[논문]솔잎 메탄올추출물의 마우스 경구투여에 의한 장관면역 활성

윤진아; 유광원; 신선혁; 조홍연

doi:10.3746/jkfn.2010.39.3.356

솔잎 메탄올추출물의 마우스 경구투여에 의한 장관면역 활성
Activation of Intestinal Immune System by an Orally Administered Methanol Extract from Pine Needles 원문보기

한국식품영양과학회지 = Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition, v.39 no.3, 2010년, pp.356 - 362

윤진아 (배화여자대학교 식품영양학과) , 유광원 (충주대학교 식품생명공학부) , 신선혁 (고려대학교 식품생명공학과) , 조홍연 (고려대학교 식품생명공학과)

초록
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동결건조된 솔잎(Pinus densiflora needles)으로부터 냉수(PD-CW), 열수(PD-HW)와 메탄올추출물(PD-M)을 분획하여 in vitro에서 Peyer's patch를 경유한 장관면역 활성을 측정한 결과, PD-M 획분에서 유력한 골수세포 증식활성을 나타내었다. 메탄올 추출방법을 확립하기 위하여 MeOH 추출물을 균질화, 교반 또는 환류 등의 방법으로 조제하였을 때, 환류방법으로 조제된 MeOH 추출물에서 유의적(p<0.05)으로 가장 높은 장관면역 활성을 in vitro에서 확인할 수 있었다. 솔잎으로부터 분획된 PD-M을 마우스에 경구 투여하고 Peyer's patch를 분리하여 ex vivo에서의 장관면역 활성도 관찰하였다. 다양한 농도로 1주일 동안 PD-M을 경구투여 한 결과, 1.0 g/kg of BW/day의 용량으로 경구투여 한 C3H/He 마우스의 Peyer's patch로부터 얻은 세포배양 상등액에서 saline 대조군보다 2.5배의 높은 장관면역 활성을 보여주었다(p<0.05). 또한 다양한 농도로 경구투여 된 Peyer's patch 세포의 배양액을 이용하여 측정한 IL-6 생산능은 1.0 g/kg of BW/day의 용량에서 1.13배로 증가하였으나 GM-CSF는 처리 용량에 따라 유의적인 값을 보이지는 않았다. 이러한 결과는 PD-M의 경구투여가 Peyer's patch 세포로부터 GM-CSF와 IL-6 등의 조혈세포 증식인자의 분비를 촉진함을 나타내는 것이며, 이러한 cytokine들이 골수세포 증식의 조절인자로서 작용함을 보여주는 것으로 생각한다.

Abstract ▼ AI-Helper

When pine (Pinus densiflora) needles were fractionated into cold water (PD-CW), hot water (PD-HW) and methanol extract (PD-M), PD-M showed potent simulating activity (1.19-fold of the saline control) for proliferation of bone marrow cells mediated by Peyer's patch cells in vitro. MeOH extracts were prepared by homogenization, stirring or reflux to identify the method of methanol extraction, and MeOH extract by reflux method showed significantly highest intestinal immune system modulating activity (1.30-fold) in vitro. The intestinal immune system modulating effect of orally administered PD-M fractionated from pine needles also were studied in mice. Analyzing intestinal immune system modulating activity mediated Peyer's patch cells from C3H/He mice which had been fed with PD-M at different doses for 7 days, 1.0 g/kg of BW/day indicated that the bone marrow cells had proliferated (3.65-fold of 3% EtOH administered group). In addition, the amounts of IL-6 in the culture supernatant of Peyer's patch cells at 1.0 g/kg of BW/day were increased (1.13-fold) whereas the production of GM-CSF was not dose dependent. These results indicate that oral administration of PD-M enhances the secretion of hematopoietic growth factors such as GM-CSF and IL-6 from Peyer's patch cells, and these cytokines also act on modulator of bone marrow cell proliferation.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

따라서 본 연구에서는 식품 등에 활용될 수 있는 기능성소재 개발을 목적으로 다양한 식물시료검색으로 선정된 솔잎으로부터, 섭취 후 Peyer's patch 세포를 자극하여 면역계 및 조혈세포계를 활성화시킬 수 있는 소재를 찾기 위하여, 다양한 용매추출물로부터 활성 획분을 분리하고 이를 실험동물에 직접 경구투여 하여 활성을 검토함으로써 새로운 기능성식품 소재로서 활용가능성을 탐색하고자 하였다.
따라서 본 연구의 in vitro실험에서 유의적(p<0.05)인 장관면역 활성을 보인 솔잎의 MeOH 획분도 식품소재로 활용하기 위해서는 이러한 가능성이 검토되어야 하기에 솔잎 MeOH 추출물을 마우스에 경구투여한 후 활성을 검토하게 되었다.

