Auxin, Siderophore, 및 Cellulase 생산성 다기능 식물생장촉진미생물 Bacillus licheniformis K11의 선발 및 식물생장촉진 효과 Selection of the Auxin, Siderophore, and Cellulase-Producing PGPR, Bacillus licheniformis K11 and Its Plant Growth Promoting Mechanisms원문보기
작물의 생육촉진과 식물 진균병의 생물방제능 효과를 동시에 나타내는 다기능 유기농업용 미생물제제를 개발하고자 경북지역 저병해 경작지 토양으로부터 옥신생산성 균주들을 분리하였다. 그 중 auxin, siderophore, 그리고 항진균성 cellulase를 동시에 생산하는 K11 균주를 선발하였으며, 선발된 K11 균주는 형태 및 생화학적 test 후 Biolog사의 동정시스템(Microlog$^{TM}$ 4.0)과 16s rDNA 상동성을 조사한 결과 Bacillus licheniformis로 동정되었으며, 이를 Bacillus licheniformis K11로 명명하였다. B. licheniformis K11은 고추역병의 원인균인 Phytophthora capsici에 대하여 in vitro 상에서 63%의 길항능을 보였으며, in vivo pot test에서도 뛰어난 방제능을 나타내었다. 또한 B. licheniformis K11의 배양액을 10ml/l로 처리한 녹두발근생검법에서 시판중인 IAA(0.1 mg/l)보다 발근율이 15% 증가됨을 확인 할 수 있었다. 또한 배추, 완두, 녹두를 대상으로 B. licheniformis K11에 의한 식물 생장촉진을 조사한 결과 녹두, 완두 그리고 배추의 뿌리 생육을 각각 160, 150, 130% 증가시켰다. 상기 연구 결과들로 미루어 볼 때 다기능 생물방제균인 B. licheniformis K11을 경작지에 관주하거나 적합한 미생물제제로 제제화한다면 토양전염성 질병의 방제와 함께 옥신 생산성에 의한 작물생육의 촉진으로 수확시기를 조기화 함으로 농가에 수익 증대 효과를 줄 수 있을 것이므로 친환경 농업용 미생물제제로 개발 가능성이 있음을 확인 할 수 있었다.
작물의 생육촉진과 식물 진균병의 생물방제능 효과를 동시에 나타내는 다기능 유기농업용 미생물제제를 개발하고자 경북지역 저병해 경작지 토양으로부터 옥신생산성 균주들을 분리하였다. 그 중 auxin, siderophore, 그리고 항진균성 cellulase를 동시에 생산하는 K11 균주를 선발하였으며, 선발된 K11 균주는 형태 및 생화학적 test 후 Biolog사의 동정시스템(Microlog$^{TM}$ 4.0)과 16s rDNA 상동성을 조사한 결과 Bacillus licheniformis로 동정되었으며, 이를 Bacillus licheniformis K11로 명명하였다. B. licheniformis K11은 고추역병의 원인균인 Phytophthora capsici에 대하여 in vitro 상에서 63%의 길항능을 보였으며, in vivo pot test에서도 뛰어난 방제능을 나타내었다. 또한 B. licheniformis K11의 배양액을 10ml/l로 처리한 녹두발근생검법에서 시판중인 IAA(0.1 mg/l)보다 발근율이 15% 증가됨을 확인 할 수 있었다. 또한 배추, 완두, 녹두를 대상으로 B. licheniformis K11에 의한 식물 생장촉진을 조사한 결과 녹두, 완두 그리고 배추의 뿌리 생육을 각각 160, 150, 130% 증가시켰다. 상기 연구 결과들로 미루어 볼 때 다기능 생물방제균인 B. licheniformis K11을 경작지에 관주하거나 적합한 미생물제제로 제제화한다면 토양전염성 질병의 방제와 함께 옥신 생산성에 의한 작물생육의 촉진으로 수확시기를 조기화 함으로 농가에 수익 증대 효과를 줄 수 있을 것이므로 친환경 농업용 미생물제제로 개발 가능성이 있음을 확인 할 수 있었다.
Auxin-producing antagonistic bacterium K11, which can inhibit Phytophtora capsici, was isolated from a local red-pepper field soil in Gyeong-buk. In order to check for additional PGPR(plant growth promoting rhizobacterium) functions of the strain K11, we confirmed siderophore and cellulase productio...
