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문제 정의
- 음나무의 잎은 가시가 있는 음나무와 가시가 없는 음나무(이하 민가 시음 나무)의 성분 함량을 비교하고자 하였다. 또, 시판되는 생약인 한국산 해동피 및 중국산 해동피의 성분 함량을 비교함으로써 음나무 기능성 소재화 가능성을 타진하는 한편 최적의 수확시기 및 산지별 음나무 유용성분의 함량을 제시하여 산업화시의 기본적인 데이터로 활용하고자 하였다.
- 또, Kalopanaxsaponin에 관하여는 전보7) 에서 이미 TLC densitometry로 정량한 바 있으나, 본보에서는 HPLC를 이용하여 사포닌 화합물은 월별로 잎을 채집하여 조사포닌을 제조한 후 사포닌 변화량을 관찰하여 월별사포닌 함량변화의 추이를 확립할 수 있었다. 음나무의 잎은 가시가 있는 음나무와 가시가 없는 음나무(이하 민가 시음 나무)의 성분 함량을 비교하고자 하였다. 또, 시판되는 생약인 한국산 해동피 및 중국산 해동피의 성분 함량을 비교함으로써 음나무 기능성 소재화 가능성을 타진하는 한편 최적의 수확시기 및 산지별 음나무 유용성분의 함량을 제시하여 산업화시의 기본적인 데이터로 활용하고자 하였다.
제안 방법
- 하였다.8,9)검 량선 작성을 위해 100, 250, 500, 1000 μg/ml의 농도를 제조하여 20 μ1를 injection하여 아래의 사포닌 분석의 조건으로 HPLC한 다음 피크 면적을 구하였다. 각 사포닌들의 회귀방정식과 구하고 R2 값을 구하였다(Table I).
- 하고 있기 때문에 성숙한 잎은 식용이나 약용되지 않았AH토. kalopanaxsaponin B, H, K(이상 hederagenin bisdesmoside) 등의 표준물질과 페놀성 화합물로서 liriodendrin, syringin, chlorogenic acid, caffeic acid, astragalin, quercetin 등의 표준물질(Fig. 1)을 이용하여 HPLC 분석으로 정량하고자 하였다. 또, Kalopanaxsaponin에 관하여는 전보7) 에서 이미 TLC densitometry로 정량한 바 있으나, 본보에서는 HPLC를 이용하여 사포닌 화합물은 월별로 잎을 채집하여 조사포닌을 제조한 후 사포닌 변화량을 관찰하여 월별사포닌 함량변화의 추이를 확립할 수 있었다.
- 1)을 이용하여 HPLC 분석으로 정량하고자 하였다. 또, Kalopanaxsaponin에 관하여는 전보7) 에서 이미 TLC densitometry로 정량한 바 있으나, 본보에서는 HPLC를 이용하여 사포닌 화합물은 월별로 잎을 채집하여 조사포닌을 제조한 후 사포닌 변화량을 관찰하여 월별사포닌 함량변화의 추이를 확립할 수 있었다. 음나무의 잎은 가시가 있는 음나무와 가시가 없는 음나무(이하 민가 시음 나무)의 성분 함량을 비교하고자 하였다.
- 사포닌 분석 - 식물재료에서 추출되어 제조된 조사포닌을 80% MeOH에 녹인 다음 이를 0.50 μm syringe filter로 여과하였고 HPLC 분석을 위한 시료로 사용하였다. 사포닌분석을 위한 UV-vis detector의 파장은 203 nm이 었다.
- 농축한 가뇽성 분획을 70 g의 활성탄으로 충전된 컬럼을 통과시켰다. 용출액를 농축한 후 Diaion HP-20(320 g, 5x70 cm)에서 증류수 2.0 1.로 전개하여 당분획을 제거한 다음 2.01의 MeOH로 용출하여 농축하였으며 이를 조사포닌 분획으로 하였다.
- 00 L에 넣고 환류 하에 5시간씩 3회 추출하였다. 이를 여과한 다음 진공 농축기를 사용하여 농축하고 동결건조한 다음 이를 정확히 평량하였다.