제안 방법

In vitro에서의 장관면역 활성을 측정하기 위하여 C3H/He 마우스의 소장벽에 부착되어 있는 Peyer's patch를 잘라 HBSS가 채워진 cell culture용 petridish에 옮기고 주사기 고무마개로 누르면서 마쇄하여 Peyer's patch 세포를 현탁시켰다.
한편, 솔잎의 MeOH 추출물은 5배의 MeOH을 솔잎에 첨가한 후 환류장치에 연결하여 2시간씩 5회 추출하고 농축 및 동결건조 하여 MeOH 추출물로 조제하였다(PD-M). 가장 우수한 장관면역 활성을 보인 MeOH 추출물의 최적 추출방법을 검토하기 위하여 솔잎에 MeOH을 첨가한 후 상기의 균질기로 파쇄 및 균질화시킨 방법, 솔잎과 MeOH를 삼각플라스크에 넣고 reciprocal shaker에서 교반시킨 방법 및 솔잎을 환류장치에서 MeOH로 2시간씩 5회 추출시킨 방법 등을 사용, 추출한 후 농축, 동결건조 하여 MeOH 추출물을 조제하였다.
일반적으로 생약으로부터 분획된 냉수 및 열수추출물의 경우에는 다당 또는 단백다당 등이 면역 활성에 관여한다고 보고(20,21)되고 있으나 MeOH 추출물의 면역 활성과 관련된 연구는 매우 적은 실정이다. 그러나 본 연구결과에 의하면 MeOH 추출물의 경우에도 상당한 장관면역 활성을 나타내고 있고(Table 1) 최근 polyphenol 화합물 등의 면역 활성이 보고되고 있기때문에(22,23), 본 연구에서는 MeOH 추출물에 초점을 맞추어 분획을 진행하였다. 다양한 식물의 MeOH 추출물에 대한 1∼2차 장관면역 활성 검색과정을 통하여 활성이 가장 높은 시료는 솔잎으로부터 확인되었고, 솔잎의 활성은 식용식물용매추출물 중 가장 활성이 우수한 귤피의 냉수추출물과도 비교될 수 있는 활성을 나타내었다.
다음으로 in vitro에서의 Peyer's patch와 시료의 반응으로부터 얻은 상등액 또는 경구투여 한 마우스로부터 채취한 Peyer's patch만의 배양 상등액과 골수세포 현탁액 및 RPMI-1640 medium을 각각 50 μL, 100 μL 및 50 μL씩 96 well plate에 분주하고 37oC-5% CO2 incubator에서 6일간 배양시켰다.
동결건조한 각각의 솔잎 5 g에 20배의 증류수를 가한 후 냉수추출물(PD-CW)은 균질기(Ultra-turrax T-50; Janke & Kunkel GmbH & Co. KG-IKA-Labortechnic, Staufen, Germany)로 파쇄(5,000 rpm, 5분, 6,000 rpm 5분, 7,000 rpm 20분) 후 원심분리(7,000×g)하고 상등액을 농축, 동결건조하여 조제하였으며, 열수추출물(PD-HW)은 균질기로 파쇄 후 2회 반복으로 decoction 처리하고 여과한 후 농축, 원심분리 및 동결건조 하여 조제하였다.
이 현탁액을 200 mesh 금속체로 여과 후 HBSS로 세척하고 세포농도를 2×10⁶ cells/mL RPMI-1640 medium으로 조정하여 96 well plate에 180 μL씩 분주하고 적당히 희석된 시료 20 μL를 첨가하여 37^oC-5% CO₂ incubator에서 5일간 배양하였다. 동시에 활성의 유무 및 정도를 나타내기 위하여 시료 대신에 saline만을 첨가한 saline 대조군도 배양하였으며, 시료 및 saline과의 배양 후 회수한 상등액을 골수세포 증식용으로 사용하였다(17). 한편 활성 획분인 PD-M을 0.
따라서 본 연구에서도 솔잎으로부터 분획된 MeOH 추출물인 PD-M을 1주일간 경구투여한 후 실험동물로부터 분리한 Peyer's patch의 배양상등액의 cytokine 생성능을 ex vivo에서 확인하였다.
이러한 결과는 Koh 등(27)이 보고한 동충하초 열수추출물 경구투여에 따른 장관면역 활성결과와 유사한 것으로 PD-M 또한 crude fraction으로서 많은 물질을 함유하고 있기 때문에 투여양의 증가와 함께 활성 성분과 비활성 성분과의 함량비 등에 따른 결과로 추정하고 있으나 유의적인 차이를 보이지 않기 때문에 향후 PD-M의 정제에 따른 활성성분의 규명과 다수의 실험동물에 경구투여한 후 장관면역 활성을 다시 확인할 필요가 있을 것으로 사료된다. 또한 ex vivo 결과, 유의성은 없었으나 0.5 g/kg of BW의 적은 농도로도 EtOH 대조군보다 활성이 증가되었기 때문에(Fig. 2A), 경구투여 기간에 대한 효과를 확인하기 위하여 적은 농도임에도 불구하고 EtOH 대조군보다 높은 장관면역 활성을 나타낸 PD-M 0.5 g/kg of BW의 농도로 1주일과 2주일 경구투여한 후 실험동물에 대한 장관면역 활성을 검토하였다. 그 결과, 2주간 투여한 군(1.
또한, 동일종 마우스의 양다리 대퇴부 뼈로부터 골수세포를 회수하고 위와 같이 여과, 세척하여 2.5×105 cells/mL RPMI-1640 medium의 골수세포 현탁액을 조제하였다.
