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문제 정의
- 이에 저자는 拱辰丹의 성분을 분석하여 아미노산, 아미노산 유도체, 무기질 등에서 유용한 성분을 확인할 수 있었고, 이러한 성분을 토대로 항산화 작용을 규명하기 위하여 다양한 추출물을 통한 효소 학적 측면의 생리활성 효과를 분석하여 유의성 있는 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 이에 저자는 拱辰丹의 성분을 평가하기 위하여 수분, 탄수화물, 조지방, 조단백질, 조회분 등의 일반성분의 함량과 환원당, 수용성 단백질, 아미노산 그리고 무기질 등의 영양성분 함량을 분석하였다. 또한 항산화성을 규명하기 위하여 물, 에탄올 그리고 클로로포름을 용매로 拱辰丹의 수용성 및 중성 그리고 지용성 성분을 추출하여 polyphenol 함량, 전자공여능, SOD 유사활성, 아질산염 소거능, xanthine oxidase 저해 활성 그리고 tyrosinase 저해 활성을 분석하였다.
제안 방법
- 4mL를 가하여 같은 방법으로 행하였다. pH 1.2에서 각 추출물의 농도에 따른 아질산염 분해작용은 ImM의 NaNO2용액 ImL에 각 농도 (0.1, 0.3, 0.5, 1.0mg/mL)의 拱辰丹 추출물을 첨가하고, 여기에 0.1 N HCKpH 1.2)을 사용하여 반응용액의 pH를 1.2로 조정한 후 반응용액의 부피를 1011也로 하여 측정하였다.
- ryl hydrazyl)에 대한 전자공여 효과로써 시료의 환원력을 측정하였다. 즉, 각 추출물을 농도별로 제조한 시료 ImL 에 0.
- 분석하였다. 또한 항산화성을 규명하기 위하여 물, 에탄올 그리고 클로로포름을 용매로 拱辰丹의 수용성 및 중성 그리고 지용성 성분을 추출하여 polyphenol 함량, 전자공여능, SOD 유사활성, 아질산염 소거능, xanthine oxidase 저해 활성 그리고 tyrosinase 저해 활성을 분석하였다.
- 무기질 정량은 Inductively coupled plasma spectrometer를 사용하여 분석하였으며, 분석조건은 Table 3과 같다. 모든 시약과 증류수는 무기질 분석용을 사용하였다.
- 무기질(mineral) 함량은 습식 분해법을 이용하여 시료 0.5g에 65%의 HNO3 6mL와 30% H2O2 lm止를 teflon bottle에 담은 후 이를 전처리 시험용액으로 사용하였다. 전처리 방법으로는 microwave digestion system을 이용하여 최고 600W로 총 20 분간 산분해를 실시하였다.
- 후 細末하여 사용하였다. 방향성 약재인 麝香은 熱湯하면 안되지만, 본 실험의 목적인 성분 분석과 다양한 추출물에서의 항산화성을 확인하기 위해 추출법을 이용하게 되었다. 藥材 구성은 대구한의대학교 부속한방병원에서 사용하고 있는 것으로, 1 丸의 내용과 분량은 Table 1.
- 시료의 수분(moisture) 정량은 상압 가열건조법에 따라 시료를 넣고 1051C dry oven에서 일정 시간 가열하고 desiccator에서 방냉하는 방법8)으로 항량을 구하여 측정하였다.
- 에탄올 추출물(ethan이 extract)은 수직으로 환류 냉각관을 부착시킨 둥근 플라스크에 시료 40g당 10 배에 해당하는 70% ethanol를 넣고 70℃의 수욕 상에서 3시간 동안 추출한 후 추출액을 filter paper(Whatman No. 5)로 여과하였다. 남은 잔사를 위와 같은 방법으로 2회 더 추출하여 모아진 각 추출액을 감압농축하여, 동결건조기(freeze dryer)를사용하여 동결건조하여 시료로 사용하였다.
- 분석하였다. 유리 아미노산은 일정량의 시료를 증류수를 가하여 유리 아미노산을 추출한 것을 분석용 시료로 사용하여 분석용 column(Lithium High Resolution PEEK)이 부착된 아미노산 자동분석기를 사용하여 분석하였다. 이때 buffer systeme lithium citrate system이었고, 분석조건은 Table 2와 같다.
