 p53의 면역조직화학적 발현에 따른 예후 Ki 67은 총 76예 중 34예(44.7%)에서 과발현을 보였는데초저 위 험 군과 저 위 험군에서 는 과발현이 없었으며 중위 험군에서 2예(5.8%), 고위험군에서 32예(94.2%)로 고위험군에서 Ki67 과발현이 유의하게 많았고(P<0.0001), 생존율과의 관계를 분석한 결과 과발현을 보인 환자는 5년 생존율 43.3%, 과발현이 없는 42예에서 85.7%로 역시 통계학적 유의함을 보였다(P=0.046)(Fig. 8).
- c-kit 유전자 변이가 일어난 7예의 5년 생존율 60%에 비해 유전자 변이가 일어나지 않았던 69예(828%)로 유전자 변이에 따라 통계적으로 유의한 차이를 보였다(P=0.037). 6) Ki 67과 p53의 면역조직화학적 발현에 따른 예후 Ki 67은 총 76예 중 34예(44.
- 3). 각 군의 장기 생존율을 비교 분석한 결과 고위험군의 환자군에서 중등도나 저위험군에 비하여 의미 있게 무병 기간이 짧았다(P=0.05)(Fig. 4), 14예(18.4%)의 환자가 추적검사 중 평균 25개월 후에 재발하였으며 간 전이로 재발한 환자가 12 예(85.7%)로 재발의 대부분을 차지하였으며 이 중 3 예에서 폐와 복막 등의 복합 재발이 나타났다.
- 단변량 분석에서 유의한 인자들을 Kaplan-Meier 방법으로 long-rank test을 이용하여 다변량 분석을 시행한 결과 GISTs의 크기, 유사분열 개수, Ki67 과발현 여부, c-kit 돌연변이 등이 생존율에 영향을 미치는 독립적 인자임을 알 수 있었다(Table 2).
- exon 11 변이는 모두가 missense 변이로 3예가 아미노산의 결손, 2예는 아미노산 의치 환과 결손을 동반하는 변이였고 2예는 염기의 점돌연변이 (point mutation)에 의한 아미노산의 치환으로 일어났다. 변이는 exon 11의 Lys550-Val560에서 모두 일어났으며 그 중 codon 557과 558에서 변이가 가장 빈번하게 일어났다. 그 외 codon 559에서 변이가 일어 났다.
- 또한 Chang 등(22)은 31명의 환자를 악성과 양성군으로 나누어 p53과 병의 진행과의 상관관계에 대해 조사한 결과 P53 양성 인 환자군에서 악성 변화를 보이는 것을 보고한 바 있다. 본 연구에서는 고위험군에서 P53 발현이 유의하게 많았으나 생존율과의 통계적 유의성은 없었다.
- 대다수의 GISTs들의오랜 추적결과 재발이나 전이의 가능성의 차이는 있으나그 위험성이 존재한다는 점에 근거하여 크기의 기준을 5 cm, 유사분열의 수를 50고배율당 5개를 기점으로 해서 초저위험군, 저위험군, 중간 위험군, 고위험군의 네 군으로 표시한다. 본 연구에서도 길이에 따라 5 cm 이하와 5 — 10 cm, 10 cm 이상으로 분류했을 경우 생존율에 유의한 차이를 보였다(5 cm 이하 vs 5 — 10 cm; P=0.0478, 5 — 10 cm vs 10 cm 이상; P=0.017). 유사분열에 있어서도 5/50HPF 이하인 군과 5/50HPF 이상인 군으로 분류했을 두 군 간의 무병 생존율은 5/50HPF 이상의 군이 유의하게 짧았다(P=0.
- 수술 방법은 종괴의 크기로 결정되며, 일반적으로 5 cm 이하의 경우 개복 혹은 복강경하 쐐기 절제술을 시행하며, 5 cm 이상일 경우 그 해부적 위치나 타 장기와의 관계들을 고려하여 위절제술을 시행한다. 본 연구에서도 수술 방법의 결정에 종괴의 크기가 유의한 상관 관계를 보였다. 위에서 발견된 총 76예에서 위를 크게 세 부분으로 나눈 결과에서 위치와 예후 및 수술방법과는 연관성이 없었으나 종양의 크기와 수술 방법 간에는 통계학적 연관(PC0.
- 본 연구에서도 수술 방법의 결정에 종괴의 크기가 유의한 상관 관계를 보였다. 위에서 발견된 총 76예에서 위를 크게 세 부분으로 나눈 결과에서 위치와 예후 및 수술방법과는 연관성이 없었으나 종양의 크기와 수술 방법 간에는 통계학적 연관(PC0.05)이 있었다. GISTs는 악성화되면 조기에 간이나 복강 내로 전이하는 예후가 나쁜 종양으로 예후를 예측하고 치료를 대비하는 것이 필요하다.
- 017). 유사분열에 있어서도 5/50HPF 이하인 군과 5/50HPF 이상인 군으로 분류했을 두 군 간의 무병 생존율은 5/50HPF 이상의 군이 유의하게 짧았다(P=0.042). 또 고위험군의 환자에서 중등도나 저위험군에 비해 의미 있게 무병기간이 짧았다(P=0.
- 주장하였다. 이번 연구에서도 고위험군에서 Ki 67 지수 발현율이 높게 나타났으며 과발현을 보인 환자에서 생존율이 43.3%로 과발현을 보이지 않는 군에 비해 유의하게 낮았다(P=0.046).
- 이에 반해 Sakurai 등(18)은 c-kit유전자가 예후를 결정하는 인자가 될 수 없다고 하였고 Wardelmann 등(19)도 유사분열의 개수와 c-kit유전자 변이와는 통계적 유의성이 없다고 보고하였다. 저자들의 경우는 변이 양성을 보인 GIST 환자에서 5년 생존율이 유의하게 낮았다(P=0.037).
- 측정이 불가능하였다. 전체 환자들의 평균 무 질병 기간은 100개월이 었으며 이와 비교하여 10 cm 이상인 군의 평균 무질병 기간은 18개월로 큰 차이를 보였다. 각각 군의 무병 생존율은 유의하게 차이를 보이고 있었다(5 cm 이하 vs 5~10 cm; P=0.
- 특징 적 인 증상이 없어 건강 진단 시 시 행하는 내시경으로 발견이 되거나 위장관의 다른 원인으로 수술 시 부수적으로 발견되는 경우가 종종 있으며 그 임상 양태가 매우 다양하다. 진단은 면역염색화학법으로 GISTs의 94%정도에서 CD117의 양성을 보이며 60~70%의 GISTs에서 CD34 양성 발현을 확인할 수 있다. 이를 통해 기존의 위장관 근육종들과의 감별진단이 가능해졌다.
후속연구
- 데 독립적 인 인자로서 사용될 수 있다. 하지만 이번 연구의 대상군이 작았고 추적기간이 짧았기에 더 많은 환자를 대상으로 재발과 생존율 및 예후 인자들의 연관성을 밝히기 위해 지속적인 연구가 필요할 것으로 생각된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.