본 연구에서는 in vitro에서 모과의 항산화 활성을 평가하기 위하여 용매별 분획물의 항산화능을 검토하였다. 모과에탄올 추출물의 수율은 9.23%이었고, 이를 n-hexane, chloroform, ethylacetate, n-butanol, water로 계통 분획한 수율은 water분획물이 1.52%로 가장 높았으며 그 다음으로 ethylacetate 분획물 1.46%의 순이었다. 모과 에탄을 추출물의 총 flavonoid 함량은 $0.331{\pm}0.021\;mg/mL$이었고, 각 분획물의 총 flavonoid 함량은 n-hexane 분획 물이 $0.653{\pm}0.046mg/mL$로 가장 많이 검출되었다. 모과 에탄올 추출물의 총 polyphenol 함량은 0.279mg/mL이었고, 각 분획물중 n-hexane 분획물이 $0.712{\pm}0.017\;mg/mL$로 가장 많이 함유된 것으로 나타났다. In vitro에서 모과 분획물별 항산화 효과를 측정하기 위해 DPPH radical에 대한 자유기 소거능을 측정 한 결과 n-hexane 분획물이 $27.3{\mu}g/mL$로 가장 강한 항산화 활성을 나타내었으며, 이는 양성 대조군인 합성 항산화제 BHT의 $26.5{\mu}g/mL$와 유사한 전자공여능을 나타냈다. 또한 rancimat으로 측정한 항산화지수도 n-hexane 분획물이 BHT와 유사한 수치를 나타냈으며, 지질과산화물 생성 억제효과도 n-hexane 분획물이 62.5%로 가장 항산화력이 우수하였다. 또한 본 연구팀은 in vivo에서 모과 에탄을 추출물의 항산화 효과를 관찰하였는데, 모과에탄을 추출물과 알코올을4주간 경구 투여한 후 흰쥐의 간 조직 손상에 대한 보호효과를 검토한 결과 알코올 투여로 증가된 유리기 해독계 효소인 superoxide dismutase, catalase 및 glutathione peroxidase 활성은 억제시키고, glutathione 함량은 증가시켰으며 지질과산화물 함량을 저하시켰다. 따라서 모과는 알코올 투여로 손상된 간조직의 보호에 도움을 줄 수 있을 것이라는 가능성을 제시해 주었다(32). 이상의 실험결과 모과에탄올 추출물은 in vivo와 in vitro 연구 모두에서 항산화 효과를 나타내었으며, 이는 모과가 우수한 천연 항산화제로서의 개발가능성을 제시해 주었다.
본 연구에서는 in vitro에서 모과의 항산화 활성을 평가하기 위하여 용매별 분획물의 항산화능을 검토하였다. 모과에탄올 추출물의 수율은 9.23%이었고, 이를 n-hexane, chloroform, ethylacetate, n-butanol, water로 계통 분획한 수율은 water분획물이 1.52%로 가장 높았으며 그 다음으로 ethylacetate 분획물 1.46%의 순이었다. 모과 에탄을 추출물의 총 flavonoid 함량은 $0.331{\pm}0.021\;mg/mL$이었고, 각 분획물의 총 flavonoid 함량은 n-hexane 분획 물이 $0.653{\pm}0.046mg/mL$로 가장 많이 검출되었다. 모과 에탄올 추출물의 총 polyphenol 함량은 0.279mg/mL이었고, 각 분획물중 n-hexane 분획물이 $0.712{\pm}0.017\;mg/mL$로 가장 많이 함유된 것으로 나타났다. In vitro에서 모과 분획물별 항산화 효과를 측정하기 위해 DPPH radical에 대한 자유기 소거능을 측정 한 결과 n-hexane 분획물이 $27.3{\mu}g/mL$로 가장 강한 항산화 활성을 나타내었으며, 이는 양성 대조군인 합성 항산화제 BHT의 $26.5{\mu}g/mL$와 유사한 전자공여능을 나타냈다. 또한 rancimat으로 측정한 항산화지수도 n-hexane 분획물이 BHT와 유사한 수치를 나타냈으며, 지질과산화물 생성 억제효과도 n-hexane 분획물이 62.5%로 가장 항산화력이 우수하였다. 또한 본 연구팀은 in vivo에서 모과 에탄을 추출물의 항산화 효과를 관찰하였는데, 모과에탄을 추출물과 알코올을4주간 경구 투여한 후 흰쥐의 간 조직 손상에 대한 보호효과를 검토한 결과 알코올 투여로 증가된 유리기 해독계 효소인 superoxide dismutase, catalase 및 glutathione peroxidase 활성은 억제시키고, glutathione 함량은 증가시켰으며 지질과산화물 함량을 저하시켰다. 따라서 모과는 알코올 투여로 손상된 간조직의 보호에 도움을 줄 수 있을 것이라는 가능성을 제시해 주었다(32). 이상의 실험결과 모과에탄올 추출물은 in vivo와 in vitro 연구 모두에서 항산화 효과를 나타내었으며, 이는 모과가 우수한 천연 항산화제로서의 개발가능성을 제시해 주었다.
