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문제 정의
- 광대 버섯 (#)은 외관상 가장 독이 많아 보이는데 muscarine, bufotenine 등이 주성분으로 구토, 설사 등을 일으키며 muscarine에 의해 신경증 상과 향정신작용을 나타낸다[7, 18]. ylz2 mzs에대한 선행연구는 많이 있지만 랫드를 대상으로 한 연구는 부족한 실정 이고, amanita imsGari 단회투여 하였을 때 시간 경과에 따른 신경행동학적 연구와 반복투여를 하였을 때 일어나는 변화에 관한 연구가 없기에 본 연구에서 amanita muscane: 랫드에게 투여하였을 때 어떠한 반응이 일어나는지에 대하여 알아보았다. 단회투여독성 시험에서는 신경 독성에 대해 알아보았고 반복투여독성시험에서는 신장과 간을 표적장기로 하여서 중점적으로 살펴보았다.
- 이러한 광대버섯 속에 의한 중독은 유럽과 미국에서는 주로 알광대버섯(Amanita Ia lldd) 의한 것이나[24] 국내에서는 현재까지 보고된 버섯 중독 증례에서 대부분 정확한 버섯의 종류가 확인되지 않았다[10, 11, 19]. 본 실험은 산재해 있는 많은 독버섯 중에 광대 버섯(aokn famzsan)을 사용해서 단회투여독성시험과 반복투여독성시험을 하였을 때 랫드에 어떠한 영향을 미치는지에 대해 알아본 논문이다. 광대 버섯 (#)은 외관상 가장 독이 많아 보이는데 muscarine, bufotenine 등이 주성분으로 구토, 설사 등을 일으키며 muscarine에 의해 신경증 상과 향정신작용을 나타낸다[7, 18].
- 광대버섯 중독은 버섯에 함유된 치명적인 독소(toxin)인 amatoxin 에 의한 전격성 간괴사와 급성신부전의 소견을 보인다[8]. 본연구에서는 amanita nvsca 툭여 시 간과 신장 기능의 독성병리학적 변화를 알아보기 위하여 혈청분석에서 간 기능의 영향을 알아보기 위한 지표로 ALT수치와 LDH수치를 분석하였고 신장 기능에 대한 영향을 알아보기 위하여 BUN수치와 crea- thdne수치를 분석하였다.
제안 방법
- 16.5 ㎎/㎏의 amanita nvscariA 주 2회 4주간에 걸쳐 투여를 실시하였고, 매주 부검을 실시하면서 혈액을 채취하였다. 혈액의 경우 랫드의 복대동맥에서 2 ml을 채혈해서 EDTA tube에 넣어 냉장 보관하였다.
- 조직병리학적 검사를 통해 간, 신장 그리고 뇌의 독성병리학적 변화를 살펴보았다. 16.5 ㎎/㎏의 농도로 amanita mus- cai주 2회 4주 동안 투여한 후 매주 부검을 통해 조직 절편을 만들었고, H&E 염색을 한 후 광학현미경으로 100배와 200 배로 관찰하였다. Fig.
- 4주 동안 16.5 ㎎/㎏의 amanita muscane 총 8회 투여 하면서 투여 후 1주, 2주, 3주 그리고 4주 경과 시 부검을 실시하였다. 부검 시에 간, 신장, 부신, 비장 그리고 뇌를 적출 한 뒤 10% 중성 포르말린으로 3일 이상 충분히 고정 한 후 자동조직처리 기 (Shandon, Tokyo, Japan) 에서 탈수 및 파라핀 침투과정을 거친 후, 파라핀 포매기 (Shandon, Tokyo, Japan)로 포매하였다.
- Amanita nvsoane\ 농도는 16.5 ㎎/㎏ 로 설정 하였고, 주2회로 4주 동안 경구 투여하였으며 투여하는 날 체중, 음수 섭취 량, 사료섭취 량의 측정을 함께 하였다. Group당 3마리씩 군분리 (대조군, 1주차(1W), 2주차(2W), 3주차(3W), 4주차(4W))를 하였고 매주 3마리 씩 부검을 하였으며 대조군은 4주 차에 부검한 랫드와 비교를 하기위하여 4주차 부검일에 같이 부검하였다.