- 5)로 흡입 여과한 뒤 250mL로 정용하였다. 이것을 시료액으로 하여 Somogyi-Nelson방법 11)에 의해 A액(무수 Na2HPO4 25g, Rochell염 25g, Na2HCO3 20g, 무수 Na2SO4를 증류수 Ⅱ.에 용해한 액)과 B액(CuSO4 . 5H2O 30g과 4방울의 진한 황산을 첨가한 증류수 200mL에 용해한 액)을 25 : 1로 혼합한 액을 0.5n止첨가해서 20분간 가열, 냉각하였다. 그런 다음 C액(Ammonium molybdate (NH4)6Mo7O24 .
- 5g에 65%의 HNO3 6mL와 30% H2O2 lm止를 teflon bottle에 담은 후 이를 전처리 시험용액으로 사용하였다. 전처리 방법으로는 microwave digestion system을 이용하여 최고 600W로 총 20 분간 산분해를 실시하였다. 전처리 과정을 거친 시료 용액을 0.
- 같이 측정하였다. 즉, ImM의 NaNO2용액 1 m止에 1000 ppm 농도의 시료를 첨가하고 여기에 0.1 N HCKpH 1.2)과 0.1M 구연산 완충용액을 사용하여 반응용액의 pH를 각각 1.2, 3.0, 4.2, 6.0으로 조정한 후 반응용액의 부피를 10mL로 하였다. 그리고 37℃에서 1시간 동안 반응시켜 얻은 반응액을 lm止씩 취하고 여기에 초산용액 5mL를 첨가한 다음 Griess시 약 0.
- 클로로포름 추출물(chloroform extract)은 수직으로 환류냉각관을 부착시킨 둥근 플라스크에 시료 40g당 10배에 해당하는 70% 사】loroform을 넣고 70℃의 수욕상에서 3시간 동안 추출한 후 추출액을 filter paper(Whatman No. 5)로 여과하였다. 남은 잔사를 위와 같은 방법으로 2회 더 추출하여 모아진각 추출액을 감압농축하여, 동결건조기 (freeze dryer)를 사용하여 동결건조하여 시료로 사용하였다.
- 이때 총 polyphenol 화합물은 tannic acid를 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 함량을 구하였다. 표준 곡선은 tannic acid를 10mg/mI止의 농도로 증류수에 녹이고, 최종농도가 18.75, 37.5, 75, 150 및 300倨 /mL 용액이 되도록 취하여 위와 같은 방법으로 725nm에서 흡광도를 측정하여 작성하였다.
대상 데이터
- (USA)에서, Sodium nitrite는 Junsei chemical Co.(Japan)에서 구입하여 사용하였다.
- 방향성 약재인 麝香은 熱湯하면 안되지만, 본 실험의 목적인 성분 분석과 다양한 추출물에서의 항산화성을 확인하기 위해 추출법을 이용하게 되었다. 藥材 구성은 대구한의대학교 부속한방병원에서 사용하고 있는 것으로, 1 丸의 내용과 분량은 Table 1.과 같다.
- 실험에 사용된 기기는 Spectrophotometer(Hitac hi U-2001, Japan), Amino acid analyzer(Pharma cia Chrom 20, Sweden), Inductively coupled plasma spectrometer(Throme, USA), Microwave digestion system(ETHOS-1600, Italy) 등 이었다.
- 실험에 사용한 拱辰丹(Gongjindan)은 대구한의대학교 부속한방병원에서 사용하고 있는 藥材를 구입한 후 細末하여 사용하였다. 방향성 약재인 麝香은 熱湯하면 안되지만, 본 실험의 목적인 성분 분석과 다양한 추출물에서의 항산화성을 확인하기 위해 추출법을 이용하게 되었다.
- 41% 로 농도가 증가할수록 전자공여능이 낮아지는 경향을 나타내었다. 전자공여능 측정에 사용된 DPPH는 ascorbic acid, 토코페롤, 방향족 화합물. 방향족 아민류에 의하여 환원되어 짙은 자색이 탈색됨으로써 전자공여 능의 측정이 가능하다46-7).
이론/모형
- Polyphenol 화합물의 함량은 Folin-Denis법 14) 으로 측정하였다. 즉, 추출물을 10mg/mL농도로 증류수에 녹인 다음 0.