또한, 장관면역 활성은 마우스의 Peyer's patch 세포 및 골수세포를 회수한 후 시료 또는 Peyer's patch 배양 상등액과의 초대 배양으로 측정하기 때문에 Peyer's patch 및 골수세포배양과 시료에 의한 세포들의 자극이 원활하게 이루어졌는지 여부와 시료의 활성정도를 평가하기 위하여 endotoxin인 lipopolysaccharide(LPS, Sigma Co.)를 적당한 농도로 희석하여 positive control로 사용하였다.
8)을 첨가하고 배양하였다. 배양 30분 후 3 M NaOH로 반응을 중지시키고 405 nm에서 microplate reader(3550-UV, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)로 흡광도를 측정하여 cytokine 생성능을 확인하였다.
사료는 제일제당의 펠렛사료를 사용하였고 물은 정제수를 자유롭게 섭취하도록 하였으며 환경은 항온, 항습조건(온도 22oC±0.5oC, 상대습도 55%±5%)이 유지되는 chamber를 사용하였고, 인공조명하에서 명암교대(1일 11시간씩, 오전 9시～오후 8시)를 유지하였다.
다양한 식물의 MeOH 추출물에 대한 1∼2차 장관면역 활성 검색과정을 통하여 활성이 가장 높은 시료는 솔잎으로부터 확인되었고, 솔잎의 활성은 식용식물용매추출물 중 가장 활성이 우수한 귤피의 냉수추출물과도 비교될 수 있는 활성을 나타내었다. 선정된 솔잎의 MeOH 추출물(PD-M)의 최적 추출조건을 검토하기 위하여 솔잎에 MeOH를 5배 첨가한 후 재료 및 방법에서 기술한 추출방법에 따라 조제한 각각의 MeOH 추출물을 대상으로 장관면역 활성을 측정하였다. 그 결과 가장 우수한 활성을 보인 추출방법은 원료에 대한 5배의 MeOH을 첨가한 후 2시간씩 5회 환류과정을 반복처리 한 획분(saline 대조군의 1.
솔잎으로부터 분획된 PD-M을 마우스에 경구투여하고 Peyer's patch를 분리하여 ex vivo에서의 장관면역 활성도 관찰하였다.
식용식물을 대상으로 Peyer's patch를 경유한 장관면역 활성을 검색하고 유효성분을 분리하여 기능성식품의 소재로 개발하기 위하여 먼저 다양한 식용식물을 대상으로 1차, 2차 검색과정을 거쳐 장관면역 활성이 높은 후보시료를 선정하였다(data not shown).
즉, 배양 종료 18시간전에 Alamar BlueTM 용액 20 μL를 첨가한 다음, 형광세기를 excitation 544 nm와 emission 590 nm에서 측정한 후 Spectrafluor plus로 측정하고 대조군(in vitro, saline; ex vivo, 3% EtOH)과의 차이로부터 골수세포의 증식도를 비교하여 정량함으로써 장관면역 활성화도를 측정하였다.
한편 활성 획분인 PD-M을 0.5 g, 1.0 g과 2.0 g/kg of BW의 농도로 경구투여 하여 장관면역 활성을 측정하기 위한 시료의 조제는 시료 용해도와 마우스 독성을 고려하여 3% EtOH로 용해시키고 1군당 2마리씩 cage별로 나누어 1주일간 200 μL씩 투여하였으며 대조군으로서는 3% EtOH만을 동일 양으로 투여하였다.
한편, 세포배양을 위한 5%-CO2 incubator는 Vision Scientific(Bucheon, Gyeonggi-do, Korea)의 제품을, 형광도 측정은 TECAN의 Spectrafluor plus(Grödingen, Austria)를 사용하여 측정하였다.
KG-IKA-Labortechnic, Staufen, Germany)로 파쇄(5,000 rpm, 5분, 6,000 rpm 5분, 7,000 rpm 20분) 후 원심분리(7,000×g)하고 상등액을 농축, 동결건조하여 조제하였으며, 열수추출물(PD-HW)은 균질기로 파쇄 후 2회 반복으로 decoction 처리하고 여과한 후 농축, 원심분리 및 동결건조 하여 조제하였다. 한편, 솔잎의 MeOH 추출물은 5배의 MeOH을 솔잎에 첨가한 후 환류장치에 연결하여 2시간씩 5회 추출하고 농축 및 동결건조 하여 MeOH 추출물로 조제하였다(PD-M). 가장 우수한 장관면역 활성을 보인 MeOH 추출물의 최적 추출방법을 검토하기 위하여 솔잎에 MeOH을 첨가한 후 상기의 균질기로 파쇄 및 균질화시킨 방법, 솔잎과 MeOH를 삼각플라스크에 넣고 reciprocal shaker에서 교반시킨 방법 및 솔잎을 환류장치에서 MeOH로 2시간씩 5회 추출시킨 방법 등을 사용, 추출한 후 농축, 동결건조 하여 MeOH 추출물을 조제하였다.
활성 획분인 PD-M을 마우스 체중(body weight, BW)에 대하여 0.5 g, 1.0 g과 2.0 g/kg of BW의 농도로 경구투여하기 위하여 시료의 용해도와 마우스 독성을 고려한 후 3% EtOH로 용해시키고 대조군으로 3% EtOH을 사용하여 한 군당 마우스 2마리씩 cage별로 나누어 일주일간 200 μL씩 경구투여한 후 Peyer's patch 상등액의 골수세포 증식도를 측정하였다.