- 5 ㎎/㎏ 로 설정 하였고, 주2회로 4주 동안 경구 투여하였으며 투여하는 날 체중, 음수 섭취 량, 사료섭취 량의 측정을 함께 하였다. Group당 3마리씩 군분리 (대조군, 1주차(1W), 2주차(2W), 3주차(3W), 4주차(4W))를 하였고 매주 3마리 씩 부검을 하였으며 대조군은 4주 차에 부검한 랫드와 비교를 하기위하여 4주차 부검일에 같이 부검하였다. ylnHn mustang 반복투여가 장기에 미치는 영향을 알아보기 위하여 부검 시 간, 부신, 신장, 뇌 그리고 비장을 적출하여 포르말린에 장기를 고정시켰다.
- Group당 3마리씩 군분리 (대조군, 1주차(1W), 2주차(2W), 3주차(3W), 4주차(4W))를 하였고 매주 3마리 씩 부검을 하였으며 대조군은 4주 차에 부검한 랫드와 비교를 하기위하여 4주차 부검일에 같이 부검하였다. ylnHn mustang 반복투여가 장기에 미치는 영향을 알아보기 위하여 부검 시 간, 부신, 신장, 뇌 그리고 비장을 적출하여 포르말린에 장기를 고정시켰다. 또한 혈액, 혈청 분석을 하기 위해서 복대동맥을 통한 채혈을 실시하였다.
- Amanita nvscaiia?} SD 랫드에 미치는 신경독성 정도를 측정하기 위한 강경증은 Lim[14]의 방법에 따라 실시하였고, amanita muscari 설정한 농도(대조군 0 ㎎/㎏, 저용량군 3.3 ㎎/㎏, 중간용량군 16.5 ㎎/㎏, 고용량군 33.0 ㎎/㎏)로경구투여 한 뒤 1시간, 2시간, 3시간 그리고 4시간 후에 강 경증을 측정하였다. 강경증은 두 기둥 사이에 나무막대를 연결해서 랫드가 매달릴 수 있게 실험대를 만든 후 랫드의 앞발을 올려놓아 매달리지 못하고 떨어지는데 까지 걸린 시간으로서, 각 투여군의 투여 전 강경증 시간을 기준으로 투여 후 시간 경과에 따른 강경증 시간 변화를 측정하였다.
- 0 ㎎/㎏)로경구투여 한 뒤 1시간, 2시간, 3시간 그리고 4시간 후에 강 경증을 측정하였다. 강경증은 두 기둥 사이에 나무막대를 연결해서 랫드가 매달릴 수 있게 실험대를 만든 후 랫드의 앞발을 올려놓아 매달리지 못하고 떨어지는데 까지 걸린 시간으로서, 각 투여군의 투여 전 강경증 시간을 기준으로 투여 후 시간 경과에 따른 강경증 시간 변화를 측정하였다.
- 0 ㎎/㎏)로 하여 SD 랫드에 경구투여한 뒤 1시간, 2시간, 3시간 그리고 4시간 후에 경사판의 각도를 측정하였다. 경사판에 각도기를 설치한 뒤 경사면에 랫드를올려놓고 기울기를 증가시켰을 때 미끄러져 내려오는 각도를 측정하였고, 각 군의 투여 전 경사 각도를 기준으로 투여 후 시간 경과 시 경사판의 각도변화를 측정하였다.
- 군 분리를 하였다. 군 분리 후 일주일 동안을 순화 기간으로 설정 한 뒤 건강상태를 확인하였다. & mzsan 농도는 대조군의 경우 0 ㎎/㎏, 저용량군의 경우 3.
- 군당 3마리씩 4군(대조군, 저용량군, 중간용량군, 고용량군 으로 군 분리를 하였다. 군 분리 후 일주일 동안을 순화 기간으로 설정 한 뒤 건강상태를 확인하였다.
- ylz2 mzs에대한 선행연구는 많이 있지만 랫드를 대상으로 한 연구는 부족한 실정 이고, amanita imsGari 단회투여 하였을 때 시간 경과에 따른 신경행동학적 연구와 반복투여를 하였을 때 일어나는 변화에 관한 연구가 없기에 본 연구에서 amanita muscane: 랫드에게 투여하였을 때 어떠한 반응이 일어나는지에 대하여 알아보았다. 단회투여독성 시험에서는 신경 독성에 대해 알아보았고 반복투여독성시험에서는 신장과 간을 표적장기로 하여서 중점적으로 살펴보았다.