- SOD 유사활성 측정은 Markl니nd의 방법16)에 따라 각 시료0.2mL에 pH 8.5로 보정한 tris-HCl buffer(50 mM tris [hydroxymethyl ] aminomethane + lOmM EDTA) 3 mL 와 7.2mM pyrogallol 0.2mL를 가하고 25 ℃ 에서 10분간 방치 후 IN HC1 ImL로 반응을 정지시킨 후 420nm에서 흡광도를 측정하여 나타내었다. 이때 각 시료 추출물의 농도는 0.
- Tyrosinase 저해활성 측정은 Yagi 등의 방법20) 에 따라 아래와 같이 측정하였다. 즉 시험관에 pH6.
- Xanthine oxidase 저해활성 측정은 Stirpe오扌 Corte의 방법19)에 따라 다음과 같이 측정하였다. 즉, 시료용액 0.
- 구성 아미노산은 Yun 등의 방법13)에 의해 가수 분해 관에 시료 50mg과 6N HC1 용액 10mL을 주입하여 탈기, 밀봉한 뒤 105℃에서 24시간 동안 가수분해하고 여과, 농축하여 citrate buffer로 재용해한 후 아미노산 자동분석기를 사용하여 분석하였다. 유리 아미노산은 일정량의 시료를 증류수를 가하여 유리 아미노산을 추출한 것을 분석용 시료로 사용하여 분석용 column(Lithium High Resolution PEEK)이 부착된 아미노산 자동분석기를 사용하여 분석하였다.
- 아질산염 분해작용은 김 등의 방법 17-8)에 따라 다음과 같이 측정하였다. 즉, ImM의 NaNO2용액 1 m止에 1000 ppm 농도의 시료를 첨가하고 여기에 0.
- 조단백질(crude protein)의 함량은 식품공전에 따라 Kj인dahl법으로 측정하여 질소-단백질 환산계수를 곱하여 산출하였다.
- 조지방(crude fat)의 함량은 Folch의 방법9)에 의해 시료 50g에 chloroform-methanol 혼합용액(1 : 1) lOOmL를 가하여 상온에서 magnetic stirrer로 교반 하면서 4시간 추출, 분액하여 맑은 용액을 취하여 lOOmL 용량 flask에 chloroform를 첨가하여 정용한 후 5mL 취해서 수분측정기로 측정하였다.
- 회분은 AOAC에 준하여 직접회화법10)으로 항량을 알고 있는 도가니에 일정량의 시료를 취하여 550~600℃ 의 회화로에서 5~6시간 회화하고 desicator에서 일정 시간 방냉하여 항량을 구하여 회화 전후의 항량차로써 조회분량을 산출하였다
성능/효과
- 1. 拱辰丹의 구성 아미노산의 함량은 Arginine이 가장 높게 나타났고, 다음으로 Alanine, Glutamic acid, Proline 순으로 높게 나타났다.
- 2, 拱辰丹의 유리 아미노산의 함량은 Glutamic acid가 가장 높게 나타났고, 다음으로 Leucine, Lysine, Phenylalanine 순으로 높게 나타났다.
- 3. 拱辰丹의 유리 아미노산 유도체의 함량은 Y -Aminoisobutyric acid가 가장 높게 나타났고, 다음으로 Phosphoserine, Taurine 순으로 높게 나타났다.
- 4. 拱辰丹의 무기질의 함량을 분석한 결과, 총 13 종의 무기질이 검출되었으며, 그 중에서 Ca>K>Na>Mg>Fe>Al>Mn 순으로 높게 나타났다. 5.
- 拱辰丹의 무기질의 함량을 분석한 결과, 총 13 종의 무기질이 검출되었으며, 그 중에서 Ca>K>Na>Mg>Fe>Al>Mn 순으로 높게 나타났다. 5. 拱辰丹의 성분들 중 항산화 작용이 있는 Arginine, Proline, Taurine, Fe, Mn의 함량이 높게 나타났다.
- 6. 拱辰丹의 추출 용매별 polyphenol 함량을 분석한 결과, 에탄올 추출물에서 가장 높게 나타났고, 그 다음으로 물 추출물, 클로로포름 추출물 순으로 높게 나타났다.