대상 데이터

한편, 골수세포 증식을 측정하기 위한 Alamar Blue^TM는 Alamar Bio-Sciences Inc.(Sacramento, CA, USA)의 제품을 사용하여 측정하였다.
생후 5주령의 건강상태가 양호한 C3H/He의 암컷 마우스를 (주)대한바이오링크(Eumseong, Korea)로부터 구입하여 사용하였다. 사료는 제일제당의 펠렛사료를 사용하였고 물은 정제수를 자유롭게 섭취하도록 하였으며 환경은 항온, 항습조건(온도 22^oC±0.

데이터처리

실험결과들은 4개 군에 대한 실험을 통하여 평균치±SD(standard deviation)로 나타내었고 Student's t-test를 이용, p<0.05 또는 p<0.01 수준에서 대조군(saline 또는 3% EtOH)과 각각의 시료간의 유의성을 검정함으로써 솔잎으로부터 분획된 MeOH 추출물의 Peyer's patch를 경유한 장관면역 활성으로 나타내었다.

이론/모형

다음으로 in vitro에서의 Peyer's patch와 시료의 반응으로부터 얻은 상등액 또는 경구투여 한 마우스로부터 채취한 Peyer's patch만의 배양 상등액과 골수세포 현탁액 및 RPMI-1640 medium을 각각 50 μL, 100 μL 및 50 μL씩 96 well plate에 분주하고 37^oC-5% CO₂ incubator에서 6일간 배양시켰다. In vitro 및 경구투여에 의한 골수세포의 증식도 측정은 Alamar Blue^TM reduction assay를 사용하였다(18). Alamar Blue^TM는 fluorogenic redox indicator로서 배양 중인 세포의 성장과 증식을 측정할 수 있는 시약으로 Alamar Blue의 산화된 형태는 검푸른 색이고 형광성이 약한 반면, 환원된 형태는 적색으로 형광성이 높기 때문에 세포의 viability를 반영해 줌으로써 optical density와 형광성에 의거하여 측정할 수 있다.
PD-M 획분을 다양한 농도에 따라 1주일간 경구투여 하고 각각의 마우스에서 Peyer's patch를 회수한 후 배양한 상등액으로부터 골수세포 증식에 영향을 미칠 수 있는 cytokine을 multiple sandwich 원리를 적용하여 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 방법으로 측정하였다(19).