- ylnHn mustang 반복투여가 장기에 미치는 영향을 알아보기 위하여 부검 시 간, 부신, 신장, 뇌 그리고 비장을 적출하여 포르말린에 장기를 고정시켰다. 또한 혈액, 혈청 분석을 하기 위해서 복대동맥을 통한 채혈을 실시하였다.
- 랫드가 피부자극을 인지하는 시간을 측정하는 정압자극법은 진통효능과 관련된 실험에 사용하는 방법으로 Son[19]의 방법을 따라 실험을 실시 하였고, 각 군에 amanita mu%ari 설정한 농도(대조군 0 ㎎/㎏, 저용량군 3.3 ㎎/㎏, 중간용량군 16.5 ㎎/㎏, 고용량군 33.0 ㎎/㎏)로 경구투여 한 뒤 1시간, 2시간, 3시간 그리고 4시간 후에 정압자극시간을 측정하였다. 랫드의 꼬리에 일정한 부분을 정해서 클립으로 자극을 가한 후 꼬리에 있는 클립을 물거나 공격할 때까지의 시간을 측정하였고, 각 군의 투여 전 자극 인지 시간을 기준으로 투여 후 시간 경과에 따른 자극 인지 시간의 변화를 측정하였다.
- 0 ㎎/㎏)로 경구투여 한 뒤 1시간, 2시간, 3시간 그리고 4시간 후에 정압자극시간을 측정하였다. 랫드의 꼬리에 일정한 부분을 정해서 클립으로 자극을 가한 후 꼬리에 있는 클립을 물거나 공격할 때까지의 시간을 측정하였고, 각 군의 투여 전 자극 인지 시간을 기준으로 투여 후 시간 경과에 따른 자극 인지 시간의 변화를 측정하였다.
- 동안 순화기간을 거쳤다. 모든 실험동물은 실험동물용 고형사료 ((주)샘타코바이오코리아)와 멸균 정제된 음수를 실험종료 시까지 자유섭취 시켰고, 투여 액량은 모두 2 ml/kg 으로하여 실험물질과 부형제를 강제 경구투여 하였다. 실험 기간동안 온도 23+2℃, 상대습도 50+10%, 환기 회수 10-12회/시간, 조명시간 12시간(06:00~18:00)으로 설정된 공주대학교 특수동물학과 실험동물실(생명관7층 720호)에서 실시하였다.
- 따라서 amanita muscaris를 장기간 섭취하게 되면 간 기능의 장애를 유발 시킬 것으로 판단된다. 반복투여 독성시험의 용량은 기존의 독성용량을 참고하여 설정하였고[521],단회투여독성시험을 실시하였을 때 33.0 ㎎/㎏에서 독성에 의하여 3마리의 랫드 중에서 한마리가 사망하였기에 반복투여 독성시험의 투여농도를 16.5 ㎎/㎏으로 설정하였다.
- 5 ㎎/㎏의 amanita muscane 총 8회 투여 하면서 투여 후 1주, 2주, 3주 그리고 4주 경과 시 부검을 실시하였다. 부검 시에 간, 신장, 부신, 비장 그리고 뇌를 적출 한 뒤 10% 중성 포르말린으로 3일 이상 충분히 고정 한 후 자동조직처리 기 (Shandon, Tokyo, Japan) 에서 탈수 및 파라핀 침투과정을 거친 후, 파라핀 포매기 (Shandon, Tokyo, Japan)로 포매하였다. 포매한 조직을 microtome (Shandon, Tokyo, Japan)으로 5 um 절편을 만들어 H&E 염색을 수행하여 광학현미경 (Olympus, Japan)으로 검사하였다.
- 모든 실험동물은 실험동물용 고형사료 ((주)샘타코바이오코리아)와 멸균 정제된 음수를 실험종료 시까지 자유섭취 시켰고, 투여 액량은 모두 2 ml/kg 으로하여 실험물질과 부형제를 강제 경구투여 하였다. 실험 기간동안 온도 23+2℃, 상대습도 50+10%, 환기 회수 10-12회/시간, 조명시간 12시간(06:00~18:00)으로 설정된 공주대학교 특수동물학과 실험동물실(생명관7층 720호)에서 실시하였다.Amanita nvscanae: Sigma Co.
- 조직병리학적 검사를 통해 간, 신장 그리고 뇌의 독성병리학적 변화를 살펴보았다. 16.