Auxin-producing antagonistic bacterium K11, which can inhibit Phytophtora capsici, was isolated from a local red-pepper field soil in Gyeong-buk. In order to check for additional PGPR(plant growth promoting rhizobacterium) functions of the strain K11, we confirmed siderophore and cellulase productions by CAS (chrome azurol S) blue agar and CMC plate with congo red, respectively. The strain K11 was identified as Bacillus licheniformis with 98% similarity on 16s rDNA comparison and Biolog analyses. B. licheniformis K11 promoted mung bean adventitious root induction and enhanced root growth of mung bean (160%), pea (150%), and Chinese cabbage (130%), Also, B. licheniformis K11 was able to effectively suppress (63%) P. capsici causing red-pepper blight in the pot in vivo test. Therefore, we could select a triple-functional PGPR which has auxin, siderophore, and cellulase producing ability for effective crops production in organic farming.
Auxin-producing antagonistic bacterium K11, which can inhibit Phytophtora capsici, was isolated from a local red-pepper field soil in Gyeong-buk. In order to check for additional PGPR(plant growth promoting rhizobacterium) functions of the strain K11, we confirmed siderophore and cellulase productions by CAS (chrome azurol S) blue agar and CMC plate with congo red, respectively. The strain K11 was identified as Bacillus licheniformis with 98% similarity on 16s rDNA comparison and Biolog analyses. B. licheniformis K11 promoted mung bean adventitious root induction and enhanced root growth of mung bean (160%), pea (150%), and Chinese cabbage (130%), Also, B. licheniformis K11 was able to effectively suppress (63%) P. capsici causing red-pepper blight in the pot in vivo test. Therefore, we could select a triple-functional PGPR which has auxin, siderophore, and cellulase producing ability for effective crops production in organic farming.
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문제 정의
따라서 본 연구는 친환경농업 시장에 경쟁력 있는 유기농업용 미생물제제를 개발하고자 작물의 생육촉진과 생물방제능 효과를 동시에 나타내는 식물생장촉진물질 생산성 길항미생물을분리, 선발 하였으며, 이들의 식물생장촉진효과와 생물방제 능에 대해 조사하여 유기농업용 미생물제제의 실용화 가능성을 타진하여 보고하는 바이다.
옥신류 생산성 미생물에 의한 완두, 녹두, 배추식물에 생장촉진 조사.
작물의 생육촉진과 식물 진균병의 생물방제능 효과를 동시에 나타내는 다기능 유기농업용 미생물제제를 개발하고자 경북지역 저병해 경작지 토양으로부터 옥신생산성 균주들을 분리하였다. 그 중 auxin, siderophore, 그리고 항진균성 cellulase를 동시에 생산하는 K11 균주를 선발하였으며, 선발된 K11 균주는 형태 및 생화학적 test 후 Biolog사의 동정시스템(Microlog™ 4.
제안 방법
B. licheniformis 기의 auxin 생산성의 재확인을 위하여 L-tryptophan 0.1%이 첨가된 King's B 배지에 선발균주를 접종하고 30℃에서 3일간 진탕배양 후 원심분리하여 상등액을 회수하여 phophoric acid로 상등액의 pH 를 pH 2.8로 조정하고 ethyl actetateS 2회 추출 후 37℃에서 감압 농축하여 이를 조정제 옥신시료로 하여 siliga gel 60 F254 를 이용하여 thin layer chromotography를 수행 후 Ehrlich reagent22'® 분무하여 발색반응을 조사하였다. 이때 전개액으로는 ethyl acetate 와 1-prophanol: ammonia: water(6 :3 :1)를 1 :1로 혼합한 것을 사용하였다.
, Ltd. Korea에 의뢰하여 primer 8F(5'-AGT TGA TCC CTC AG-3, )와 1492R(5'-ACC TTG TIA CGA CTT-3')을 이용, 선발균주의 16s rDNA를 PCR 증폭 후 증폭된 sequencef- NCBI에 등록된 염기서열과 비교하여 상동성을 조사 후 상기실험 결과를 바탕으로 최종 동정하였다. 각 실험에 사용한 배지 조성과 실험 방법은 Bergey's manual of systematic bacteriology21* 을 참조하였다.
Siderophore 생산확인 배지는 CAS(chrome azurol S)이 함유된 CAS blue agar에 각 균주들을 toothpicking 하여 3이에서 4일간 배양 후 orange halo zone의 형성유무를 확인하였으며,12) cellulase 생산 능은 Nutrient agar에 1% carboxylmetyl-cellulose(CMC)를 함유한 CMC agar에 각 선발 균주를 toothpicking 하여 2일간 30℃에서 배양 후 Congo red plate방법20)으로 cellulase의 생산을 확인하였다.
