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문제 정의
- 따라서 본 연구는 천연 살균소독제로서의 쌀뜨물 발효액의 살균력을 확인하기 위해 E. coZi와 Salmonella 식중독균에 대한 항균효과를 평가하였다.
제안 방법
- Typhimurium(NO/NA) 분리를 위해 Brilliant Green Agar(BGA, Difco, Detroit, MI, US A) 를 사용하였다. BGA에는 Novobiocin(NO, 25 g/ml), Nalidixic acid(NA, 25 g/ml)를 첨가하여 NO와 NA에 저항성을 지닌 S. Typhimurium의 균수를 선택적으로 확인하였다.
- 11) 하지만 라이젠을 최적 희석배수 이상으로 희석할 경우에는 본 연구결과와 마찬가지로 유용 미생물의 활성이 상대적으로 저하되며 라이젠의 유기 성분이 오히려 성장촉진 물질로 이용되어 유해 미생물 증식을 초래할 수 있는 것으로 사료된다. EM 제제는 여러 유용미생물 군으로 형성되어 서로 공존, 공생하면서 상승효과를 일으켜 위해 미생물 증식 억제 효과를 나타낸다는 보고9,10와 마찬가지로 대표적인 EM 제제인 쌀뜨물 발효액 라이젠으로부터 E. coli, S. Typhimurium과같은 위해 미생물에 대한 항균효과를 확인하였다.
- coli 균액 1 mL을 접종하였다. 균수변화 측정은 12 시간 동안 실시하였고 peptone water(Oxoid, Basingstoke, Hampshire, England) 0.1%를 이용하여 10배씩 연속 희석하였다. 멸균된 peptone water 0.
- 라이젠과 농축액을 멸균된 증류수로 각각 원액 및 2, 3, 4, 5, 6, 10배로 희석하여 palcon tube에 10 mL씩 취한 후, 약 13 cfu/ml로 조정한 E. coli 균액 1 mL을 접종하였다. 균수변화 측정은 12 시간 동안 실시하였고 peptone water(Oxoid, Basingstoke, Hampshire, England) 0.
- 1에 나타내었다. 라이젠을 원액과 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 10배로 희석하여 E. coil를 접종한 후 12시간 동안 살균소독력을 측정하였다. 처리 직후(0시간) 측정 결과 E.
- Typhimurium (NO/NA) 1 mL을 각각 10 g으로 정량한 행주위에 점 접종하여 30분간 상온에서 건조하였다. 무처리군은 균이 접종된 행주와 멸균된 peptone water(Oxoid, Basingstoke, Hampshire, England) 0.1% 50 mL을 멸균된 stomacher bag 에 넣어 stomacher(Elmex SH-II M, Tokyo, Japan)를 이용하여 1분간 균질화한 다음 peptone water 0.1%를 이용하여 10배씩 연속 희석하였다. 물세척은 균 접종된 행주와 멸균수 200 mL에 2시간 침지하여 헹군 후 탈수하여 처리하였고 합성세제 200 mL(15 ppm), 차아염소산나트륨 200 mL(200 ppm), 라이젠 200 mL(2배, 3배 희석액), 농축액 200 mL(원액, 2배 희석액)도 동일한 방법으로 처리하였다.
- 1%를 이용하여 10배씩 연속 희석하였다. 물세척은 균 접종된 행주와 멸균수 200 mL에 2시간 침지하여 헹군 후 탈수하여 처리하였고 합성세제 200 mL(15 ppm), 차아염소산나트륨 200 mL(200 ppm), 라이젠 200 mL(2배, 3배 희석액), 농축액 200 mL(원액, 2배 희석액)도 동일한 방법으로 처리하였다.
- 생균제의 최적 농도 및 권장 처리 시간을 평가하기 위해 라이젠(완제품)과 라이젠 농축액을 test하였다. 라이젠과 농축액을 멸균된 증류수로 각각 원액 및 2, 3, 4, 5, 6, 10배로 희석하여 palcon tube에 10 mL씩 취한 후, 약 13 cfu/ml로 조정한 E.