- 0 ㎎/㎏으로 설정하였다. 투여는 경구투여로 하였고 측정은 투여 후 1, 2, 3, 4 시간 후에 강경증, 경사판법, 정압자극법을 사용하여 측정하였다.
- 부검 시에 간, 신장, 부신, 비장 그리고 뇌를 적출 한 뒤 10% 중성 포르말린으로 3일 이상 충분히 고정 한 후 자동조직처리 기 (Shandon, Tokyo, Japan) 에서 탈수 및 파라핀 침투과정을 거친 후, 파라핀 포매기 (Shandon, Tokyo, Japan)로 포매하였다. 포매한 조직을 microtome (Shandon, Tokyo, Japan)으로 5 um 절편을 만들어 H&E 염색을 수행하여 광학현미경 (Olympus, Japan)으로 검사하였다.
- 혈액의 경우 랫드의 복대동맥에서 2 ml을 채혈해서 EDTA tube에 넣어 냉장 보관하였다. 혈액검사는 혈액분석기(IDEXXLaboratories, Inc, USA)를 이용하여 CBC (WBC; White blood cell, RBC; Red blood cell, HGB; Hemoglobin, HCT; Hematocrit, MCV; Mean corpuscular volume, MCH; Mean corposcular hemoglobin, MCHC; Mean corposcular hemoglobin concentration, PLT; Platelet)를 검사하였고, 혈청의 경우 채혈된 혈액을 15ml tube에 담아 뚜껑을 연 후 한 시간 동안 실온에 방치 한 뒤에 centrifuge (3, 000 rpm, 15분, 26℃)로 원심분리를 한 뒤 혈청만 추출하여 냉동보관 하였다. 혈청검사는 혈청분석기 (IDEXX Laboratories, Inc, USA)를 이용하여 ALT / LDH / BUN (Blood urea nitrogen), creatinine 의수치를 측정하였다.
- 혈액검사는 혈액분석기(IDEXXLaboratories, Inc, USA)를 이용하여 CBC (WBC; White blood cell, RBC; Red blood cell, HGB; Hemoglobin, HCT; Hematocrit, MCV; Mean corpuscular volume, MCH; Mean corposcular hemoglobin, MCHC; Mean corposcular hemoglobin concentration, PLT; Platelet)를 검사하였고, 혈청의 경우 채혈된 혈액을 15ml tube에 담아 뚜껑을 연 후 한 시간 동안 실온에 방치 한 뒤에 centrifuge (3, 000 rpm, 15분, 26℃)로 원심분리를 한 뒤 혈청만 추출하여 냉동보관 하였다. 혈청검사는 혈청분석기 (IDEXX Laboratories, Inc, USA)를 이용하여 ALT / LDH / BUN (Blood urea nitrogen), creatinine 의수치를 측정하였다.
대상 데이터
- 실험동물은 12주령으로 평균체중 300 g의 암컷 Sprague- Dawley Rat (중앙실험동물)을 사용하였고, 실험에 앞서 일주일 동안 순화기간을 거쳤다. 모든 실험동물은 실험동물용 고형사료 ((주)샘타코바이오코리아)와 멸균 정제된 음수를 실험종료 시까지 자유섭취 시켰고, 투여 액량은 모두 2 ml/kg 으로하여 실험물질과 부형제를 강제 경구투여 하였다.
데이터처리
- 실험을 통해 얻어진 수치와 부검 시 측정한 조직에서 산출된 모든 수치들은 분산분석(geway ANOVA)을 실시하였다. 유의성은 공히 95%(p<0.
이론/모형
- Lee [12]의 측정법에 따라 실시한 경사판법은 amanita ims- caz3가지 농도(저용량군 3.3 ㎎/㎏, 중간용량군 16.5 ㎎/㎏, 고용량군 33.0 ㎎/㎏)로 하여 SD 랫드에 경구투여한 뒤 1시간, 2시간, 3시간 그리고 4시간 후에 경사판의 각도를 측정하였다. 경사판에 각도기를 설치한 뒤 경사면에 랫드를올려놓고 기울기를 증가시켰을 때 미끄러져 내려오는 각도를 측정하였고, 각 군의 투여 전 경사 각도를 기준으로 투여 후 시간 경과 시 경사판의 각도변화를 측정하였다.