This study was performed to investigate the antioxidant effect of 80% (v/v) ethanol extract from Chaenomelis Fructus (CF). Total flavonoids and total polyphenols in the extract were also measured spectrophotometrically. The extraction yield was 9.23g/100g CF. The extract was further fractionated by ...
This study was performed to investigate the antioxidant effect of 80% (v/v) ethanol extract from Chaenomelis Fructus (CF). Total flavonoids and total polyphenols in the extract were also measured spectrophotometrically. The extraction yield was 9.23g/100g CF. The extract was further fractionated by partition with n-hexane, chloroform, ethylacetate, butanol, and water. The water fraction showed the highest extraction yield of all fractions. The n-hexane method and compared with the properties of the commerical antioxidant BHT. The activities of the n-hexane fraction were the highest of all fractions. In addition, there was strong positive correlation between antioxidant activities and levels of antioxidative compounds, such as flavonoid and polyphenols, in CF fractions, suggesting that these antioxidative compounds may contribute to the antioxidative effect of CF.
This study was performed to investigate the antioxidant effect of 80% (v/v) ethanol extract from Chaenomelis Fructus (CF). Total flavonoids and total polyphenols in the extract were also measured spectrophotometrically. The extraction yield was 9.23g/100g CF. The extract was further fractionated by partition with n-hexane, chloroform, ethylacetate, butanol, and water. The water fraction showed the highest extraction yield of all fractions. The n-hexane method and compared with the properties of the commerical antioxidant BHT. The activities of the n-hexane fraction were the highest of all fractions. In addition, there was strong positive correlation between antioxidant activities and levels of antioxidative compounds, such as flavonoid and polyphenols, in CF fractions, suggesting that these antioxidative compounds may contribute to the antioxidative effect of CF.
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문제 정의
따라서 본 연구에서는 모과의 항산화 활성을 평가하기 위하여 용매 추출과 분획을 통하여 총 flavonoid와 polyphenol의 함량을 분석하고, in vitro 에서 모과 에탄올 추출물 분획물에 대한 l, l-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH) radical 소거능, 항산화지수, 지질과산화 억제 효과 등을 측정하여 항산화력을 검토하였다.
제안 방법
, USA)에 첨가하고, 초음파(Ultrasonic processor, UCX-750, USA) 를 이용하여 시료 추출물과 유지가 잘 혼합되도록 하였다. Rancimat의 측정 조건은 시료 3.0 g을 반응용기에 취하고 증류수 70 mL를 측정용기에 넣은 후 110°C 에서 air flow rate 20 L/h로 하여 산화안정성을 비교하였다 (22). 항산화지 수(antioxidant index, AI)는 분획 물을 첨 가한 실험군의 유도시간을 분획물을 첨가하지 않은 대조 군의 유도 시간으로 나눈 값을 구하였고, 모든 측정치는 3회 반복 실험하여 얻은 값의 평균치로 표시하였다.
0 mL를 가하고 진탕시킨 후 3, 000 rpm 에서 5분 동안 원심 분리하여 532 nm에서 상징액의 흡광도를 측정하였다. TBA값은 분획물 첨가구의 흡광도와 대조군의 흡광도로부터 산출하였으며 지질과산화 반응을 50% 억제시키는 농도를 IC%으로 하였다.
2 mL를 가하여 반응시켜 750 nm에서 흡광도를 측정하였다. Tannic acid를 이용한 표준 곡선은 tannic acid 0.01 g을 증류수 10 mL에 녹이 고 최종농도가 0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 및 1.0 mg/mL 용액이 되도록 조제하고 이를 일정 량 취하여 위와 같은 방법으로 7.50 nm 에서 흡광도를 측정하여 계산하였다.
측정하였다. 각 분획물에 포함된 용매를 완전히 제거한 후 각 분획물의 함량이 600 ppm이 되도록 soybean oil(Sgma Co., USA)에 첨가하고, 초음파(Ultrasonic processor, UCX-750, USA) 를 이용하여 시료 추출물과 유지가 잘 혼합되도록 하였다. Rancimat의 측정 조건은 시료 3.