- 7. 拱辰丹의 추출용매별, 농도별 DPPH에 대한 전자공여 능을 측정한 결과, 에탄올 추출물, 클로로포름 추출물, 물 추출물 순으로 높게 나타났다.
- 8. 拱辰丹의 추출용매별, 농도별 SOD 유사 활성을 측정한 결과, 에탄올 추출물, 물 추출물, 클로로포름추출물 순으로 높게 나타났다.
- 9. 拱辰丹의 추출용매별, 농도별 아질산염 소거 능을 분석한 결과, 전체적으로 농도가 증가할수록 PH 가 낮아질수록 높게 나타났으며, 특히 물 추출물에서 높은 소거능이 나타났다.
- 43%의 높은 전자공여 능을 나타내었다. 추출용매의 종류에 관계없。] lOOppm에서 40% 이상의 전자공여능을 나타내었고, 특히 물 추출물은 300ppm에서 가장 높은 전자 공여 능인 89.36% 였으며, 에탄올 추출물과 클로로포름 추출물은 1000ppm에서 각각 93.43%와 91.95%로 각 용매별 가장 높은 전자공여능을 나타내었다. 에탄올이나 클로로포름 추출물은 농도가 증가할수록 높은 전자공여능을 나타내었으나, 물 추출물은 300ppm에서 가장 높은 전자공여능을 보이고 500ppm에서는 65.
- oxidase 저해활성을 확인한 결과, 물 주줄물과 클로로포름 추출물에서는 저해능을 확인할 수 없었으나, 에탄올 추출물 lOOOppm에서 가장 높게 나타났다. 11.
- pH 3.0에서 拱辰丹의 추출 용매별 및 농도별 아질산염 소거능을 알아 본 결과, 전체적으로 물 추출물과 에탄올 추출물에서 높은 소거능을 나타내었으나, 클로로포름 추출물은 다소 떨어지는 소거 능을 나타내었다(Fig. 4).
- 특히 추출 용매별로는 물 추출물이 가장 높은 소거 능을 보였고 다음이 에탄올 추출물, 그 다음이 클로로포름 추출물 순으로 높은 아질산염 소거능을 나타내었다. pH 3.0에서는 전체적으로 물 추출물과 에탄올 추출물에서 높은 소거능을 나타내었으나, 클로로포름 추출물은 다소 떨어지는 소거능을 나타내었다. 그리고 pH 6.
- pH 6.0에서의 아질산염 소거능은 拱辰丹의 각 용매별 추출물에서 그다지 높은 활성을 나타내지 않았으며, 농도에 비례하는 결과도 찾아볼 수 없었다 (Fig. 5).
- SOD는 항산화 효소로서 세포에 해로운 환원 산소 종을 과산화수소로 전환 시키는 반응(202 +2H- H202 + 02)을 촉매하는 효소이며, SOD에 의해 생성된 H2O2는 peroxidase나 catalase에 의하여 무해한 물분자와 산소분자로 전환시켜 산소 상해로부터 생체를 보호하는 기능으로 알려져 있다48). 拱辰 丹의 추출 용매별로는 에탄올 추출물 lOOOppm에서 69.96%로 가장 좋은 활성을 나타냄을 알 수 있었다.
- 拱辰丹 추출물의 아질산염 소거능을 알아본 결과, pH 1.2에서 25.59%~78.78% 까지의 높은 아질산염 소거능을 나타내었으며, 첨가농도에 비례하여 높은 소거능을 보였다. 특히 추출 용매별로는 물 추출물이 가장 높은 소거능을 보였고, 에탄올 추출물, 클로로포름 추출물 순으로 높은 아질산염 소거능을 나타내었다(Fig.
- 拱辰丹에서 3가지 추출물 즉 물 추출물, 70% 에탄올, 그리고 70% 클로로포름 추출물의 polyphenol 함량을 분석한 결과, 에탄올 추출물에서 가장 높은 polyphenol 함량인 18.69g/100g으로 나타났다. 그다음으로 물 추출물에서 14.
- 拱辰丹의 xanthine oxidase 저해활성을 확인한 결과, 물 추출물과 클로로포름 추출물에서는 저해 능을 확인할 수 없었으나, 에탄올 추출물 500ppm에서 21.31%, 1000ppm에서는 가장 높은 36.54%의 xanthine oxidase 저해활성을 나타내었다(Fig. 6).