식물방제실험을 실시하였다. 고추가 이식되어 있는 pot 에 고추역병균인 P. capsici를 관주접종하고, 여기에 옥신생산성길항방제균(1。5 CFU/g)을 관주 처리하여 281, 70% 항온항습실에서 키우면서 주기적으로 발병을 확인하였다. 위 방제 실험은 병원성 균만을 처리한 pot와 병원성균과 길항균을 함께 처리한 pot를 비교하여 방제율을 확인하였으며, 방제능의 재현성 확인은 실험구와 대조구 모두 고추가 이식되어 있는 pot 8개씩을 대상으로 5회 반복하여 확인하였다.
3% sodium hypochlorite 용액에 3분간 침지 소독 후 흐르는 수돗물에 씻고, 무균토양에 파종하여 28℃(2, 5000 lux 광원하의 식물배양실에서 5~7일간 배양한 후 제 1본엽이 전개되고 첫 3소엽의 엽아가 다소 부풀어있는 상태에서 균일한 크기의 녹두묘를 골랐다. 그리고 이 녹두 묘로부터 자엽을 제거하고 자엽 밑으로 하배축의 3 cm 아래를 예리한 칼로 절단하여 선발균주의 배양상등액 50 B와 멸균증류수 5 mZ가 채워진 vial에 유묘 1개씩을 vial에 넣고 24시간마다 용액의 수준을 증류수로 일정수준까지 보충하여 위와 동일한 환경조건하에서 연속조명으로 6일간 발근 시킨 후 6일 후에 길이 1 mm 이상의 발근수를 계수하였다.
또한 auxin 생산성이 확인된 균주를 대상으로 Potato dextrose agar(PDA)배지에서 고주역병의 병원균인 Phytophthora capsid 대상으로 발육억제거리 (pairing plate culture) test를 이용하여 저해 능을 조사하였다. 즉 PDA배지에 곰팡이를 6mm정도의 크기로 접종하고 우측 3 cm 떨어진 곳에 균을 획선 접종하여 5일간 배양 후 병원성 진균의 생육 억제거리를 측정하여 옥신생산 능과 고추 역병균 방제능을 동시에 가지는 균주를 선발하였다.
경북지역 저병해 경작지에서 채취한 토양 1 g을 Nutrient agaj를 이용하여 수십 종의 균들을 분리하였다. 분리된 균들을 L-Tryptophan 0.1% 첨가한 King's B(Proteose peptone No. 3 2%, K2HPO4 0.15%, MgSO4 . 7H2O 0.15%, glycerol 1.5%, pH 7.2) broth배지에 접종하고 30℃에서 3일간 배양한 후 10, 000 rpm에서 10분간 원심분리 하여 회수한 배양상등액 1 血 에 Salkowski시 약(35% HC1O4 50 ml에 0.5 M FeCl3 - 6H2O 1ml용해) 2ml를 첨가하고 30분간 반응시킨 후 spectrophotometer®- 이용하여 535 nm에서 측정하여 옥신 생산성을 확인하였다.
선발된 옥신 생산성 다기능 균주들의 siderophore와 cellulase 생산을 확인하기 위해 각각의 선별배지를 사용하였다. Siderophore 생산확인 배지는 CAS(chrome azurol S)이 함유된 CAS blue agar에 각 균주들을 toothpicking 하여 3이에서 4일간 배양 후 orange halo zone의 형성유무를 확인하였으며,12) cellulase 생산 능은 Nutrient agar에 1% carboxylmetyl-cellulose(CMC)를 함유한 CMC agar에 각 선발 균주를 toothpicking 하여 2일간 30℃에서 배양 후 Congo red plate방법20)으로 cellulase의 생산을 확인하였다.
식물생장촉진 호르몬인 auxin 생산성 길항균 주를 분리하기 위하여 정 등의 방법을 기초로 수행하였다. 경북지역 저병해 경작지에서 채취한 토양 1 g을 Nutrient agaj를 이용하여 수십 종의 균들을 분리하였다.