- 오염된 행주에 대한 라이젠 및 농축액의 살균 소독력을 비교 평가하기 위해 각각 무처리, 물세척, 합성세제(15 ppm), 차아염소산나트륨(200 ppm)으로 대조군 실험을 실시하였다. 106 cfu/ml으로 조정된 E.
대상 데이터
- E. coli 균수 측정에는 Eosin Methylene Blue agar(EMB, Difco Detroit, MI, USA)를 사용하였고 S. Typhimurium(NO/NA) 분리를 위해 Brilliant Green Agar(BGA, Difco, Detroit, MI, US A) 를 사용하였다. BGA에는 Novobiocin(NO, 25 g/ml), Nalidixic acid(NA, 25 g/ml)를 첨가하여 NO와 NA에 저항성을 지닌 S.
- 본 실험에 사용된 EM제제는 쌀뜨물 발효액으로서 (주) 라이스텍에서 상품화하여 유통 판매 중인 라이젠 (Rizen)을선택하였고 유통기한을 고려하여 곧바로 제조된 라이젠 및 라이젠 농축액(30°:Brix)을 (주)라이스텍에서 제공받아냉장보관하면서 실험을 실시하였다.
- 본 실험에 사용된 미생물은 Escherichia coli 및 Salmonella Typhimurium(NO/NA)이었다. E.
성능/효과
- 또한 실험 결과에 따르면 희석 농도 못지않게 침지 시간도 살균력에 영향을 미치므로 라이젠을 사용할 때는 약 2시간 동안 침지하는 것이 효과적이라고 판단된다. 비록 라이젠 농축 원액을 제외한 나머지 라이젠 시료에서는 2002년 8월에 개정된 식품위생법에 준하는 살균소독제 부합기준 99.999%, 즉 5 log의 미생물을 감소시켜야하는 조건'즈에 미치지 못하였으나 식품공전법13)에 공시된 살균소독제의 유효성 평가법'"과 다른 방법을 사용하여 비교 평가한 결과 살균소독제로서 인정받은 염소계제품 보다 우수한 소독력을 보여주었다. 따라서 쌀뜨물 발효액의 살균 소독력 유효성은 충분히 인정된다고 사료된다.
- coli에 오염된 행주에 대한 라이젠과 농축액의 살균 소독력을 비교평가하기 위해 각각 무처리, 물세척, 합성세제(15 ppm), 차아염소산나트륨(200 ppm) 소독 처리된 행주와 비교한 결과를 Table 1 에 나타내었다. 106 cfu/ml 으로 조정된 균액을 행주위에 접종하여 각각의 처리 방법에 따라 균 감소율을 비교 평가한 결과, 무처리군은 생균 수가 5.05 log10 cfu/g으로 나타났으며 물세척할 경우는무처리군에 비해 0.73 log10 cfu/g 감소하였다. 합성세제, 차아염소산나트륨은 각각 1.
- 65 log10 cfu/ml 정도 감소를 나타내었다. 2시간 경과하였을 때 라이젠 2배, 3배 희석액은 E. coli를 2.65 log10 cfu/ml 감소시켜 가장 우수한 효과를 보임으로써 라이젠 최적 처리 시간은 2시간, 희석배수는 2 또는 3배임을 확인하였다. 라이젠 농축액의 E.
- coli 실험결과와 매우 유사한 결과를 나타내었다. 그러나 6, 10배 희석 시 균이 오히려 증가였는데, 이는 항균물질의 농도가 너무 지나치게 희석되어 오히려 라이젠의 유기 성분이 성장에 도움이 되는 것으로 나타났다. 라이젠에는 다양한 유용 미생물군이 존재하며 이로 인해 미생물들끼리 영양분을 서로 차지하려는 경합 과정을 거침으로써 병원균을 억제하는 것으로 알려져 왔으며, 특히 항균물질을 생성하는 방선균이 토양 병원균의 증식억제 효과를 나타내는 것으로 보고되었다.
