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문제 정의
- 본 저자들은 오대산에 자생하는 야생버섯 60 종의 메탄올 추출물을 이용하여 혈전용해 활성과 a-glucosidase 저해 효과를 확인하고 결과를 발표하고자 한다.
제안 방법
- 7 U, sigma)를 효소로 사용하고, 같은 완충용액에 5 mM 농도로 준비 한 p-nitrophenyl a-D-glucopyranoside를 기질 용액으로 사용하였다. 효소 용액 50에 증류수와 DMSO(1 : 1)에 녹인 버섯 시료(100 mg/mZ) 10/"와 완충용액 890 넣고 섞은 후, 5분 동안 실온에서 선배 양한 후 준비한 기질용액 50를 첨가하고, 다시 5분 동안 배양한 다음 UV-visible spectrophotometer(UV-1601 PC, Shimadzu, Japan) 405 nm에서 흡광도 변화를 즉정 하였다. 또한 시료를 첨가하지 않고 대신 완충용액을 첨가한 경우의 흡광도 변화도 측정하여 저해율을 계산하였다.
- 5)에 녹인 thrombin(100 NIH units) 50 나을 잘 섞은 후 이를 petri dish에 부어 fibrin 막을 만들었다. 준비한 시료들을 2。以 씩 fibrin plate 위에 점적하고, 36℃에서 8시간 방치한 후, 용해면적을 측정하여 이들의 넓이를 비교하였으며, 대조 구로는 plasmin(1.0 unit//)를 사용하였다. 주줄액의 혈전 용해 활성은 대조구의 용해면적에 대한 시료의 용해 면적의 상대적인 비율로 환산하여 계산하였다.
- 효소 용액 50에 증류수와 DMSO(1 : 1)에 녹인 버섯 시료(100 mg/mZ) 10/"와 완충용액 890 넣고 섞은 후, 5분 동안 실온에서 선배 양한 후 준비한 기질용액 50를 첨가하고, 다시 5분 동안 배양한 다음 UV-visible spectrophotometer(UV-1601 PC, Shimadzu, Japan) 405 nm에서 흡광도 변화를 즉정 하였다. 또한 시료를 첨가하지 않고 대신 완충용액을 첨가한 경우의 흡광도 변화도 측정하여 저해율을 계산하였다. 실험은 3번 시행한 후 평균치를 실험값으로 사용하였다.
- 0 unit//)를 사용하였다. 주줄액의 혈전 용해 활성은 대조구의 용해면적에 대한 시료의 용해 면적의 상대적인 비율로 환산하여 계산하였다.
- 준비한 야생버섯 60종의 50% 메탄올 추출물을 이용하여 혈관계 질환과 당뇨병에 관련된 혈전용해 활성과 «- glucosidase 저해 활성을 확인하였다. 실험 결과 11종의 버섯에서 혈전용해 활성을 확인할 수 있었다.
대상 데이터
- 사용한 버섯 시료는 2006년 8월과 9월에 오대산에서 채취하여 분류 동정된 자실체로, 50% methanol 용액에서 잘게 자른 후 5일간 방치하고, 여과하여 얻어진 추출물을 rotary evaporator# 이용하여 감압 농축시키고, 다시 냉동건조 후 냉동 보관하면서 사용하였다. 사용하기 전 증류수와 DMSO(1 : 1)의 혼합 용액에 녹여(100 mg/) 시료로 사용하였다.
- (1997) 의 실험방법에 따라 p-nitrophenyl ar-D-glucopyranoside 를 기질로 이용하여 측정하였다. 즉 100 mM phosphate buflfer(pH 7.0)에 녹아 있는 효모 기원의 a-glucosidase (0.7 U, sigma)를 효소로 사용하고, 같은 완충용액에 5 mM 농도로 준비 한 p-nitrophenyl a-D-glucopyranoside를 기질 용액으로 사용하였다. 효소 용액 50에 증류수와 DMSO(1 : 1)에 녹인 버섯 시료(100 mg/mZ) 10/"와 완충용액 890 넣고 섞은 후, 5분 동안 실온에서 선배 양한 후 준비한 기질용액 50를 첨가하고, 다시 5분 동안 배양한 다음 UV-visible spectrophotometer(UV-1601 PC, Shimadzu, Japan) 405 nm에서 흡광도 변화를 즉정 하였다.
데이터처리
- 또한 시료를 첨가하지 않고 대신 완충용액을 첨가한 경우의 흡광도 변화도 측정하여 저해율을 계산하였다. 실험은 3번 시행한 후 평균치를 실험값으로 사용하였다.
이론/모형
- (1997) 의 실험방법에 따라 p-nitrophenyl ar-D-glucopyranoside 를 기질로 이용하여 측정하였다. 즉 100 mM phosphate buflfer(pH 7.