11의 식물 생장 촉진능을 조사하기 위하여 sodium hypochlorite에서 2분간 살균시킨 후 3번 멸균수로 수세하고 25℃<2, 암조건하에서 24시간 동안 물에 침지 시킨 완두, 녹두, 배추의 종자를 시험 종자로 이용하였다. 옥신 생산성 길항균주의 토양에 접종은 일반적으로 농가에서 미생물제제를 사용하는 방법에 의거하여 121℃에서 15분간 멸균된 상토(동부한농 원예범용)에 옥신생산성 길항균주를 IT CFU/g로관주 접종하고 실험 종자를 각각 100개 씩 파종하였다. 이때 대조 구는 옥신생산성 길항균주를 접종하지 않은 상토에 심은 종자로 하였으며, 실험구와 대조구는 동일하게 28℃(2, 12시간 주기로 빛을 조사하여 3주간 생육 시킨 후 수확하여 흙을 물로 씻어 내고 실온에서 완전히 건조 시킨 후 뿌리의 무게를 측정하였다.
옥신 생산성 길항균주의 토양에 접종은 일반적으로 농가에서 미생물제제를 사용하는 방법에 의거하여 121℃에서 15분간 멸균된 상토(동부한농 원예범용)에 옥신생산성 길항균주를 IT CFU/g로관주 접종하고 실험 종자를 각각 100개 씩 파종하였다. 이때 대조 구는 옥신생산성 길항균주를 접종하지 않은 상토에 심은 종자로 하였으며, 실험구와 대조구는 동일하게 28℃(2, 12시간 주기로 빛을 조사하여 3주간 생육 시킨 후 수확하여 흙을 물로 씻어 내고 실온에서 완전히 건조 시킨 후 뿌리의 무게를 측정하였다.
조사하였다. 즉 PDA배지에 곰팡이를 6mm정도의 크기로 접종하고 우측 3 cm 떨어진 곳에 균을 획선 접종하여 5일간 배양 후 병원성 진균의 생육 억제거리를 측정하여 옥신생산 능과 고추 역병균 방제능을 동시에 가지는 균주를 선발하였다.
대상 데이터
B. licheniformis K.11의 식물 생장 촉진능을 조사하기 위하여 sodium hypochlorite에서 2분간 살균시킨 후 3번 멸균수로 수세하고 25℃<2, 암조건하에서 24시간 동안 물에 침지 시킨 완두, 녹두, 배추의 종자를 시험 종자로 이용하였다. 옥신 생산성 길항균주의 토양에 접종은 일반적으로 농가에서 미생물제제를 사용하는 방법에 의거하여 121℃에서 15분간 멸균된 상토(동부한농 원예범용)에 옥신생산성 길항균주를 IT CFU/g로관주 접종하고 실험 종자를 각각 100개 씩 파종하였다.
경북지역 저병해 경작지에서 채취한 토양 1 g을 Nutrient agaj를 이용하여 수십 종의 균들을 분리하였다. 분리된 균들을 L-Tryptophan 0.
이론/모형
Auxin생산균주의 bioassay 는 auxin류의 주요작용 중 하나인 발근 촉진이라는 것을 이용하여 녹두발근생검법에 의해 수행되었다.15) 즉, 녹두품종은 식용으로 이용되는 선화녹두 종자를 0.
Korea에 의뢰하여 primer 8F(5'-AGT TGA TCC CTC AG-3, )와 1492R(5'-ACC TTG TIA CGA CTT-3')을 이용, 선발균주의 16s rDNA를 PCR 증폭 후 증폭된 sequencef- NCBI에 등록된 염기서열과 비교하여 상동성을 조사 후 상기실험 결과를 바탕으로 최종 동정하였다. 각 실험에 사용한 배지 조성과 실험 방법은 Bergey's manual of systematic bacteriology21* 을 참조하였다.
선발균의 분류학적 동정을 위하여 Beley's manual of systematic bacteriology의 세균분류동정 지침서의 실험항목을 기준으로 형태 및 생화학적 조사 후 Biolog사의 동정 시스템(Micorolog™ System 4.0)으로 수행하였다. 또한 Solgent Co.
선발된 옥신생산성 길항균주가 식물병 방제력을 효과적으로 발휘하는지 여부를 검증하기 윤 등의 방법24)으로 고추를 대상 기주식물로 식물방제실험을 실시하였다. 고추가 이식되어 있는 pot 에 고추역병균인 P.
성능/효과
nih.gov)?!: 결과, B. licheniformis BOH 108 (AY947531) 및 B. licheniformis strain HDM02(DQ167473)의 16s rRNA gene에 각각 98%, 99% 상동성을 나타내었다(date not shown). 이러한 결과를 바탕으로 선발된 auxin, siderophore 그리고 cellulase 생산성 다기능 식물성장 촉진 길항균주 K11 은 Bacillus licheniformis Kll으로 최종 동정하였다(Fig.
