선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구에서는 저선량 X-선 조사가 실험용 동물인 Sprague-Dawley (SD) 쥐의 정자에 미치는 생물학적 효과를 알아보기 위하여 X-선을 2주에 걸쳐 6일 동안 분할조사한 후에 1주 동안의 관찰기간을 둔 다음 고환, 부고환, 정자수, 정자운동성, 혈액검사, 조직검사를 관찰 분석하였다.
제안 방법
- 에너지는 쥐의 방사선 흡수율을 고려하여 저에너지인 54 kVp을 이용하였고, 선량은 RAD CHECK® PLUS (FLUKE, USA)을 이용하여 측정하였다. 36마리 SD rat을 6마리씩 6군으로 나누고 Gl, G2, G3, G4, G5, G6으로 구분하여, 선량률은 0.1 mR/min, 총 방사선량이 각각 Control, 10 mGy, 20 mGy, 50 mGy, 100 mGy, 200mGy이 되도록 조사하였다.
- SD Rat을 마취제(ether)로 흡입마취 후 개복하여 복대동맥에서 혈액을 채취한 후 고환과 부고환을 적출하였다. 적출한 고환과 부고환은 해부 현미 경 (Nikon, Japan)하에서 분리하였고, 부고환으로부터 채취한 정자의 생존율 유지를 위해서 온도 32 ℃를 유지시켜주었고, 체내와 유사한 환경을 위해서 배지 내에 정자를 희석하여주었다.
- SD rat의 순화기간 8일이 지난 후 2주에 걸쳐 월, 수, 금요일에 6회의 분할조사를 시행하였다. 방사선조사는 충북대학교 수의과대학 동물의료센터에 설치되어 있는 리스템사의 125 kVp , 500 mA 일반 촬영 장치를 이용하였다.
- 고정과 트리밍이 끝난 조직은 탈수, 탈알코올, 파라핀 침투과정을 거친 후 포맷하여 4um의 두께로 박절한 후 탈파라핀, 함수, harris hematoxilin(sigma). eosin(sigma), 탈색, 청명 과정을 거쳐 H&E (hematoxilin&eosin) 염색을 실시하여 Neo-canada balsam으로 봉입하였다.
- 그리고 운동 정자 수의 신뢰도 향상을 위해서 동물별로 5번의 시야에서 확인하였고, 두 사람이 상호교차 체크를 하였다. 계수는 Neubeuat 계수 판의 RBC구역과 WBC구역을 계수하여 총 중구획 5개를 계수하여 전체정자수와 운동 정자수의 비율로 표기하였다.
- 적출한 고환과 부고환은 해부 현미 경 (Nikon, Japan)하에서 분리하였고, 부고환으로부터 채취한 정자의 생존율 유지를 위해서 온도 32 ℃를 유지시켜주었고, 체내와 유사한 환경을 위해서 배지 내에 정자를 희석하여주었다. 그리고 운동 정자 수의 신뢰도 향상을 위해서 동물별로 5번의 시야에서 확인하였고, 두 사람이 상호교차 체크를 하였다. 계수는 Neubeuat 계수 판의 RBC구역과 WBC구역을 계수하여 총 중구획 5개를 계수하여 전체정자수와 운동 정자수의 비율로 표기하였다.
- 부검 전에 뇨를 채취하여 색상과 투명도를 확인하고 CYBOW™ 시험지(DFI, Korea)# 사용하여 유로빌리노겐, 포도당, 빌리루빈, 케톤체, 비중, pH, 단백질, 아질산염, 백혈구 검사를 실시하였다.
- 에 틸 렌디아민테 트라아세트산(ethylenediamine tetraacetic acid, EDTA)가 함유된 complete blood count (CBC) bottle(녹십자의료공업(주))에 채혈하여 혈구자동측정기 (Cell-dyn 3700, Abbott, USA)를 사용하여 total erythrocyte counts (red blood cells, RBC), hemoglobin, hematocrit, RBC indices, mean corpuscular volume (MCV), mean corpuscular hemoglobin (MCH), mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC), platelets, total leukocyte counts (white blood cells, WBC) WBC differential counts를 측정하였다. CBC (complete blood cell count) 검사 시약은 Svsmex (Svsmex, Japan)# 사용하였다.