항산화지 수(antioxidant index, AI)는 분획 물을 첨 가한 실험군의 유도시간을 분획물을 첨가하지 않은 대조 군의 유도 시간으로 나눈 값을 구하였고, 모든 측정치는 3회 반복 실험하여 얻은 값의 평균치로 표시하였다. 기존의 상업용 항산화제인 BHH를 유지에 대해 첨가하여 양성 대조 군으로 비교 실험하였다.
nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군에 대해 시료를 넣었을 때의 흡광도의 감소 정도를 측정하여 저해율 (inhibition rate, %)을 구하였다. 대조군의 흡광도를 100%로 하여 시료를 첨가하여 DPPH 라디 칼을 50% 소거하는 시료의 농도(RC50)를 계산하였다.
대조군에 대해 시료를 넣었을 때의 흡광도의 감소 정도를 측정하여 저해율 (inhibition rate, %)을 구하였다. 대조군의 흡광도를 100%로 하여 시료를 첨가하여 DPPH 라디 칼을 50% 소거하는 시료의 농도(RC50)를 계산하였다.
모과 에탄올(80%) 추출물을 Fig. 1과 같이 separating funnel0]] 의한 용매별 분획으로 n-hexane, chlorofarm, dhylacetate 및 n-butanol로 연속 추출(17)한 후 각 분획물을 rotary vacuum evaporator로 감압 . 농축한 다음 동결 건조시 켜 Table 1과 같이 수율을 계산하고 항산화 활성 측정용 시료로 사용하였다.
모과 에탄올 추출물 분획물의 DPPH radical 소거능을 측정한 결과는 Table 2와 같다. 본 연구 결과 모과 에탄올 추출물이 항산화 물질로 알려진 flavonoid와 polyphenol을 다량 함유하고 있으므로 항산화력이 있다고 판단되어 DPPH radical 소거 능을 측정 하였다. DPPH radical 소거 활 성은 n-hexane, ethylacetate, n-butanol, chloroform, water 분획물 순으로 나타났다.
용매별 분획물의 총 flavonoid 함량은 Davis 등(18)의 방법을 변형하여 다음과 같이 측정하였다. 즉, 모과 용매별 분획물 400 uL에 90% diethylene glycol 4 mL를 첨가하고, 다시 IN NaOH 40 pL을 넣은 다음 37 °C water bath에서 1시 간 동안 incubation한 후 420 nm에서 흡광도를 측정하였다.
즉, 모과 용매별 분획물 400 uL에 90% diethylene glycol 4 mL를 첨가하고, 다시 IN NaOH 40 pL을 넣은 다음 37 °C water bath에서 1시 간 동안 incubation한 후 420 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시 약으로는 rutin(Sigma Co., USA)을 사용하였으며, rutin을 이용한 표준곡선은 rutin 0.01 g을 증류수 10 mL에 녹이고 최종농도가 0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 및 1.0 mg/mL 용액이 되도록 조제한 다음 이를 일정량 취하여 위와 같은 방법으로 420 nm에서 흡광도를 측정하여 계산하였다.
대상 데이터
모과Fructus)는 2005년 10월 시중에서 황색 과피를 갖는 것을 구입하여 실험재료로 사용하였다. 모과는 표면의 먼지와 이물질, 끈적이는 콜로이드성 물질 등을 중성세제로 제거한 후 흐르는 물로 깨끗이 씻고 물기를 잘 닦아 없앤 후 세절하여 -7CTC에 냉동시킨 후 동결건조하여 시료로 사용하였다.
모과는 표면의 먼지와 이물질, 끈적이는 콜로이드성 물질 등을 중성세제로 제거한 후 흐르는 물로 깨끗이 씻고 물기를 잘 닦아 없앤 후 세절하여 -7CTC에 냉동시킨 후 동결건조하여 시료로 사용하였다.
데이터처리
본 실험은 3회 반복 시행하였으며, 실험에서 얻은 결과는 SPSS 12.0(Statistical package for the social science)P/C package를 이용하여 실험군당 평균을 계산하였고, 일원 배치 분산분석 (one-way AN0VA) 를 실시하였으며, 사후검정은 Tufcy's test(24)에 의하여 실행하였다. 본 연구에 이용된 통계적 유의성 검증은 p<0.
이론/모형
시료의 DPPH radical 소거 활성은 Chen 등의 방법(20)에 따라, dimethyl sulfoxide (DMSO) 100 pL를 대조군으로 하고, DMSO에 녹여 희석한 시료 100 11L에 200 pM DPPH 1, 900 yL를 가한 후, 37°C에서 30분 동안 반응시킨 다음 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군에 대해 시료를 넣었을 때의 흡광도의 감소 정도를 측정하여 저해율 (inhibition rate, %)을 구하였다.
용매별 분획 물의 총 polyphenol 함량은 AOAC법(19)에의하여 측정하였다. 모과추출물 및 용매별 분획물 1 mL를취하여 2%(w/v) NazCOj 용액 1 mL를 가하여 3분간 방치한 후, 50% Folin-Ciocalteu 시 약 0.