Auxin, siderophore 그리고 cellulse 생산성을 가지는 다기능 균주 K11 을 동정을 위해 그람염색을 실시하여 형태를 관찰한 결과 그람 양성 간균으로 판명되어 Biolog사의 동정 시스템 (MicrologW 4.0)으로 수행 결과 Bacillus licheniformis에 97%의 상동성을 나타내었다. 또한 증폭된 16s rDNA sequence 를 GenBank database에 등록된 정보를 대상으로 BLAST search (http://www.
0)과 16s rDNA 상동성을 조사한 결과 Bacillus licheniformis 로 동정되었으며, 이를 Bacillus licheniformis Kll로 명명하였다. B. licheniformis Klle 고주역병의 원인균인 Phytophthora capside 대하여 in vitro 상에서 63%의 길항능을 보였으며, in vivo pot test에서도 뛰어난 방제능을 나타내었다. 또한 B.
B. licheniformis Kll의 근권에서 서식이 배추생육에 미치는 영향을 조사한 결과, 무처리구와 비교시 B. licheniformis Kll 을 처리한 배추에서 뿌리의 신장이 증가됨을 확인하였다. 주 등의 미생물 제제를 이용하여 배추의 뿌리 신장이 110% 정도 증가되었다는 보고6)가 있으나, B.
licheniformis Kll이 생산하는 옥신류의 화학적 특성. B. licheniformis Kll의 옥신 생산성을 재확인하기 위하여 B. licheniformis Kll의 배양 상등액을 이용하여 조정제 옥신 시료를 준비하여 시판 idole acetic aicd(IAA)와 함께 siliga gel 상에서 loading하고 이를 Ehrlich reagent끼를 분무하여 발색반응을 조사한 결과, B. licheniformis Kll의 조정제 옥신 및 IAA 에서 purple색을 나타내어 indole 화합물임을 확인할 수 있었다(Fig. 4). 이때 IAA의 Rf 값은 0.
5). B. licheniformis Kll의 접종된 토양에서 생육된 녹두는 육안으로 절간 및 뿌리의 신장 및 발근이 촉진되었음을 분명히 확인할 수 있었으며, B. licheniformis Kll의 식물생장 촉진능은 Vandana 등지의 P. fluorescent 의하여 녹두 뿌리의 길이를 신장에 의해 녹두 생장촉진능이 151.5% 증가되었다는 보고와 비교 시 본 균주의 녹두 생장 촉진능이 상당히 우수하였다.
75인 것과 유사 하였다.”-23)따라서 B. licheniformis Kll의 옥신 생산을 TLC 상에서도 확인할 수 있었으며, B. licheniformis Kll생산하는 옥신은 indole 화합물로 Rf 값이 IAA와 동일하지는 않았지만 큰 차이가 없으므로 IAA 혹은 이와 유사한 물질로 추정되어진다. 차후 HPLC를 통한 분리, 정제하여 구조분석 후 B.
그리고 CAS agar와 CMC agar를 통해 식물병원성 진균의 포자 발아를 억제하는 siderophore와 식물병원성 진균의 세포벽 섬유소를 분해하는 항진균성 cellulase 생산을 확인한 결과 K11 균주에서만 siderophore와 cellulase의 생산을 확인할 수 있었다 (Fig- 2). 그 결과 auxin, siderophore 그리고 길항성 cellulase를 생산하는 다기능 식물생장촉진 미생물 K11 을 최종 선발하였다. P.
그 중 auxin, siderophore, 그리고 항진균성 cellulase를 동시에 생산하는 K11 균주를 선발하였으며, 선발된 K11 균주는 형태 및 생화학적 test 후 Biolog사의 동정시스템(Microlog™ 4.0)과 16s rDNA 상동성을 조사한 결과 Bacillus licheniformis 로 동정되었으며, 이를 Bacillus licheniformis Kll로 명명하였다. B.
licheniformis Kll이 in vitro 실험에서 확인된 항진균성 siderophore와 cellulase 이외에 항진균성 항생물질의 생산을 유추할 수 있는 결과이다. 그러므로 지금까지 확인된 식물 생장촉진 생물방제균인 B. licheniformis Kll을 미생물비료로 경작지에 적용한다면 토양전염성 질병의 방제와 함께 그들이 생산하는 옥신류로 인한 작물의 생육촉진으로 수확시기를 당김으로 농가에 수익 증대 효과를 줄 수 있을 것으로 사료 된다.