성능/효과

1∼2차 검색과정에서 선정된 시료를 대상으로 장관면역 활성을 재검색한 결과(시료농도 100 μg/mL), 냉수추출물에서는 귤피(Citrus unshiu peels, saline 대조군의 1.29배), 둥글레(Polygonatum japonicum, 1.19배)와 두충(Eucommia ulmoides Oliver, 1.16배)이, 열수추출물에서는 귤피(1.20배)가 각각 유의적으로 saline 대조군(시료 없이 saline만의 장관면역 활성)보다 높은 활성을 나타내었다.
¹⁾Oral administration of 3% EtOH without sample. ²⁾0.5 g of PD-M/kg of BW was orally administered per day for a week or 2 weeks. ●: IL-6, ▽: GM-CSF.
¹⁾Oral administration of 3% EtOH without sample. ²⁾0.5 g, 1.0 g and 2.0 g of PD-M/kg of body weight (BW) were orally administered per day for 1 week and 2 weeks. *p<0.
20배)가 각각 유의적으로 saline 대조군(시료 없이 saline만의 장관면역 활성)보다 높은 활성을 나타내었다. MeOH 추출물 중에서는 솔잎(P. densiflora needles)이 1.19배로 가장 높았으나 saline 대조군과 통계학적 유의성을 갖지 않았기 때문에(Table 1A) 다시 솔잎만을 계통추출 하여 활성을 검토한 결과, saline 대조군보다 유의적으로 높은 7.2배의 활성을 나타내어(Table 1B) 솔잎의 MeOH 추출물이 가장 우수함을 알 수 있었다. 일반적으로 생약으로부터 분획된 냉수 및 열수추출물의 경우에는 다당 또는 단백다당 등이 면역 활성에 관여한다고 보고(20,21)되고 있으나 MeOH 추출물의 면역 활성과 관련된 연구는 매우 적은 실정이다.
PD-M을 농도별로 경구투여한 후 분리한 Peyer's patch를 6일간 배양한 후 배양상등액 중에서 골수세포 증식활성에 영향을 미치는 IL-6와 GM-CSF의 생성능을 측정해 비교한 결과, 1.0 g/kg of BW 투여군은 3% EtOH 대조군과 비교하여 유의적(p<0.05)으로 IL-6 cytokine의 분비가 증가(1.13배)하는 것을 확인할 수 있었으나, 0.5 g(1.04배) 또는 2.0 g/kg of BW(1.10배)의 투여군과 마찬가지로 IL-6 분비능에서는 큰 차이를 보이지 않고 있기 때문에 골수세포 증식활성의 직접적인 연관성을 제시하는 것이 분명하지는 않았다(Fig. 3).
선정된 솔잎의 MeOH 추출물(PD-M)의 최적 추출조건을 검토하기 위하여 솔잎에 MeOH를 5배 첨가한 후 재료 및 방법에서 기술한 추출방법에 따라 조제한 각각의 MeOH 추출물을 대상으로 장관면역 활성을 측정하였다. 그 결과 가장 우수한 활성을 보인 추출방법은 원료에 대한 5배의 MeOH을 첨가한 후 2시간씩 5회 환류과정을 반복처리 한 획분(saline 대조군의 1.30배)이었으며, 교반처리가 그 다음으로 유의적인 활성(1.25배)을 나타내어 처리방법에 따라 장관면역 활성에 영향을 미치고 있음을 알 수 있었다(Fig. 1). 일반적으로 식물로부터 유효성분을 추출하는 경우 다양한 추출방법에 따라 수율 또는 활성에 차이를 보이고 있다고 보고(24,25)되고 있기 때문에 추출방법의 선택은 기능성소재의 개발에 필수적으로 검토해야 할 분야로서 산업화를 위한 중요한 데이터라 할 수 있다.
그 결과, 2주간 투여한 군(1.4배)은 1주간 투여한 군(1.28배)에 비하여 유의적(p<0.05)으로 높은 활성을 보여주어(Fig. 2B), 활성물질의 지속적인 투여로 활성이 꾸준히 증가하고 있음을 나타내었다.
