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문제 정의
- 분석하여 각 제조 과정에서의 변화를 조사하였다. 또한 덖음차의 저장 보관 중 catechin 및 alkaloid류의 함량 변화를 조사하여 소비자들에게 수공 제다법에 의한 덖음차의 합리적인 저장 방법을 위한 기초 자료로서 제공하고자 하였다.
제안 방법
- linear gradient 법을 사용하였다. 80분에서 85분까지는 26:74(Isocratic법)으로, 85.1 분부터 95분까지는 50:50 ((Isocratic법)으로 95.1 분부터 마지막까지는 7:93(Isocratic법) 으로 용출시켰다.
- 고속 액체 크로마토그래피는 농도 구배(gradient) 장치가 부착된 HPLC(HI -TACHI 655A-II)였으며, columne Inertsil ODS-3v(5.0 jum, 4.0 乂 250 mm)을 사용했고, pumps는 Hitachi L-6000, solvent는 Acetonitrile / 20 mM KH2PO4 였으며, detecter는 Shimadzu UV-VIS SPD-lOAvp를 사용하였으며, injector는 Hitachi D-2500, column temperature는 30℃(Shimadzu Column oven CTO-lOvp), flow rate는 1 mL/min, injection volumee IOjuL, detection wavelength는 270 nm(Shimadzu SPD-OAvp) 를 이용하여 분석하였다.
- Rt 값과의 비교를 통하여 동정하였다. 또한, 시료 용액에 일정량의 표준품 용액을 넣어 동시에 HPLC에서 분석하고 검출된 각각의 peak 모양과 Rt 값에서 행하였다(Spiked).
- 본 연구는 일상의 기호 음료이며 기능성 식품으로 각광을 받고 있는 녹차 중 수공 덖음 제다기법으로 제조한 보성 녹차의 제조 공정 및 저장 보관 중의 catechin 및 alkaloids의 함량 변화를 파악하고자 HPLC와 UV-VIS Spectrophotometer를 이용하여 실험하였다. 그 결과는 다음과 같다.
- 이에 본 연구는 차나무에서 차잎을 적출한 후수공 덖음법으로 녹차를 제조하고, 각 제조 공정(8단계) 중의 차잎을 채취하여 차잎에 함유된 catechin 및 alkaloid 류를추출 . 분석하여 각 제조 과정에서의 변화를 조사하였다. 또한 덖음차의 저장 보관 중 catechin 및 alkaloid류의 함량 변화를 조사하여 소비자들에게 수공 제다법에 의한 덖음차의 합리적인 저장 방법을 위한 기초 자료로서 제공하고자 하였다.
- 시료중의 catechin과 alkaloid 류의 동정은 표준품 10종류를 개별적으로 HPLC에서 분석하여 얻어진 Retention time(Rt) 값과 시료를 표준품과 같은 조건에서 분석하여 얻어진 각 peak 의 Rt 값과의 비교를 통하여 동정하였다. 또한, 시료 용액에 일정량의 표준품 용액을 넣어 동시에 HPLC에서 분석하고 검출된 각각의 peak 모양과 Rt 값에서 행하였다(Spiked).
- 실정이다. 이에 본 연구는 차나무에서 차잎을 적출한 후수공 덖음법으로 녹차를 제조하고, 각 제조 공정(8단계) 중의 차잎을 채취하여 차잎에 함유된 catechin 및 alkaloid 류를추출 . 분석하여 각 제조 과정에서의 변화를 조사하였다.
- 표준품인 Theobromine(TB), Caffeine(CAF), Theophylline (TP), (-)-Epig-allocatechin(EGC), (-)-Catechin(C), (+)-Epica-techin(EC), (-)-Epigallocatechin-3-gallate(EGCG), (-)-Gallocatechin gallate(GCG), (-)-Epicatechin gallate(ECG), (-)-Catechin gallate(CG)의 10종류 화합물을 정확하게 칭 량하여 50% 의 acetonitrile 2 mL에 용해시켜 표준 시료로 하였다.