1). 그리고 CAS agar와 CMC agar를 통해 식물병원성 진균의 포자 발아를 억제하는 siderophore와 식물병원성 진균의 세포벽 섬유소를 분해하는 항진균성 cellulase 생산을 확인한 결과 K11 균주에서만 siderophore와 cellulase의 생산을 확인할 수 있었다 (Fig- 2). 그 결과 auxin, siderophore 그리고 길항성 cellulase를 생산하는 다기능 식물생장촉진 미생물 K11 을 최종 선발하였다.
licheniformis Kll의 옥신류 생산에 의한 식물생장 촉진능 확인. 녹두, 완두, 배추를 대상으로 B. lichemformis Kll에 의한 식물 생장촉진을 조사한 결과, B. lichemformis Kll 관주접종한 녹두의 생육은 대조구에 비해 약 160%, 완두는 150%, 배추는 130%의 높은 생육 촉진을 나타내었다(Table 3, Fig. 5). B.
1 mg// 로 처리한 것에는 4개로 K11 배양액을 첨가 시 IAA 보다 발근능이 15% 증가하였다. 따라서 선발균주 B. licheniformis Klle in vitro tes뿐만 아니라 bioassayt- 통해서도 뿌리발근을 촉진할 수 있는 auxin을 생산함을 확인할 수 있었다. 이 녹두발근생검법은 식물의 꺾꽂이 방법을 이용한 실험으로 invivo상에서 auxin류의 특성인 식물의 세포신장과 발아를 확인하는데 유용하게 이용될 것이다.
licheniformis Klle 고주역병의 원인균인 Phytophthora capside 대하여 in vitro 상에서 63%의 길항능을 보였으며, in vivo pot test에서도 뛰어난 방제능을 나타내었다. 또한 B. licheniformis Kll의 배양액을 10mlZ로 처리한 녹두발근생검법에서 시판중인 IAA(0.1 mgT)보다 발근율이 15% 증가됨을 확인 할 수 있었다. 또한 배추, 완두, 녹두를 대상으로 B.
1 mgT)보다 발근율이 15% 증가됨을 확인 할 수 있었다. 또한 배추, 완두, 녹두를 대상으로 B. licheniformis Kll에 의한 식물 생장촉진을 조사한 결과 녹두, 완두 그리고 배추의 뿌리 생육을 각각 160, 150, 130% 증가시켰다. 상기 연구 결과들로 미루어 볼 때 다기능 생물방제균인 B.
licheniformis Kll에 의한 식물 생장촉진을 조사한 결과 녹두, 완두 그리고 배추의 뿌리 생육을 각각 160, 150, 130% 증가시켰다. 상기 연구 결과들로 미루어 볼 때 다기능 생물방제균인 B. licheniformis Kll을 경작지에 관주하거나 적합한 미생물제제로 제제화한다면 토양전염성 질병의 방제와 함께 옥신 생산성에 의한 작물생육의 촉진으로 수확시기를 조기화 함으로 농가에 수익 증대 효과를 줄 수 있을 것이므로 친환경 농업용 미생물제제로 개발 가능성이 있음을 확인할 수 있었다.
Auxin 생산 균주의 생물학적 검정. 선발균주 B. licheniformis Kll을 녹두발근생검법을 실시한 결과(Table 2), B. licheniformis Kll의 배양액을 10m//Z로 처리한 녹두에서는 평균 발근 수는 5.5개 였으며, 시제품 IAA를 0.1 mg// 로 처리한 것에는 4개로 K11 배양액을 첨가 시 IAA 보다 발근능이 15% 증가하였다. 따라서 선발균주 B.
옥신 생산성 길항균주 B. licheniformis Kll을 대상으로 고추 역병에 대한 방제실험을 pot상에서 한 결과, 63%의 높은방제능을 나타내었고(Fig. 6), 이는 정 등12)의 Bacillus sp에서 나타난 48%2] 저해능 보다 1.3배 정도 높게 나타났다. 이는 B.
capsici를 관주접종하고, 여기에 옥신생산성길항방제균(1。5 CFU/g)을 관주 처리하여 281, 70% 항온항습실에서 키우면서 주기적으로 발병을 확인하였다. 위 방제 실험은 병원성 균만을 처리한 pot와 병원성균과 길항균을 함께 처리한 pot를 비교하여 방제율을 확인하였으며, 방제능의 재현성 확인은 실험구와 대조구 모두 고추가 이식되어 있는 pot 8개씩을 대상으로 5회 반복하여 확인하였다.