다양한 농도로 1주일 동안 PD-M을 경구투여 한 결과, 1.0 g/kg of BW/day의 용량으로 경구투여 한 C3H/He 마우스의 Peyer's patch로부터 얻은 세포배양 상등액에서 saline 대조군보다 2.5배의 높은 장관면역 활성을 보여주었다(p<0.05).
다양한 식물의 MeOH 추출물에 대한 1∼2차 장관면역 활성 검색과정을 통하여 활성이 가장 높은 시료는 솔잎으로부터 확인되었고, 솔잎의 활성은 식용식물용매추출물 중 가장 활성이 우수한 귤피의 냉수추출물과도 비교될 수 있는 활성을 나타내었다.
동결건조된 솔잎(Pinus densiflora needles)으로부터 냉수(PD-CW), 열수(PD-HW)와 메탄올추출물(PD-M)을 분획하여 in vitro에서 Peyer's patch를 경유한 장관면역 활성을 측정한 결과, PD-M 획분에서 유력한 골수세포 증식활성을 나타내었다.
또한 다양한 농도로 경구투여 된 Peyer's patch 세포의 배양액을 이용하여 측정한 IL-6 생산능은 1.0 g/kg of BW/day의 용량에서 1.13배로 증가하였으나 GM-CSF는 처리 용량에 따라 유의적인 값을 보이지는 않았다.
또한, IL-6와 GM-CSF는 순환면역계에서 중요한 역할을 갖는 cytokine으로서(30), 경구투여 된 PD-M은 장관 내 점막면역조직 뿐만 아니라 Peyer's patch를 경유한 기작에 의해 순환면역계를 조절할 수 있는 biological response modifier(BRM)로 작용할 수 있음을 확인할 수 있었다.
메탄올 추출방법을 확립하기 위하여 MeOH 추출물을 균질화, 교반 또는 환류 등의 방법으로 조제하였을때, 환류방법으로 조제된 MeOH 추출물에서 유의적(p<0.05)으로 가장 높은 장관면역 활성을 in vitro에서 확인할 수 있었다.
0 g/kg of BW의 농도로 경구투여하기 위하여 시료의 용해도와 마우스 독성을 고려한 후 3% EtOH로 용해시키고 대조군으로 3% EtOH을 사용하여 한 군당 마우스 2마리씩 cage별로 나누어 일주일간 200 μL씩 경구투여한 후 Peyer's patch 상등액의 골수세포 증식도를 측정하였다. 솔잎 MeOH 추출물을 0.5 g, 1.0 g 및 2.0 g/kg of BW의 농도로 경구투여한 후 ex vivo로 장관면역 활성을 측정한 결과(Fig. 2A), 3% EtOH 대조군(시료 없이 3% EtOH만을 동일 양 경구투여한 후 장관면역 활성)에 비하여 1.75배, 3.65배 및 3.18배의 활성증가를 나타내었으나 통계적인 유의성은 없었는데 이는 실험에 사용한 동물의 개체수가 적고 MeOH 추출물이 정제된 획분이 아니기 때문인 것으로 생각된다. 또한, 경구투여에 의한 장관면역 활성의 ex vivo 실험에서 PD-M 1.
이러한 결과로부터 PD-M의 경구투여에 의한 장관면역 활성의 경우처럼 실험동물의 개체 수가 적었고 조획분으로서 다양한 화합물이 혼합되어 있기 때문에 통계적으로 유의적인 값들이 제시되지는 않았으나, PD-M의 경구투여는 Peyer's patch의 면역세포를 자극하여 골수세포의 증식에 관련되어 있는 cytokine 등이 다양하게 생성되고 이러한 cytokine류가 전신순환 후 최종적으로 조혈세포계에 영향을 미치고 있는 가능성은 충분히 확인할 수 있었다.
특히, 1주간 경구투여로 최대 생산능을 보였던 GM-CSF(1.11배)와 달리 IL-6의 경우에는 1주(1.02배)보다 2주(1.11배)간의 경구투여로 계속 생산능이 증가하고 있음을 보여 PD-M에 의한 Peyer's patch 세포에서의 IL-6와 GM-CSF 생산 기작이 다르게 관여하고 있음을 추정할 수 있었다.
한편, PD-M 획분을 0.5 g/kg of BW의 농도로 1주와 2주간 경구투여 한 마우스로부터 Peyer's patch를 분리하여 배양한 후 상등액의 IL-6와 GM-CSF의 생성능을 측정비교한 결과(Fig. 4), IL-6와 GM-CSF의 모든 경우에서 1주 및 2주간의 경구투여로 모두 EtOH 대조군보다 증가되었음을 확인하였다.