- 방사선조사는 충북대학교 수의과대학 동물의료센터에 설치되어 있는 리스템사의 125 kVp , 500 mA 일반 촬영 장치를 이용하였다. 에너지는 쥐의 방사선 흡수율을 고려하여 저에너지인 54 kVp을 이용하였고, 선량은 RAD CHECK® PLUS (FLUKE, USA)을 이용하여 측정하였다. 36마리 SD rat을 6마리씩 6군으로 나누고 Gl, G2, G3, G4, G5, G6으로 구분하여, 선량률은 0.
- 적출된 고환과 부고환은 좌측의 고환은 장기중량 측정 후 조직학적 검사 (H&Estain)를 위하여 Bouin solution에 2일간 고정 후 적절한 크기로 trimming하여 다시 10% NBF (neutral buffered formalin)에 1일간 고정하였다. 고정과 트리밍이 끝난 조직은 탈수, 탈알코올, 파라핀 침투과정을 거친 후 포맷하여 4um의 두께로 박절한 후 탈파라핀, 함수, harris hematoxilin(sigma).
- 적출한 고환과 부고환은 해부 현미 경 (Nikon, Japan)하에서 분리하였고, 부고환으로부터 채취한 정자의 생존율 유지를 위해서 온도 32 ℃를 유지시켜주었고, 체내와 유사한 환경을 위해서 배지 내에 정자를 희석하여주었다. 그리고 운동 정자 수의 신뢰도 향상을 위해서 동물별로 5번의 시야에서 확인하였고, 두 사람이 상호교차 체크를 하였다.
- lg 당 정자수로 환산하여 표기하였다. 정자 현탁액을 염색액(1° . Eosin B. sigma)과 1:1로 혼합하여 염색한 후 cover 잉ass로 덮은 후 투명 매니큐어를 이용하여 밀봉하였다. 이는 정자의 형태학적 이상여부 확인에도 이용하였다.
- 채혈 후 혈청을 분리하여 자동분석기 HITACHI 7150 (HITACHI, japan)와 전해 질분석 기 (AVL9181, Roche Diagnostics, Germany)를 이용하여 alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotranferase (AST), alkaline phosphatase (ALP), glucose, blood urea nitrogen (BUN), creatinine, total bilirubin (T-bilirubin), total cholesterol (T-cholesterol), triglycerides, total protein (T-protein), albumin 및 albumin/ globulin (A/G) ratio를 검사하였다. HDL (high density lipoprotein)은 DAIICHI (DAIICHI, Japan) 시약을 사용하였고, HDL 검사를 제외한 일반화학 항목은 WAKO (WAKO chemical, Japan) 시약을 사용하였다.
대상 데이터
- (A/G) ratio를 검사하였다. HDL (high density lipoprotein)은 DAIICHI (DAIICHI, Japan) 시약을 사용하였고, HDL 검사를 제외한 일반화학 항목은 WAKO (WAKO chemical, Japan) 시약을 사용하였다.
- Sprague-Dawley(SD)계 6주령의 rat 수컷 36마리를 (주)샘타코바이오코리아(경기도 오산)로부터 구입하여 8일간의 순화 기간을 거쳐 건강한 동물만을 시험에 사용하였다. 선발한 동물은 특별한, 질병이 없는 상태로 케이지당 3마리씩 사육하였다.
- 선발한 동물은 특별한, 질병이 없는 상태로 케이지당 3마리씩 사육하였다. 물과 먹 이는 원하는 만큼 먹을 수 있도록 자유 섭 취시 켰고, 사육실의 온도는 21-25 ℃, 습도는 50-60%, 공기순환이 잘 이루어지는 충북대학교 실험동물지원센터 에서 사육하였다 .
- 6회의 분할조사를 시행하였다. 방사선조사는 충북대학교 수의과대학 동물의료센터에 설치되어 있는 리스템사의 125 kVp , 500 mA 일반 촬영 장치를 이용하였다. 에너지는 쥐의 방사선 흡수율을 고려하여 저에너지인 54 kVp을 이용하였고, 선량은 RAD CHECK® PLUS (FLUKE, USA)을 이용하여 측정하였다.