성능/효과
- BUNe 혈중비단백성 질소의 2/3를 차지하며 신장 기능의 장애나 신부전의 발생 시 증가하고, creatininee 신장의 배설 기능과 밀접한 관련이 있는 지표로 신부전이나 말단비대증의 발생 시 증가한다. Amanita nvstatiA 16.5 ㎎/㎏의 농도로 4주 동안 총 8회 반복 투여한 결과 BUN, creatinine 수치는 모두 정상 범위를 나타냈다. 따라서 amanita muscaris를 장기간 섭취하게 되면 간 기능의 장애를 유발 시킬 것으로 판단된다.
- Fig. 1에 나타난 바와 같이 대조군 0 ㎎/㎏, 저용량군 3.3 ㎎/㎏, 중간용량군 16.5 ㎎/㎏, 고용량군 33.0 ㎎/㎏의 농도로 amanita nwscari 경구로 단회투여한 후 강경증을 즉정한 결과 투여농도에 따라 차이가 나타나는 것을 관찰할 수 있었다. 강경증은 동물이 강제적으로 부자연스러운 자세를 취하여 일정시간 이상 계속 유지시키는 방법으로 통상 양 앞다리를 일정한 높이로 고정한 수평막대에 걸어 뒷다리로 선 자세를 잡게 하여 근 이완을 따르지 않고 일정시간 이상 유지한 경우를 정상으로 판정 한다.
- Fig. 4에 나타난 바와 같이 ALT는 간, 근육, 혈구에 장애가 있을 때 증가를 하며, 주로 간에 이상이 생겼을 때 높게 나타나는데, 총 8회에 걸쳐 16.5 ㎎/㎏의 amanita imsw 투여한 4주차의 결과에서 높게 나타났다. LDH는 장기 손상의 비특이적 marker로 수치증가 시에 용혈성빈혈, 급성간염 등이 의심되는데, 본 실험에서 투여 기간 전반에 걸쳐 LDH의 수치는 투여군이 대조군에 비해 높게 나타났고, 투여 후 4주 경과 시유의 적인 증가가 관찰되었다.
- 이것으로 볼 때, amanita muscaria를 3주 동안 반복투여 했을 때간에서 독성병리학적 병변이 발견되는 것으로 판단된다. Fig. 5C에 나타난 바와 같이 신장조직의 조직병리학적 관찰 결과대조군에서는 정상적인 신장 조직이 관찰되었지만, Fig. 5D에 나타난 바와 같이 amanita muscaria를 4주 동안 반복투여 후 부검한 조직에서는 세뇨관의 상피세포에서 다발성으로 핵이 작게 응축되거나 소실되어 세포의 경계가 불명확해지면서 세포의 괴사가 관찰되었으며, 기질 내에서는 부종과 더불어 주로 단핵세포들로 구성된 염증세포의 침윤이 관찰되었다. 뇌 조직 의 조직 병 리 학적 관찰결과 amanita muscaria를 3주 동안 반복 투여한 SD 랫드 중 폐사한 한 마리에서 뇌혈관 주변에 스폰지 형태의 많은 공포가 관찰되었으나, 투여기간 전반에 걸쳐서 부검한 모든 뇌조직에서는 뚜렷한 병변이 관찰되지 않았다.
- 5 ㎎/㎏의 amanita imsw 투여한 4주차의 결과에서 높게 나타났다. LDH는 장기 손상의 비특이적 marker로 수치증가 시에 용혈성빈혈, 급성간염 등이 의심되는데, 본 실험에서 투여 기간 전반에 걸쳐 LDH의 수치는 투여군이 대조군에 비해 높게 나타났고, 투여 후 4주 경과 시유의 적인 증가가 관찰되었다. 따라서 표적장기인 간과 신장에서 기능적 손상이 일어났을 것이라고 여겨진다.
- Table 1에 나타난 바와 같이 SD 랫드로부터 채취된 혈액으로 실험동물의 건강상태를 알아보고 질병의 유무를 살펴보기 위해 혈액분석을 실시하였으며, 투여군의 혈액분석수치는 대조군과 비교 시 유의적인 차이는 보이지 않았고, 실험에 사용된 SD 랫드 모두가 건강에 이상이 없는 것이 관찰되었다. 광대버섯 중독은 버섯에 함유된 치명적인 독소(toxin)인 amatoxin 에 의한 전격성 간괴사와 급성신부전의 소견을 보인다[8].