후속연구

또한, IL-6와 GM-CSF는 순환면역계에서 중요한 역할을 갖는 cytokine으로서(30), 경구투여 된 PD-M은 장관 내 점막면역조직 뿐만 아니라 Peyer's patch를 경유한 기작에 의해 순환면역계를 조절할 수 있는 biological response modifier(BRM)로 작용할 수 있음을 확인할 수 있었다. 따라서 이상의 결과로부터 ex vivo에서 냉수 또는 열수의 물 추출물이 아닌 MeOH 추출물에 의한 장관면역 활성은 새로운 생체 조절성 물질의 소재화 가능성을 제시하여 주는 것으로 생각되며 향후 활성에 관여하는 물질의 분리 및 구조규명과 함께 기능성소재로서의 개발을 추진하고자 한다.
2A). 이러한 결과는 Koh 등(27)이 보고한 동충하초 열수추출물 경구투여에 따른 장관면역 활성결과와 유사한 것으로 PD-M 또한 crude fraction으로서 많은 물질을 함유하고 있기 때문에 투여양의 증가와 함께 활성 성분과 비활성 성분과의 함량비 등에 따른 결과로 추정하고 있으나 유의적인 차이를 보이지 않기 때문에 향후 PD-M의 정제에 따른 활성성분의 규명과 다수의 실험동물에 경구투여한 후 장관면역 활성을 다시 확인할 필요가 있을 것으로 사료된다. 또한 ex vivo 결과, 유의성은 없었으나 0.

질의응답

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	점막림프기관 종류 중 소화기관에 있는 장관 관련 림프상조직은 어디에 존재하며 어떤 역할을 담당하는가?	림프구와 항원간의 접촉과 림프구간의 상호작용이 용이하도록 조건과 환경을 제공하는 2차 림프조직계 중 점막림프기관(mucosa-associated lymphatic tissue, MALT)은 immune defense system에서 immunological barrier로서 중요한 생체 내 기능을 담당하고 있다(1). MALT 종류 중 소화기관에 위치하고 있는 장관 관련 림프상조직(gut-associated lymphatic tissue, GALT)은 생체 내에서 가장 큰 lymphoid tissue로 장관의 점막 부위에 존재하고 장관면역계 내 IgA response를 비롯하여 생체방어에 있어 매우 중요한 역할을 담당한다(2). 특히, 넓은 표면적을 갖는 소화관 점막은 외부로부터 다양한 많은 양의 미생물, 이종 단백질 또는 화합물들과 끊임없이 접촉하고 감작된다고 볼 때, 면역조직으로서의 의의는 매우 높다.
	솔잎은 무엇인가?	한편, 솔잎(pine needle)은 국내에 자생하는 상록침엽교목인 소나무(Pinus densiflora)의 잎으로 바늘과 닮았다고 해서 침엽으로 표현하고 있으며 예로부터 신선한 잎을 따서 그대로 쓰여 왔는데 괴혈병, 어린이 영양실조증, 피부질병, 공기정화제 등을 제조하는데 이용하였으며 솔잎차를 만들어 신경통, 관절염, 팔다리마비, 동맥경화증 등의 치료에 사용되었던 기록이 전해져 오고 있다(12). 솔잎에는 비타민 C와 K, 카로틴, 플라보노이드, 안토시안, 탄닌 및 정유 등이 함유되어 있으며 알칼로이드 성분은 들어 있지 않는 것이 특징이고 또한 다양한 종류의 terpene 화합물이 포함되어 있는 것으로 보고되었다(13).
	솔잎에는 어떤 성분들이 들어있는가?	한편, 솔잎(pine needle)은 국내에 자생하는 상록침엽교목인 소나무(Pinus densiflora)의 잎으로 바늘과 닮았다고 해서 침엽으로 표현하고 있으며 예로부터 신선한 잎을 따서 그대로 쓰여 왔는데 괴혈병, 어린이 영양실조증, 피부질병, 공기정화제 등을 제조하는데 이용하였으며 솔잎차를 만들어 신경통, 관절염, 팔다리마비, 동맥경화증 등의 치료에 사용되었던 기록이 전해져 오고 있다(12). 솔잎에는 비타민 C와 K, 카로틴, 플라보노이드, 안토시안, 탄닌 및 정유 등이 함유되어 있으며 알칼로이드 성분은 들어 있지 않는 것이 특징이고 또한 다양한 종류의 terpene 화합물이 포함되어 있는 것으로 보고되었다(13). 최근 솔잎의 항당뇨 효과, 솔잎증류액의 암세포에 대한 in vitro 세포독성, 지질저하 및 항산화 효과와 항균효과 등 많은 연구들이 보고(14-16)되면서 솔잎은 다양한 약리활성을 가진 천연식물로 인정되고 있다.