- 조사포닌 제조 - 조사포닌을 제조하기 위하여 각 메탄올 추출물들을 증류수 500 ml에 현탁시 키 고 이를 800 ml hexane으로 분배 추출하는 과정을 3회 반복하였다. 남은 물층에 800 ether로 다시 3회 반복하여 분배추출하여 ether 분획을 버렸다.
- 흐름속도는 1 ml/min이었으며 30분간 running하였다. 표준 화합물의 검량선 작성을 위해 4가지 표준 화합물을 80% methanol에 녹여서 농도별 피크 면적을 얻었다.
- 표준액의 제조 및 검량선 작성 - 사포닌 함량을 측정하기 위하여 이미 전보에서 분리된 kalopanaxsaponin B, H, K 를 80% MeOH에 녹여 검량선 작성을 위한 표준액으로 하였다.8,9)검 량선 작성을 위해 100, 250, 500, 1000 μg/ml의 농도를 제조하여 20 μ1를 injection하여 아래의 사포닌 분석의 조건으로 HPLC한 다음 피크 면적을 구하였다.
- 각 사포닌들의 회귀방정식과 구하고 R2 값을 구하였다(Table I). 한편, 페놀성 화합물의 회귀방정식을 작성하기 위하여 표준물질 syringin, liriodendrin, chlorogenic acid, caffeic acid, astragalin 및 quercetin의 용매와 농도를 사포닌의 경우와 같이 하고 아래의 페놀성 화합물의 분석조건으로 HPLC 측정을 수행하여 검량선의 회귀방정식을 구하고 R2 값을 구하였다(Table II).
대상 데이터
- Sigma사(USA) 제품을 사용하였다. 페놀성 화합물을 정량하기 위하여 사포닌 분석시와 동일한 HPLC system 및 column을 사용하였匸" HPLC detector의 파장은 220 nm를사용하였다. 이동상의 용매는 deionized water with 0.
- 0분에 A-B(94:6)이었으며 0-50분에 A-B(65:35)이었으며 50-51 분에 A-B(94:6)이었고 51-60 분에 A-B(94:6)의 혼합 용매를 사용하였다. 6개의 표준화합물을 80% MeOH에 녹여서 검량선 작성을 위한 시료로 사용하였다.
- 7-9에 각각 나타내었다. KPT 는 5월과 6월에 각각 채집한 KPT1, KPT2, KPN1, KPN2의 MeOH 주줄물을 이용하였고 해동피는 시판중인 해동피 (KPS) 를 사용하였다. Fig.
- 가시가 없는 음나무(민가시음나무) 잎(KPN)도 5월 20일부터 채집을 시작하여 같은 방법으로 1달마다 채집을 하여 역시 9월 20일 채집을 끝냈다. 가시가 없는 음나무 잎 식물재료를 5 월, 6월, 7월, 8월, 9월에 채집한 것을 각각 KPN1, KPN2, KPN3, KPN4, KPN5라 하였다. 채집된 잎들은 음건하여 파쇄한 후 실험에 사용하였다.
- 가시가 있는 음나무로부터 최초 채집일 5월 20일부터 월별 채집을 하여 9월 20일 채집을 끝냈다. 가시가 있는 음나무 잎 (KPT) 식물재료를 5월, 6월, 7월, 8월, 9월에 채집한 것을 각각 KPT1, KPT2, KPT3, KPT4, KPT5라 하였다. 가시가 없는 음나무(민가시음나무) 잎(KPN)도 5월 20일부터 채집을 시작하여 같은 방법으로 1달마다 채집을 하여 역시 9월 20일 채집을 끝냈다.
- 가시가 있는 음나무로부터 최초 채집일 5월 20일부터 월별 채집을 하여 9월 20일 채집을 끝냈다. 가시가 있는 음나무 잎 (KPT) 식물재료를 5월, 6월, 7월, 8월, 9월에 채집한 것을 각각 KPT1, KPT2, KPT3, KPT4, KPT5라 하였다.