- 5D에 나타난 바와 같이 amanita muscaria를 4주 동안 반복투여 후 부검한 조직에서는 세뇨관의 상피세포에서 다발성으로 핵이 작게 응축되거나 소실되어 세포의 경계가 불명확해지면서 세포의 괴사가 관찰되었으며, 기질 내에서는 부종과 더불어 주로 단핵세포들로 구성된 염증세포의 침윤이 관찰되었다. 뇌 조직 의 조직 병 리 학적 관찰결과 amanita muscaria를 3주 동안 반복 투여한 SD 랫드 중 폐사한 한 마리에서 뇌혈관 주변에 스폰지 형태의 많은 공포가 관찰되었으나, 투여기간 전반에 걸쳐서 부검한 모든 뇌조직에서는 뚜렷한 병변이 관찰되지 않았다. 독버섯을 분류하는 방법은 여러 가지가 있으나 증상에 따른 분류에 의하면 7개 군으로 분류되며 각각은 특징적인 잠복기, 표적장기(target organ) 및 임상증상을 나타낸다[16, 18, 24].
- 질병상태 에서의 신호전달체 계의연구에 사용이 되 었으며, haloperid이이나 chloropromazine의항정신병 약은 강경증을 야기하는 추체외로계의 장애를 일으킨다[14]. 본 실험에서 amanita miscaii 신경독성작용 측정결과 저용량군, 중간용량군은 강경증이 대조군에 비하여 유의적인 차이를 나타내지 않았으나, 고용량군의 경우 투여 후 2~ 3시간 경과 시 강경증이 감소한 것을 볼 수 있었다. 투여 후 4시간 경과 시 투여전의 수준으로 강경증의 증가가 관찰되는 것으로 보아 amanita imscari 신경독성작용은 4시간 전후부터는 현격히 감소되는 것으로 판단된다.
- 또한 부 교감 신경을 자극하여 침과 땀이 나고 맥박이 느려지며, 각종 분비항진, 호흡곤란, 위장의 경련성 수축과 구토, 설사, 방광 및 자궁의 수축 현상이 나타난다. 본 실험에서는 amanita nvs 를 33.0 ㎎/㎏의 용량으로 섭취 시 2~3시간 후 신경증 상과 향정 신작용이 나타났고, 섭취 4시간 전후에는 amanita irvs 의 독성이 현저히 감소하는 것으로 확인되었다.
- 대조 군의 간 조직에서도 간세포의 변성과 분열은 관찰되지 않았다. 이것으로 볼 때, amanita muscaria를 3주 동안 반복투여 했을 때간에서 독성병리학적 병변이 발견되는 것으로 판단된다. Fig.
- vemsfe 의 하여 발생하는데, 42 속의 버섯에는 phalloidin과 amatoxin 두 가지 종류의 독이 포함되어 있고 이 중 phalloidine actin polymerase-depolymerase cycle에 작용하여 세포막의 기능장애를 유발하나 이는 임상적으로 중요하지 않으며, amatoxinenucleoplasmic RNA polymerase를 억제하여 RNA 및 단백질합성을 억제하여 장관 상피세포, 간세포 및 신장 세뇨관 세포들의 괴사를 일으킬 수 있다[2, 4, 18, 21]. 이번 연구에서 3주 이상 반복투여를 한 SD 랫드의 조직병 리학적 검사결과 간 조직에서 혈관 주변 간세포의 변성과 분열이 관찰되었다. 하지만 투여 1 주 후와 2주 후에 부검을 한 SD 랫드의 간 조직에서는 손상된 조직을 찾아 볼 수 없는 것으로 볼 때, anmita imscaria 는 장기간 반복투여 했을 때 간에서 독성병리학적 병변을 유발 시키는 것으로 판단된다.
- 본 실험에서 amanita miscaii 신경독성작용 측정결과 저용량군, 중간용량군은 강경증이 대조군에 비하여 유의적인 차이를 나타내지 않았으나, 고용량군의 경우 투여 후 2~ 3시간 경과 시 강경증이 감소한 것을 볼 수 있었다. 투여 후 4시간 경과 시 투여전의 수준으로 강경증의 증가가 관찰되는 것으로 보아 amanita imscari 신경독성작용은 4시간 전후부터는 현격히 감소되는 것으로 판단된다.
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