- 혈전용해 활성은 Haverkata-Trass(1974)의 fibrin plate 법에 따라 2% gelatin 용액에 녹인 0.7%(w/v) fibrinogen 용액 10과 0.05 M barbital 완충용액 (pH 7.5)에 녹인 thrombin(100 NIH units) 50 나을 잘 섞은 후 이를 petri dish에 부어 fibrin 막을 만들었다. 준비한 시료들을 2。以 씩 fibrin plate 위에 점적하고, 36℃에서 8시간 방치한 후, 용해면적을 측정하여 이들의 넓이를 비교하였으며, 대조 구로는 plasmin(1.
성능/효과
- 0 plasmin units 의 높은 혈전용해 활성을 나타냈다. a-Glucosidase 저해 활성 측정결과 노란다발버섯이 98.5%의 가장 큰 저해 활성을 나타냈고 비단그물버섯과 점마개버섯도 60% 이상의 높은 저해 활성을 나타냈다. 본 연구는 뽕나무벗섯류와 노란다발버섯은 혈관계질환 치료용 의약이나 기능성 식품으로 개발될 수 있음을 보여준다.
- 반면 효소 상태에서 활성이 큰 것으로 알려진 뽕나무버섯의 메탄올 추출물은 활성을 나타내지 않아 대조를 이루었는데 이는 성장한 환경 조건의 차이로 나타난 결과인지 더 많은 연구가 필요한 부분이다. 광대 버섯과의 애광대 버섯과 독우산광대 버섯은 독버섯들로 비교적 큰 혈전용해 활성을 나타냈는데 이는 같은 속의 흰가시광대버섯 보다는 활성이 낮았다. 그러나 주름버섯과, 소똥버섯과, 외대버섯과, 못버섯과, 독청버섯과, 고약버섯과 버섯에서는 활성을 확인하지 못했다.
- 실험 결과 11종의 버섯에서 혈전용해 활성을 확인할 수 있었다. 그 중에서 뽕나무버섯류(, 4, .)가 4.2 plasmin units의 가장 큰 혈전용해 활성을 나타냈으며, 독우산광대버섯virosd), 미치광이버섯류(Gjsp.), 민자주방망이버섯(pz'm nuda)은 2.3 plasmin units, 애광대버섯 (Amanita citrina)^: 2.1 plasmin units, 흰보라끈적버섯 (Cortinarius alboviolaceus)은 2.0 plasmin units의 높은 활성을 나타냈다. 또한 자주방망이버섯아제비 (Z sordida) 이 1.
- 0 plasmin units의 높은 활성을 나타냈다. 또한 자주방망이버섯아제비 (Z sordida) 이 1.8 plasmin units, 쓴맛그물버섯류(sp.)이 1.4 plasmin units 의 활성을 나타냈고, 붉은무당버섯아제비 pseudointegra), 넓은솔버섯platyphylla), 간버섯coccineus) 등은 1.0 이하의 낮은 활성을 나타냈다(Fig. 1, Table 1).
- 버섯 시료의 cz-glucosidase 저해효과를 확인한 결과, 60개의 버섯 중 50% 이상의 a-glucosidase 저해 효과를 나타낸 버섯은 9종으로 확인 되었으며, 노란다발버섯 (Naematoloma 이 98.5%로 가장 저해 효과가 높았고, 비단그물버섯(&s luteus) 이 66.6%, 점마개버섯(Gomphidius 이 61.5%의 높은 활성을 나타냈고, 흰구름버섯 (Corz'cs hirsutus)은 57.9%, Psathyrella candolleana는 55.8%, 큰비단그물버섯(Si”〃z/s grevillei) 은 54.1%, 흰보라끈적버섯 alboviolaceus)은 52.1%, 산그물버섯류sp.)는 51.
- ) 와 흰보라끈적버섯(Corarins alboviolaceus、)。' 비교적 높은 혈전용해 활성과 a-glucosidase 저해 활성을 함께 함유하고 있었다. 시료 중 뽕나무버섯류(4削沮ar/a sp.)이 4.2 plasmin units 의 가장 높은 혈전용해 활성을 나타냈으며, 노란다발버섯 (Naematoloma fascic讯are)이 98.5%로 가장 높은 cz- glucosidase 저해 활성을 나타냈다. 노란다발버섯은 독버섯으로 알려져 있어 직접적인 사용이 불가능하여 사용에 한계가 있으나 활성물질의 분리 정제 후 독성검사를 통해 안전성이 확인되고 기존의 제약들보다 a-glucosidase 저해 활성이 더 크며 그들이 갖고 있는 단점들을 극복할 수 있다면 새로운 혈당강하제의 개발에 이용될 수 있을 것이다.
- 저해 활성을 확인하였다. 실험 결과 11종의 버섯에서 혈전용해 활성을 확인할 수 있었다. 그 중에서 뽕나무버섯류(, 4, .