대상 데이터
- 2005년 4월 23일 전남 보성 지구의 녹차밭에서 차잎을 따고, 바로 수제 덖음법 제조업자에 의뢰하여 덖음차를 제조 공급 받았다. 8단계 제조 공정의 각 차잎을 채취하여 냉 암소에 보관하여 본 대학으로 가져 왔으며, 바로 실험에 이용했다.
- 받았다. 8단계 제조 공정의 각 차잎을 채취하여 냉 암소에 보관하여 본 대학으로 가져 왔으며, 바로 실험에 이용했다. 또한, 저장 보관 중의 녹차에 대한 연구는 수제 덖음법을 이용하여 제조한 보성산 녹차를 일반적인 냉장 온도 5℃, 실은 25 ℃의 암소에 보관하여 시료로 사용하였다.
- 성분 분석에 사용된 표준품 theobromine(THB) 및 caffeine(CAF)은 Sigma사(St. Lous, mo, USA)의 제품을 구입하였고, theophylline(THP) (-)-epigallocatechin(EGC), (-)-catechin(C), (+)-epicatechin(EC), (—)-epigallocatechin-3-gallate(EGCG), (-)-gallocatechin gallate(GCG), (-)-epicatechin gallate(ECG), (-)-catechin gallate(CG)의 8종은 미국 농무성의 미생물연구소의 Dr. M. Friedman(USDA, Albany, USA)에게서 증여 받은 것을 사용하였다. 그 밖의 시약은 HPLC용 특급 시약을 사용하였다.
데이터처리
- 모든 실험 결과는 3회 반복 실험하였으며, 모든 결과는 SPSS WIN 12.0 program을 이용하여 평균과 표준 편차를 구하고 ANOVA-test 후, Duncan's multiple range test를 실시하여 유의적인 차이를 검증하였다.
이론/모형
- Goto et a/(1996)의 방법을 수정하여 Table 2 에서 나타낸 바와 같이 처음 6분간은 acetonitrile과 20 mM KH2PO4를 7 : 93 비율로 일정하게 유지하여 용출(Isocratic법)시키다가 그 이후 20분부터 50분까지 는 acetonitrile을 조금씩 증가시켜 용출시키는 linear gradient 법을 사용하였다. 80분에서 85분까지는 26:74(Isocratic법)으로, 85.
- 실험에 사용한 차 추출물은 Frideman 등(2005)의 방법에 따라 에탄올법으로 추출하였다. 에탄올 추출법은 시료 1유을 환류 응축기(reflux condenser)와 연결시킨 250 mL flask에 넣고 80% 에탄올 용액(ethylalcohol: water, 80:20, v/v) 50 mL를 가한 다음 60 ℃ 의 water bath에서 15분간 가온 추출하였다.
- 차 잎에 함유된 catechin과 alkaloid류의 분석은 차잎으로부터 80%, 에틸 알코올로 추출하고 용리액의 농도를 단계적으로 변화시킨 고속 액체 HPLC 법에 의해 분석하였다.
성능/효과
- W/g으로 환산해서 조사한 결과, catechine EGCG가 가장 많았으며, 그 다음으로 ECG, EGC 순이었으며, alkaloid류는 caffeine0] 가장 많았고, theobromine과 theophylline는 극히 미량 검출되었다. Catechin류의 저장 중의 변화를 조사해 본 결과, 5℃, 25℃ 저장 중의 녹차에서는 EGCG, ECG, CAF의 감소가 많았고, 1년간 저장에서 20~30%나 감소하였으며(p<0.05, /?<0.01, 刀<0.001), 저장 온도에 따른 catechin 및 alkaloid류의 양적 차이는 거의 보이지 않았다. 즉, 차잎에 포함되어 있는 catechin 및 alkaloid류의 변화는 모든 은도에서 저장기간에 따라 감소하는 경향을 나타냈으나, 저장온도에 따른 차이는 거의 보이지 않았다.