간접적으로 확인할 수 있었다(Table 1). 이들 균주를 대상으로 P. capsicie 대한 길항능을 조사하기 위해 발육억제 거리 측정방법을 수행한 결과, 옥신생산성이 높은 두 균주 K11 은 75%, KH1 은 48%의 저해율을 나타내었다(Table 1, Fig. 1). 그리고 CAS agar와 CMC agar를 통해 식물병원성 진균의 포자 발아를 억제하는 siderophore와 식물병원성 진균의 세포벽 섬유소를 분해하는 항진균성 cellulase 생산을 확인한 결과 K11 균주에서만 siderophore와 cellulase의 생산을 확인할 수 있었다 (Fig- 2).
licheniformis strain HDM02(DQ167473)의 16s rRNA gene에 각각 98%, 99% 상동성을 나타내었다(date not shown). 이러한 결과를 바탕으로 선발된 auxin, siderophore 그리고 cellulase 생산성 다기능 식물성장 촉진 길항균주 K11 은 Bacillus licheniformis Kll으로 최종 동정하였다(Fig. 3). Bacillus sp는 불리한 환경에서 endospore를 형성함으로 제형 화에 장점을 가지고 있는 것으로 알려져 있다.
토양에서 분리된 균주들들 각각 배양 후 원심분리한 상등액을 이용하여 Salkowski test23)로 옥신 생산성을 검증한 결과 K4, K9, Kll, KH1 균주에서 높은 옥신생산을 간접적으로 확인할 수 있었다(Table 1). 이들 균주를 대상으로 P.
후속연구
capsici의 경우 세포벽이 celluloses. 구성되어져 있으며 K11 이 생산하는 cellulase의 작용으로 세포벽의 용균작용이 일어날 수 있다고 사료되며, 차후 추가적인 실험을 통해서 확인하고자"한다. 또한 강력한 길항기작으로 보아 siderophore 이외에 항생물질과 같은 길항물질을 생산하는 것으로 예상되어 계속 실험 중이다.
Bacillus sp는 불리한 환경에서 endospore를 형성함으로 제형 화에 장점을 가지고 있는 것으로 알려져 있다.16) 본 옥신생산성길항 균주도 Bacillus sp의 특성인 endospore를 이용하여 장기간 보관이 가능한 액상 및 고형 제제 등 여러 가지로 제제화에 쉽게 응용될 수 있을 것으로 사료된다.
licheniformis Klle in vitro tes뿐만 아니라 bioassayt- 통해서도 뿌리발근을 촉진할 수 있는 auxin을 생산함을 확인할 수 있었다. 이 녹두발근생검법은 식물의 꺾꽂이 방법을 이용한 실험으로 invivo상에서 auxin류의 특성인 식물의 세포신장과 발아를 확인하는데 유용하게 이용될 것이다.
licheniformis Kll생산하는 옥신은 indole 화합물로 Rf 값이 IAA와 동일하지는 않았지만 큰 차이가 없으므로 IAA 혹은 이와 유사한 물질로 추정되어진다. 차후 HPLC를 통한 분리, 정제하여 구조분석 후 B. licheniformis Kll가 생산하는 옥신류의 구조를 확인할 것이다. B.
참고문헌 (24)
Pozom, M. J., Azcon-Aguilar, C., Dumas-Gaudot, C. and Barea, J. M. (1999) 1,3- ${\beta}$ -Glucanase activities in tomato roots inoculated with arbuscular mycorrhizal fungi and Photophthora parasitica and their possible involvement in bioprotection. Plant Sci. 141, 149-157
Vandana, K. and Goel, R. (2004) improved plant growth from seed bacterization using siderophore overproducing cold resistant mutant of Pseudomonas fluorescens. J. Micro. Biotech. 14, 653-657
Vanpinder, S. and Deverall, B. J. (1984) Bacillus subtilis as a control agent against fungal pathogens of citus fruit. Trans. Br. Mycol. Soc. 83, 487-490
Jung, H. K., Ryoo, J. C. and Kim, S. D. (2005) A multimicrobial biofungicide for the biological control against several Important plant pathogenic fungi. J. Korean Soc. Appl. Biol. Chem. 48, 40-47
Kim, K. S., Kim, Y. W. and Choi, Y. S. (1995) Studies on the various utilization of microbial formulation for the production of vegetable crops. J. Korean Soc. Soil. Fert. 28, 191-205
Joo, G. J., Kim, Y. M., Woo, C. J., Lee, O. S., Kim, J. W., So, J. H., Kwak, Y. Y., Lee, J. J., Kim, J. H. and Rhee, I. K. (2005) Development of microbial inoculant using by-product of oriental herbal medicine. J. Korean Soc. Appl. Biol. Chem. 48, 201-206
Ates, S., Ozenir, S. and Gokdere, M. (2006) Effect of silicone oil on gibberellic acid production by Gibberella fujikuroi and Aspergillus niger. Appl. Biochem. Microbiol. 42, 500-501
Zimmer, W., Wesche, M. and Timmermans, L. (1998) Identification and isolation of indole-3-pyruvate decarboxylase gene from Azopirillum brasilense sp7, Sequencing and functional anylsis of gene locus gene. Curr. Mcibiol. 36, 327-331