- 기기 및 시약 - 사용된 HPLC systeme varian Prostar 210 solvent delivery module과 Prostar 325 UV-Vis detector 및 20 μL sample loop으로 구성된 장치 였다. 분석용 컬럼으로 Shiseido Capcell Pak Cl8(5250 mmx 44.
- 및 20 μL sample loop으로 구성된 장치 였다. 분석용 컬럼으로 Shiseido Capcell Pak Cl8(5250 mmx 44.6 mm id)을 사용하였다. 이동상으로 사용된 용매는 HPLC 급이었다.
- 실험재료 - 본 연구에 사용된 음나무의 잎은 한국의 강원도 정선군에서 재배 중인 것을 채집하여 사용하였다. 가시가 있는 음나무로부터 최초 채집일 5월 20일부터 월별 채집을 하여 9월 20일 채집을 끝냈다.
- 음나무의 페놀성 화합물의 정량을 위하여 syringin,liriodendrin, chlorogenic acid, caffeic acid, quercetin, astragalin 등의 화합물을 사용하였다. 이 중 syringin과 liriodendrine 오갈피나무과에서 얻어져서 각각 eleuthroside B, eleutheroside B로 각각 불려지고 있고10)진통소염 효과(2) 를 비롯해서 많은 생리활성이 알려졌으므로 해동피의 활성 물질로 생각되고 있다.
- 사포닌분석을 위한 UV-vis detector의 파장은 203 nm이 었다. 이동상으로 탈이온화된 H2O(solvent A)와 acetonitrile(solvent B) 의 73:27의 비율을 사용하였다. 흐름속도는 1 ml/min이었으며 30분간 running하였다.
- 페놀성 화합물의 분석 - 표준물질로서 페놀성 화합물 중 syringin과 liriodendrine 이미 저자 등이 음나무에서 분리한 화합물을 사용하였으며 astragalin, quercetin 및 chlorogenic acid는 Sigma사(USA) 제품을 사용하였다. 페놀성 화합물을 정량하기 위하여 사포닌 분석시와 동일한 HPLC system 및 column을 사용하였匸" HPLC detector의 파장은 220 nm를사용하였다.
성능/효과
- 09 mg/g으로 나타났다. Flavonoid 화합물인 astragalin 과 quercetin의 함량을 관찰하였을 때 배당체 astragaliee 비교적 높은 함량으로 나타나고 비당체 quercetine 매우 낮은 농도로 나타났다. 한편 껍질 부위는 잎에 비해 flavonoid 의 함량이 낮았다(Fig.
- 가장 더운 8월에 가장 사포닌 총 함량이 높았던 반면 9월이 되면 사포닌이 다시 감소하였다. 또한 kalopanaxsaponin B가 가장 많이 함유된 사포닌이었으며 두 번째로 많이 함유된 사포닌은 kalopanaxsaponin H이었다. 이것은 사포닌이 주로 생리활성적으로 불활성형인 bisdesmoside로 함유되어 존재한다는 것을 의미한다.
- KPN들도 불활성형인 bisdesmoside인 kalopanaxsaponinB와 H가 주로 함유되어 있었다. 이상과 같은 사시은 사포닌 함량이 높은 8월에서 가장 높은 사포닌 함량을 보여주고 있으므로 kalopnaxsaponin의 이용을 위해서는 8월의 민가시개두릅(총사포닌 50.62mg/g)이 가장 적합함을 알 수 있다. 그리고, 식용으로 하는 개두릅의 새순은 낮은 사포닌 함량을 보여주고 있으므로 식용을 위해 낮은 사포닌을 함유한 잎을 선택하였음을 보여준다.
- 이상의 실험결과에 의하면 껍질에는 잎에 비해 사포닌이 적게 함유되어 있고 liriodendriiM syringin이 높은 함량으로 존재하여 이들 두 화합물이 해동피를 대변하는 중요한 활성 물질로 평가되었다. 이와 반면, 식용으로 하는 산나물인 개두릅 새순은 chlorogenic acid를 높은 함유량(30.
- 9). 이와 같이 chlorogenic acid를 비롯한 페놀성 화합물들은 새순일 때 함량이 높다가 시간이 지남에 따라 그 함량이 급감함을 알 수 있었다.
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