- 001). Catechin의 함량은 생잎일 때는 6.58 mg/g이었으나 건조 후에는 증가하는 경향을 보였으며, GCG는 생잎일 때는 6.43 mg/g이었으나 건조 후에는 3.61 mg/g으로 급격하게 감소하였다. 또한 THB와 THP 역시 생잎일 때보다 건조한 후에 함량이 증가하는 것을 알 수 있었다.
- 001). Catechin의 함량은 생잎일 때는 6.58 mg/g이었으나 건조 후에는 증가하는 경향을 보였으며, GCG는 생잎일 때는 6.43 mg/g이었으나 건조 후에는 3.61 mg/g으로 급격하게 감소하였다. 또한 THB와 THP 역시 생잎일 때보다 건조한 후에 함량이 증가하는 것을 알 수 있었다.
- 61 mg/g으로 급격하게 감소하였다. 또한 THB와 THP 역시 생잎일 때보다 건조한 후에 함량이 증가하는 것을 알 수 있었다.
- 또한, 저장 중 녹차 잎의 catechin과 alkaloid류의 함량 변화를 조사해 본 결과, 5℃, 25℃ 저장 중의 녹차 잎 모두에서 EGCG, ECG, CAF의 감소가 많았고, 1년간 저장 시에는 20 ~30%나 감소하였으며, 저장 온도에 따른 catechin 및 alkaloid류의 양적 차이는 거의 나타나지 않아 저장 온도에 따른 catechin과 alkaloid류의 함량 변화는 거의 없는 것을 알 수 있었다.
- 1 분)에 이어서 theophylline, (-)-epigallocatechin, caffeine, catechin, (+)-epicatechin, (-)-epigallo-catechin gallate, (-)-gallocatechin gallate, (-)-epicatechin gallate, (-)-catechin gallate 순으로 용출되었다. 본 실험 방법을 이용함으로써 10종류의 화합물이 Rt 40분 정도에 분리가 완료됨을 알 수 있다.
- 제조 당일의 차잎을 D.W/g으로 환산해서 조사한 결과, catechine EGCG가 가장 많았으며, 그 다음으로 ECG, EGC 순이었으며, alkaloid류는 caffeine0] 가장 많았고, theobromine과 theophylline는 극히 미량 검출되었다. Catechin류의 저장 중의 변화를 조사해 본 결과, 5℃, 25℃ 저장 중의 녹차에서는 EGCG, ECG, CAF의 감소가 많았고, 1년간 저장에서 20~30%나 감소하였으며(p<0.
- 001), 저장 온도에 따른 catechin 및 alkaloid류의 양적 차이는 거의 보이지 않았다. 즉, 차잎에 포함되어 있는 catechin 및 alkaloid류의 변화는 모든 은도에서 저장기간에 따라 감소하는 경향을 나타냈으나, 저장온도에 따른 차이는 거의 보이지 않았다.
- 함량 변화를 조사한 결과이다. 차나무로부터 채취한 신선한 차잎을 D.W/g으로 환산해서 조사한 결과, EGCG7]- 50.44 mg/g으로 가장 많았으며 다음이 ECG 28.41 mg/g, CAF 25.13 mg/g, CG 1.26 mg/g, THB 1.24 mg/g, THP 0.10 mg/g으로 소량 함유되어 있음을 알 수 있다.
- 한편, 회수율은 표준 시약 10 종류 모두가 80% 이상의 회수율을 보였으며 EGC의 회수율이 84.2%로 가장 적고 가장 많은 회수율을 보인 것은 파로 114.9%를 나타내었다. 이는 지금까지의 차류에 관하여 보고(Goto et al 1996, Wang et al 2003)된 회수율과 비교하여 보아도 높은 값이 산출되었음을 알 수 있다.
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