Joshi, K. K., Kumar, V., Dubey, R. C., Masheshwari, D. K., Bajpai, V. K. and Kang, S. C. (2006) Effect of chemical fertilizer-adaptive variants, Pseudomonas aeruginosa GRC2 and Azobacter chroococcum AC1, on Macrophominia phaseolina causing charcoal rot of Brassica juncea. Korean J. of Envir. Agri. 25, 228-235
Jung, H. K., Kim, J. R., Woo, S. M. and Kim, S. D. (2006) An auxin producing plant growth promoting rhizobacterium Bacillus subtilis AH18 which has siderophore-producing biocontrol activity. Korean J. Microbiol. Biotechnol. 34, 94- 100
Lee, K. H., Madhaiyan, M., Kim, C. W., Lee, H. S., Poonguzhali, S. and Sa, T. M. (2004) Isolation and characterization of the IAA producing methylotrophic bacteria from phyllosphere of rice cultivars. Korean J. Soil Sci. Fert. 37, 235-244
Ryu, J. H., Madhaiyan, M., Poonguzhali, S., Yim, W. J., Indiragandhi, P., Kim, K. A., Anandham, R., Yun, J. C., Kim, K. H., Sa, T. M. 2006. Plant growth substances produced by Methylobacterium spp. and their effect on Tomato (Lycopersicon esculentum L.) and red pepper (Capsium annuum L.) growth. J. Microbiol. Biotechnol. 16, 1622-1628
Lebuhn, M., Heulin, T. and Hartman, A. (1997) Production of auxin and other indolic and phenolic compuonds by Paenibacillus polymyxa strains proposed isolated form differenr proximity of plant root. FEMS Microbio. Ecol. 22, 325-334
McSpadden-Gardener, B. B. (2004) The nature and application of biocontrol microbes, Bacillus sp. Ecology of Bacillus and Paenibacillus spp. in agricultural system. Phytopathology 94, 1252-1258
Tarun, K., Bajpai, V. K., Maheswari, D. K. and Kang, S. C. (2005) Plant growth promotion and suppression of root disease complex due to Medioidogyne incognita and Fusarium oxsoirum by Pseudomonads flouorescent in tomato. Agric. Chem. Biotechnol. 48, 79-83
Lee, S. E., Yi, H. S., Park, S. H. and Kim, S. Y. (2005) Characterization of a rhizobacterium promoting early growth in Maize. Korean J. micorobiol. Biotechnol. 33, 70-73
Ryu, C. M., Kim, J. W., Choi, O. H., Park, S. Y., Park, S. H. and Park., C. S. (2005) Nature of a root-associated Paenibacillus polymyxa from field-grown winter barely in Korea. J. Microbiol. Biotechnol. 15, 984-991
Teather, R. and Wood, P. J. (1982) Use of congo redpolysaccharide interactions in enumeration and characterization of cellulolytic bacteria from the bovine rumen. Appl. Environ. Microbiol. 43, 777-780
Holt, J. G., Krieg, N. R., Sneath, H. A., Staley, J. T. and Williams, S. T. (1994) Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 9th, Williams & Wilkins, USA
Lim, S. U., Lee, T. G. and Sa, T. M. (1995) Isolation and physiological characteristics of auxin-producing soil bacteria. J. Korean Soc. Soil. Sci. Fert. 28, 75-82
Kwon, D. H., Choi, J. H., Jung, H. K., Lim, J. H., Joo, G. J. and Kim, S. D. (2004) Selection and identification of auxinproducing plant growth promoting rhizobacteria having Phytopathogen antagonistic activity. J. Korean Soc. Appl. Bio. Chem. 47, 17-21
Yun, G. H., Lee E. T. and Kim, S. D. (2001) Identification and antagonism of Chryseomonas luteola 5042 against phytophthora capsici. Korean J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 29, 186-193
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