지질과산화 억제 효능(thiobarbituric acid value, TBA value)의 측정은 Ottolenghi(23)의 방법에 따라 0.1 M phosphate buffer(pH 7.0)와 에탄올을 4 : 1로 혼합한 용액에 linoleic acid를 0.03 M이 되도록 첨가하였다. 이 기 질 용액 2.
항산화지 수(antioxidant index, AI) 는 Joo 등(21)의 방법 에의히] rancimat(Metrohm model 679, Herisan, Switzerland)-g- 이용하여 측정하였다. 각 분획물에 포함된 용매를 완전히 제거한 후 각 분획물의 함량이 600 ppm이 되도록 soybean oil(Sgma Co.
성능/효과
이를 용매별로 분획한 후 80% 에탄올 추출물에 대한 추출수율을 측정한 결과는 Table 1 과 같다. 80% 에탄올 추출물의 용매별 분획물의 추출수율을 보면 water 분획이 1.52%로 가장 높았으며 ethylacetate, n-hexane, n-butanol, chloroform 순이었다. 연잎 (25), 거봉(26), 엉겅퀴(27)등의 용매별 분획물의 수율과 비교하였을 때 hexane층을 제외하고 용매의 극성이 높을수록 분획물의 수율이 높은 것과 일치하였다.
본 연구 결과 모과 에탄올 추출물이 항산화 물질로 알려진 flavonoid와 polyphenol을 다량 함유하고 있으므로 항산화력이 있다고 판단되어 DPPH radical 소거 능을 측정 하였다. DPPH radical 소거 활 성은 n-hexane, ethylacetate, n-butanol, chloroform, water 분획물 순으로 나타났다. n-Hexane 분획물의 DPPH radical 소거활성이 27.
결과는 Table 4와 같다. 각 분획물의 지질과산화억제율은 n-hexane 분획물이 62.5%, chloroform 분획물이 60.0%, n-butanol 분획물이 40.6%, ethylacetate 분획물이 30.7%, water 분획 물이 12.6%순으로, DPPH free radical 소거 활성 과 rancimat로 측정 한 항산화지 수와 동일하게 n-hexane 분획물에서 지질과산화 억제율이 가장 높게 나타났으며, 양성 대조군로 사용한 BHH의 지질과산화 억제율보다는 낮게 나타났다. 이 결과는 모과에 다량 함유된 phenol의 OH기가 DPPH용액에 존재하는 free radical과 linoleic acid의 산화로 인해 생성되는 free radical에 작용하는 차이 때문으로 생각된다(31).
모과 에탄올 추출물의 총 polyphenol 함량은 0.279 mg/mL로 이 를 분획 후 측정 한 결과 Fig. 3와 같이 n-hexane 분획 물이 0.712±0.017 mg/mL로 총 polyphenol 함량이 가장 높았으며 ethylacetate, n-butanol, chloroform, water 순이었다. 이는 polyphenol을 다량 함유하고 있는 것으로 알려진 연근(28)의 잎에서 추출한 총 polyphenol 함량이 0.
모과의 항산화효과를 검토하기 위해 냉동 건조하여 마쇄한 시료를 80% 에탄올로 추출한 후 동결 건조하여 얻은 모과 추출물의 추출수율은 9.23%이었다. 이를 용매별로 분획한 후 80% 에탄올 추출물에 대한 추출수율을 측정한 결과는 Table 1 과 같다.
00보다 높은 활성을 나타냈으며, 특히 n-hexane 분획물의 활성이 가장 높아 기존 합성 항산화제인 BHU와 유사한 수치를 나타냈다. 본 실험에서 모과 에탄올 추출물의 전 분획물에서 대조군보다 높은 항산화 활성을 나타내었다. 이는 모과 에탄올 추출물에 항산화 활성을 나타내는 물질인 polyphenol과 flavonoid를 다량 함유하고 있기 때문인 것으로 사료된다.
Table 3과 같다. 항산화지수는 DPPH radical 소거작용에서 나타난 결과와 마찬가지로 n-hexane 분획물이 1.57로 가장 높게 나타났고 ethylacetate 분획물이 1.47, n-butanol 분획물이 1.33, chlorofrom 분획물이 1.09, 및 water 분획물이 1.02로 시료를 미첨가한 대조군의 항산화지수 1.00보다 높은 활성을 나타냈으며, 특히 n-hexane 분획물의 활성이 가장 높아 기존 합성 항산화제인 BHU와 유사한 수치를 나타냈다. 본 실험에서 모과 에탄올 추출물의 전 분획물에서 대조군보다 높은 항산화 활성을 나타내었다.
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