- 拱辰丹의 무기질 함량을 분석한 결과 총 13종의 무기질이 검출되었으며. 그 중에서 Ca과 K의 함량 °] 각각 1139.
- 拱辰丹의 무기질 함량을 분석한 결과, 총 13종의 무기질이 검출되었으며 그 중에서 Ca과 K의 함량이 각각 1139.85mg/100g, 859.85mg/100g으로 전체무기질 함량인 2273.23mg/100g의 90% 이상을 차지하였다. 그 다음으로 높은 함량을 나타낸 무기질은 Na 135.
- 拱辰丹의 일반성분을 분석한 결과, 수분 함량은 15.14%, 탄수화물은 78.11%, 조지방과 조단백질 함량은 각각 0.56%, 1.19%, 조회분함량은 5.00% 로 나타났다(Table 4.).
- 拱辰丹의 추출 용매와 농도별로 tyrosinase 저해 활성을 측정한 결과, 물 추출물은 lOOppm에서 12.01%로 가장 높은 tyrosinase 저해활성을 나타내었고, 에탄올 추출물은 1000ppm에서 32.47%, 클로로포름 추출물은 500ppm에서 28.90%의 가장 높은 저해활성을 나타내었다(Fig. 7).
- 拱辰丹의 추출 용매와 농도별로 tyrosinase 저해 활성을 측정한 결과, 물 추출물은 lOOppm에서 12.01%로 가장 높은 tyrosinase 저해활성을 나타내었고, 에탄올 추출물은 lOOOppm에서 32.47%, 클로로포름 추출물은 500ppm에서 28.90%의 가장 높은 저해활성을 나타내었다. 피부는 자외선에 노출되면서 tyrosinase의 작용으로 melanosome에서 멜라닌이 합성되어 피부 노화가 촉진되며, 이때 free .
- 拱辰丹의 추출용매별, 농도별에 따른 DPPH( 1, 1-diphenyl- 2-picryl hydrazyl)에 대한 전자공여 능을 측정한 결과, 전체적으로 40.99- 93.43%의 높은 전자공여능을 나타내었다. 추출 용매의 종류에 관계없이 lOOppm에서 40% 이상의 전자공여 능을 나타내었고, 특히 물 추출물(이하 Water) 은 300ppm에서 가장 높은 전자공여능인 89.
- 拱辰丹의 추출용매별, 농도별에 따른 DPPH(ll-d iphenyl- 2-picryl hydrazyl)에 대한 전자공여 능을 측정한 결과는 전체적으로 40.99~93.43%의 높은 전자공여 능을 나타내었다. 추출용매의 종류에 관계없。] lOOppm에서 40% 이상의 전자공여능을 나타내었고, 특히 물 추출물은 300ppm에서 가장 높은 전자 공여 능인 89.
- 그 다음으로 拱辰丹의 항산화성을 확인하기 위하여 먼저 拱辰丹에서 3가지 추출물 즉 물 추출물, 7 0% 에탄올, 그리고 70% 클로로포름 추출물의 polyphenol 함량을 분석한 결과, 각각 14.85g/100g, 18.69g/100g, 11.66g/100g으로 나타났다. Phenol성 물질은 단백질 및 기타 거대 분자들과 결합하는 성질이 있어 항산화, 항미생물 활성 효과 등의 생리활성 기능을 가지는데45), 拱辰丹에서는 에탄올 추출물에서 polyphenol 함량이 가장 높게 나타남을 알 수 있었다.
- 생체내 유리기 생성 계의 하나인 xanthine oxidase는 purine, pyrimidine, pteridine, aldehyde류 및 heterocyclic compound 등의 대사에 관여하는 비특이적 효소로서 생체 내에서는 주로 p니urine체의 대사 산물인 hypoxanthine을 xanthine으로, xanthine을 다시 산화시켜 uric acid 를 생성하는 반응의 촉매로 작용한다52). 따라서 拱 辰丹의 xanthine oxidase 저해활성을 확인한 결과물 추출물과 클로로포름 추출물에서는 저해능을 확인할 수 없었으나, 에탄올 추출물 500ppm에서 21.31%, lOOOppm에서는 가장 높은 36.54%의 xanthine oxidase 저해활성을 나타내는 것을 알 수 있었다.