- 거쳐 건강한 동물만을 시험에 사용하였다. 선발한 동물은 특별한, 질병이 없는 상태로 케이지당 3마리씩 사육하였다. 물과 먹 이는 원하는 만큼 먹을 수 있도록 자유 섭 취시 켰고, 사육실의 온도는 21-25 ℃, 습도는 50-60%, 공기순환이 잘 이루어지는 충북대학교 실험동물지원센터 에서 사육하였다 .
데이터처리
- 실험 결과는 Origin 6.0 (OriginLab, USA) 프로그램을 이용하여 t-test 통계 분석을 하였으며 , p-value가 0.05 이하인 경우 통계적인 유의성이 있는 것으로 판정하였다.
이론/모형
- 정자운동성에 사용되었던 것과 동일한 검체를 실온에서 보관하여 정자를 안정화 시킨 후 위와 동일한 방법으로 Neubeuat 계수판을 이용하여 정자수를 계수 하였다. 계수된 수(5개 중구획의 합) X 2(lum로 맞춰주기 위한 계수) X 배지용량(ul)O.
성능/효과
- Gl, G2, G3, G4, G5, G6의 고환조직을 현미경 시야에서 확인한 결과 정세관, 정소세포에서 공포화가 나타나지 않았고, 정자수의 변화를 확인할 수 없었다(Fig. 4).
- SD rat의 체중, 좌우측 고환, 좌우측 부고환, 우측 부고환의 두부무게는 표 1과 같이 나타났고, 통계적으로 유의한 차이는 없었다.
- 그러나 대조군에 비흐卜여 방사선 조사군에서 남성호르몬이 모두 증가함을 보였다(Fig. 3).
- 부검 전에 실시한 색상, 투명도, 유로빌리노겐, 포도당, 빌리루빈, 케톤체, 비중, PH, 단백질, 아질산염, 백혈구의 검사 결과 유의한 차이는 관찰되지 않았다.
- 이러한 연구결과는 SD mt의 정자수, 운동성 , 남성호르몬, 요검사, 혈액검사, 혈액생화학적 및 고환조직검사의 기초 자료로 활용 가능하고, 과학기술부와 보건복지부의 법 령 에서 제한하는 선량이하에서 피폭선량이 관리된 실험동물에게 유해한 효과가 나타나지 않는다는 것을 확인하였다. 그러나 이와 같은 연구의 결과는 제한된 숫자의 동물에게서 확인한 결과이므로 인체 에서 동일한 효과가 나타난다고 주장할 수 없다.
- 저선량 방사선에 의한 쥐의 정자에 미치는 생물학적 효과를 규명하기 위한 실험에서 정자의 수, 운동성, 호르몬을 분석하여 생물학적 변화를 분석한 결과는 SD rat의 정자수, 운동성, 남성호르몬, 요검사, 혈액검사, 혈액생화학적 및 고환조직검사의 변화에서 통계적으로 유의한 차이는 없었다. 이러한 연구결과는 SD mt의 정자수, 운동성 , 남성호르몬, 요검사, 혈액검사, 혈액생화학적 및 고환조직검사의 기초 자료로 활용 가능하고, 과학기술부와 보건복지부의 법 령 에서 제한하는 선량이하에서 피폭선량이 관리된 실험동물에게 유해한 효과가 나타나지 않는다는 것을 확인하였다.
후속연구
- 그러나 이와 같은 연구의 결과는 제한된 숫자의 동물에게서 확인한 결과이므로 인체 에서 동일한 효과가 나타난다고 주장할 수 없다. 그러므로 향후 다른 동물에 나타나는 효과와 궁극적으로 인체 에 나타나는 효과에 대한 추가적인 연구가 이루어져야 할 것으로 사료된다.
- 그러나 대부분의 보건복지부 법령에서 제한하는 선량이하에서 피폭선량이 관리되고 있으므로 저선량 방사선 피폭 연구가 요구된다. 또한 저선량의 방사선 조사로 인한 생물학적 영향의 평가에 대하여는 아직도 많은 의문점이 제기되고 있어 이에 대한 기초적인 연구의 필요성이 요구된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.