- 오대산에 자생하는 야생버섯 60종의 메탄올 추출물을 이용하여 혈관계 질환과 당뇨병의 치료에 효과 있는 버섯을 확인하기위해 , 혈전용해 활성과 a-glucosidase 저해 활성을 확인한 결과 11종의 버섯이 혈전용해 활성을 나타냈고, 6종의 버섯이 50% 이상의 a-glucosidase 저해 활성을 나타냈다. 뽕나무버섯류가 4.
후속연구
- , 2000). 그러나 버섯으로부터 a- glucosidas 저해 물질을 확인하는 실험은 많이 이루어져 있지 않아 이에 대한 체계적인 연구가 필요하다.
- 5%로 가장 높은 cz- glucosidase 저해 활성을 나타냈다. 노란다발버섯은 독버섯으로 알려져 있어 직접적인 사용이 불가능하여 사용에 한계가 있으나 활성물질의 분리 정제 후 독성검사를 통해 안전성이 확인되고 기존의 제약들보다 a-glucosidase 저해 활성이 더 크며 그들이 갖고 있는 단점들을 극복할 수 있다면 새로운 혈당강하제의 개발에 이용될 수 있을 것이다. 또한 뽕나무버섯류(4tmF sp.
- 노란다발버섯은 독버섯으로 알려져 있어 직접적인 사용이 불가능하여 사용에 한계가 있으나 활성물질의 분리 정제 후 독성검사를 통해 안전성이 확인되고 기존의 제약들보다 a-glucosidase 저해 활성이 더 크며 그들이 갖고 있는 단점들을 극복할 수 있다면 새로운 혈당강하제의 개발에 이용될 수 있을 것이다. 또한 뽕나무버섯류(4tmF sp.)는 식용이 가능할 경우 혈관계질환의 예방과 치료에 이용될 수 있으며, 혈전 용해 성분이 포함되어 있지 않은 기존의 식품재료와 함께 사용하면 성인병 관련 기능성 식품의 개발에도 사용할 수 있을 것으로 판단된다.
- 특히 민자주방망이버섯은 효소 형태에서도 높은 활성을 나타내는 버섯으로 알려져 기능성 식품 재료로의 활용도 확대될 수 있을 것이다. 반면 효소 상태에서 활성이 큰 것으로 알려진 뽕나무버섯의 메탄올 추출물은 활성을 나타내지 않아 대조를 이루었는데 이는 성장한 환경 조건의 차이로 나타난 결과인지 더 많은 연구가 필요한 부분이다. 광대 버섯과의 애광대 버섯과 독우산광대 버섯은 독버섯들로 비교적 큰 혈전용해 활성을 나타냈는데 이는 같은 속의 흰가시광대버섯 보다는 활성이 낮았다.
- 5%의 가장 큰 저해 활성을 나타냈고 비단그물버섯과 점마개버섯도 60% 이상의 높은 저해 활성을 나타냈다. 본 연구는 뽕나무벗섯류와 노란다발버섯은 혈관계질환 치료용 의약이나 기능성 식품으로 개발될 수 있음을 보여준다.
- 그러나 현재 국내에 자생하는 버섯 약 1500여종 가운데의 약용으로 이용되고 있는 버섯은 영지버섯, 구름버섯, 표고버섯, 만가닥버섯 등 약 100여종이 알려져 있을 뿐이다. 아직도 야생버섯이 함유한 성분 중에 밝혀지지 않은 많은 생리활성 물질들이 있어 이들의 확인은 질병의 예방과 치료제 개발에 사용할 수 있을 뿐 아니라 기능성 식품과 음료의 개발에도 사용할 수 있을 것이다.
- 이미 여러 종류의 생리활성물질을 함유하고 있어 약리적인 목적으로 다양하게 이용되고 있는 버섯에 활성이 큰 혈전 용해 물질과 a-이ucosidase 저해 물질이 확인되면 이 버섯은 성인병 치료제의 개발에 이용할 수 있을 뿐 아니라 기존의 식품 재료와 함께 사용하여 새로운 기능성 식품의 개발에도 이용할 수 있을 것이다. 특히 식용 가능한 버섯의 경우에는 더욱 다양한 용도로 사용할 수 있을 것이다.
- 특히 민자주방망이버섯, 자주방망이버섯아제비, 넓은솔버섯은 식용 가능한 버섯들이라 더욱 이용 가치가 있는 버섯들로 생각된다. 특히 민자주방망이버섯은 효소 형태에서도 높은 활성을 나타내는 버섯으로 알려져 기능성 식품 재료로의 활용도 확대될 수 있을 것이다. 반면 효소 상태에서 활성이 큰 것으로 알려진 뽕나무버섯의 메탄올 추출물은 활성을 나타내지 않아 대조를 이루었는데 이는 성장한 환경 조건의 차이로 나타난 결과인지 더 많은 연구가 필요한 부분이다.
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