- 따라서 拱辰丹 추출물에서 아질산염 소거능을 알아본 결과, pH L2에서 25.59%~ 78.78% 까지의 높은 아질산염 소거능을 나타내었으며, 첨가농도에 비례하여 높은 소거능을 보였다. 특히 추출 용매별로는 물 추출물이 가장 높은 소거 능을 보였고 다음이 에탄올 추출물, 그 다음이 클로로포름 추출물 순으로 높은 아질산염 소거능을 나타내었다.
- 방향족 아민류에 의하여 환원되어 짙은 자색이 탈색됨으로써 전자공여 능의 측정이 가능하다46-7). 따라서 이러한 radical을 환원시키거나 상쇄시키는 능력이 크면 높은 항산화 활성 및 활성 산소를 비롯한 다른 radical대한 소거 작용을 기대할 수 있으며, 拱辰 丹의 각 추출물에서 전체적으로 높은 전자공여 능이 나타났으나, 특히 에탄올 추출물 lOOOppm에서 가장 높게 나타남을 알 수 있었다.
- 함유되어 있음을 알 수 있었다. 또한 무기질에서 항산화성이 있는 Fe, Mn의 함량이 높게 나타남을 알 수 있었다. 그리고 효소학적 측면의 생리활성을 분석한 결과 拱辰丹의 물, 에탄올, 클로로포름 각 추출물에서 항산화성이 확인되어 노화 및 퇴행성 질환에 임상 응용이 가능할 것으로 추정된다.
- 96%로 나타났다. 추출용매별로는 에탄올 추출물이 가장 좋은 활성을 나타내었으며, 물 추출물과 에탄올 추출물은 농도에 비례하여 증가함을 나타내었으나, 클로로포름 추출물은 300ppm에서 가장 높은 41.37%의 SOD 유사활성을 나타내었으며, 300ppm 이상의 농도에서는 오히려 활성이 낮아짐을 보였다(Fig. 2).
- 산화 방지는 물론 노화 억제와도 밀접한 관계가 있는 것으로 알려져 있는 SOD 유사활성 측정을 위해 산화효소인 pyrogallol과 拱辰丹을 반응시켜 측정한 결과, 각 추출물에서 전체적으로 SOD 유사 활성이 31.05 ~ 69.96%로 나타났다. .
- 산화 방지는 물론 노화 억제와도 밀접한 관계가 있는 것으로 알려져 있는 SOD(superoxide dismutase) 유사활성 측정을 위해 산화효소인 pyrogallol과 拱辰丹을 반응시켜 측정한 결과, 전체적으로 SOD 유사활성이 31.05 ~ 69.96%로 나타났다. 추출용매별로는 에탄올 추출물이 가장 좋은 활성을 나타내었으며, 물 추출물과 에탄올 추출물은 농도에 비례하여 증가함을 나타내었으나, 클로로포름 추출물은 300ppm에서 가장 높은 41.
- 상기 실험 결과들을 통하여 拱辰丹의 성분을 분석한 결과 아미노산 중 항산화 및 항노화 작용이 있는 Arginine과 Proline, 뇌와 신경세포의 전달을 이롭게 하는 Glutamic aicd와 Phenylalanine, 면역 기능 및 抗疲勞 작용이 있는 Alanine과 Lysine 이 많이 함유되어 있음을 알 수 있었다. 또한 무기질에서 항산화성이 있는 Fe, Mn의 함량이 높게 나타남을 알 수 있었다.
- 95%로 각 용매별 가장 높은 전자공여 능을 나타내었다. 에탄올이나 클로로포름 추출물은 농도가 증가할수록 높은 전자공여능을 나타내었으나, 물 추출물은 300ppm에서 가장 높은 전자공여 능을 보이고 500ppm에서는 65.44%, lOOOppm에서는 62.41%로 농도가 증가할수록 전자공여능이 낮아지는 경향을 나타내었다(Fig. 1).
- 95%로 각 용매별 가장 높은 전자공여 능을 나타내었다. 에탄올이나 클로로포름 추출물은 농도가 증가할수록 높은 전자공여능을 나타내었으나, 물 추출물은 300ppm에서 가장 높은 전자공여 능을 보이고 500ppm에서는 65.44%, lOOOppm에서는 62.41%로 농도가 증가할수록 전자공여능이 낮아지는 경향을 나타내었다(Fig. 1).