- 64 log10 cfu/ml 정도 감소를 보일뿐 효과가 매우 낮았으며 원액 및 희석액의 효과도 거의 비슷하였다. 그러나 시간이 경과하면서 서서히 E. coil의 살균소독력 효과를 확인할 수 있었고 1시간에서 3시간 경과 구간에서 1.95~2.65 log10 cfu/ml 정도 감소를 나타내었다. 2시간 경과하였을 때 라이젠 2배, 3배 희석액은 E.
- 농축액을 5배 이하로 희석 사용하였을 경우에만 살균소독 효과를 나타내었다. 농축 원액은 2시간 경과하면서 E. coli 를 완전 살균하였고 농축액을 2배 희석한 용액은 5시간, 3배~5배 희석한 용액은 24시간 처리하여야 완전 살균이 가능하였다. 10배와 6배 희석액은 3시간이 경과할 때까지 두드러진 효과를 보이지 않다가 그 이후부터 오히려 균이 증가하여 각각 최대 5.
- 17 log10 cfu/g 감소하였으며 농축액 원액은 완전 살균효과를 나타냄으로써 가장 큰 효과를 보였다. 또한 실험 결과에 따르면 희석 농도 못지않게 침지 시간도 살균력에 영향을 미치므로 라이젠을 사용할 때는 약 2시간 동안 침지하는 것이 효과적이라고 판단된다. 비록 라이젠 농축 원액을 제외한 나머지 라이젠 시료에서는 2002년 8월에 개정된 식품위생법에 준하는 살균소독제 부합기준 99.
- 03 log10 cfu/g 감소하여무처리군과 물세척 처리군보다 살균력이 우수함을 알 수 있었다. 라이젠 2배, 3배 희석액은 각각 2.75, 2.62 logI0 cfu/g의 높은 감소율을 보였으며 라이젠 농축액을 2배 희석한 용액은 3.17 log10 cfu/g 감소하였으며 농축액 원액은 완전 살균효과를 나타냄으로써 가장 큰 효과를 보였다. 또한 실험 결과에 따르면 희석 농도 못지않게 침지 시간도 살균력에 영향을 미치므로 라이젠을 사용할 때는 약 2시간 동안 침지하는 것이 효과적이라고 판단된다.
- 99 log]0 cfu/g 감소하여 무처리군과 물세척 처리군보다 살균력이 우수하였다. 라이젠 2배, 3배 희석액은 각각 2.77, 2.66 log10 cfu/g의 높은 감소율을 보였으며 라이젠 농축액을 2 배 희석한 용액은 3.21 log10 cfu/g 감소하였으며 농축액 원액은 완전 살균효과를 나타냄으로써 가장 큰 효과를 보이면서 E. coli 실험결과와 매우 유사한 결과를 나타내었다. 그러나 6, 10배 희석 시 균이 오히려 증가였는데, 이는 항균물질의 농도가 너무 지나치게 희석되어 오히려 라이젠의 유기 성분이 성장에 도움이 되는 것으로 나타났다.
- coli 증식을 촉진하는 영양분으로 쓰일 가능성이 있는 것으로 사료된다. 본 연구의 결과에 따르면 라이젠농축액과 2배 희석액이 E. coli를 완전 살균 가능하며 3~5 배 희석액도 마찬가지로 24시간 경과하면 E. coli를 제어할 수 있음을 확인하였다.
- coil를 접종한 후 12시간 동안 살균소독력을 측정하였다. 처리 직후(0시간) 측정 결과 E. coil는 0.32-0.64 log10 cfu/ml 정도 감소를 보일뿐 효과가 매우 낮았으며 원액 및 희석액의 효과도 거의 비슷하였다. 그러나 시간이 경과하면서 서서히 E.
- 68 log10 cfu/ml 감소하였다. 합성세제, 차아염소산나트륨은 각각 1.22, 1.99 log]0 cfu/g 감소하여 무처리군과 물세척 처리군보다 살균력이 우수하였다. 라이젠 2배, 3배 희석액은 각각 2.
- 73 log10 cfu/g 감소하였다. 합성세제, 차아염소산나트륨은 각각 1.35, 2.03 log10 cfu/g 감소하여무처리군과 물세척 처리군보다 살균력이 우수함을 알 수 있었다. 라이젠 2배, 3배 희석액은 각각 2.
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