- 이로써 拱辰丹을 구성하는 4가지 약재의 약리적작용은 항균 및 항산화 작용, 중추신경계에 대한 작용이 공통적으로 있음을 알 수 있었고, 紅蔘과 熟地 黃에서도 공통적으로 항산화 작용이 있음을 알 수 있었다.
- 이상의 결과를 종합해 보면 拱辰丹의 성분에는 항산화 및 항노화 작용이 있는 아미노산과 무기질이 함유되어 있으며, 다양한 추출물에서 항산화성이 있음을 알 수 있었다. 따라서 拱辰丹 추출물은 老化 및 퇴행성 질환에 임상 응용이 가능할 것으로 생각된다.
- 전체적으로 농도가 증가할수록 pH가 낮아질수록 높은 아질산염 소거능을 나타내었고, 특히 拱辰丹의물 추출물에서 높은 소거능이 나타나는 것을 알 수 있었다.
- 전체적으로 농도가 증가할수록 pH가 낮아질수록 높은 아질산염 소거능을 나타내었고, 특히 拱辰丹의물 추출물에서 높은 소거능이 나타나는 것을 알 수 있었다.
- 43%의 높은 전자공여능을 나타내었다. 추출 용매의 종류에 관계없이 lOOppm에서 40% 이상의 전자공여 능을 나타내었고, 특히 물 추출물(이하 Water) 은 300ppm에서 가장 높은 전자공여능인 89.36% 였으며, 에탄올 추출물(이하 Ethanol)과 클로로포름추출물(이하 Chloroform) 은 lOOOppm 에서 각각 93.43%와 91.95%로 각 용매별 가장 높은 전자공여 능을 나타내었다. 에탄올이나 클로로포름 추출물은 농도가 증가할수록 높은 전자공여능을 나타내었으나, 물 추출물은 300ppm에서 가장 높은 전자공여 능을 보이고 500ppm에서는 65.
- 96%로 나타났다. 추출용매별로는 에탄올 추출물이 가장 좋은 활성을 나타내었으며, 물 추출물과 에탄올 추출물은 농도에 비례하여 증가함을 나타내었으나, 클로로포름 추출물은 300ppm에서 가장 높은 41.37%의 SOD 유사활성을 나타내었으며, 300ppm 이상의 농도에서는 오히려 활성이 낮아짐을 보였다(Fig. 2).
- 78% 까지의 높은 아질산염 소거능을 나타내었으며, 첨가농도에 비례하여 높은 소거능을 보였다. 특히 추출 용매별로는 물 추출물이 가장 높은 소거 능을 보였고 다음이 에탄올 추출물, 그 다음이 클로로포름 추출물 순으로 높은 아질산염 소거능을 나타내었다. pH 3.
- 78% 까지의 높은 아질산염 소거능을 나타내었으며, 첨가농도에 비례하여 높은 소거능을 보였다. 특히 추출 용매별로는 물 추출물이 가장 높은 소거능을 보였고, 에탄올 추출물, 클로로포름 추출물 순으로 높은 아질산염 소거능을 나타내었다(Fig. 3).
- 94mg/100g 으로 나타났다. 필수아미노산 중 Valine, Threonine 및 Leucine의 함량이 각각 13.75, 12.20, U.20mg/100g 순으로 높은 함량을 나타내었으며, 비필수아미노산 중에서는 Arginine의 함량이 166.51mg/100g으로 가장 높은 함량을 보였고, 그 다음으로 Alanine, Glutamic aicd, Proline 순으로 높은 함량을 나타내었다(Table 6.).
- 73mg/100g 이었다. 필수아미노산 중에서는 Leucine0] 49.51 mg/10 0g으로 가장 높은 함량을 나타내었으며, 그 다음으로 Lysine, Phenylalanine, Valine, Isoleucine 순으로 높은 함량을 나타내었다(Table 6.)
후속연구
- 또한 무기질에서 항산화성이 있는 Fe, Mn의 함량이 높게 나타남을 알 수 있었다. 그리고 효소학적 측면의 생리활성을 분석한 결과 拱辰丹의 물, 에탄올, 클로로포름 각 추출물에서 항산화성이 확인되어 노화 및 퇴행성 질환에 임상 응용이 가능할 것으로 추정된다.
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