참고문헌 (30)

Kunisawa J, Nochi T, Kiyono H. 2008. Immunological commonalities and distinctions between airway and digestive immunity. Trends Immunol 29: 505-513.

상세보기
Mason KL, Huffnagle GB, Noverr MC, Kao JY. 2008. Overview of gut immunology. Adv Exp Med Biol 635: 1-14.

상세보기
Mestecky J, Elson CO. 2008. Peyer's patches as the inductive site for IgA responses. J Immunol 180: 1293-1294.

상세보기
David CW, Norman J, Hammon HM, Davis WC, Blum JW. 2003. Cell proliferation, apoptosis, and B- and T-lymphocytes in Peyer's patches of the ileum, in thymus and in lymph nodes of preterm calves, and in full-term claves at birth and on day 5 of life. J Dairy Sci 86: 3321-3329.

상세보기
Onishi S, Yokoyama T, Chin K, Yuji M, Inamoto T, Qi WM, Warita K, Hoshi N, Kitagawa H. 2007. Ultrastructural study on the differentiation and the fate of M cells in follicle-associated epithelium of rat Peyer's patch. J Vet Med Sci 69: 501-508.

상세보기
Jang MH, Kweon MN, Iwatani K, Yamamoto M, Terahar

상세보기
Corr SC, Gahan CC, Hill C. 2008. M-cells: origin, morphology and role in mucosal immunity and microbial pathogenesis.

상세보기
Kwa SF, Beverley P, Smith AL. 2006. Peyer's patches are required for the induction of rapid Th1 responses in the gut and mesenteric lymph nodes during an enteric infection. J Immunol 176: 7533-7541.

상세보기
Azzali G, Arcari ML, Caldara GF. 2008. The “mode” of lymphocyte extravasation through HEV of Peyer's patches and its role in normal homing and inflammation. Microvasc Res 75: 227-237.

상세보기
Sung JY, Yoon TJ, Yu KW, Lee KH, Lee H. 2006.

원문보기 상세보기
Kiyohara H, Matsuzaki T, Matsumoto T, Nagai T, Yamada H. 2008. Elucidation of structures and functions through Peyer's patches of responsible carbohydrate chains in intestinal immune system modulating polysaccharides from Japanese medicinal herbs. Yakugaku Zasshi 128: 709-716.

상세보기
Moon KS. 2001. Chemical composition and utilization of medical herbs. Ilwol Co. Ltd., Seoul, Korea. p 115.
Wei FX, Li MY, Song YH, Li HZ. 2008. Apoptosis and activity changes of telomerase induced by essential oil from pine needles in HepG2 cell line. Zhong Yao Cai 31: 1197-1200.

상세보기
Chung YJ, Bae MW, Chung JS, Chung MS. 2002. Cytotoxic effect of the distilled pine-needle extracts on several cancer cell lines in vitro. J Korean Soc Food Sci Nutr 31: 691-695.

원문보기 상세보기
Park NH, Lee SH. 2003. Antimicrobial activity of pine needle extract and horseradish on the growth of vibrio. J

원문보기 상세보기
Kim YM, Jeong YK, Wang MH, Lee WY, Rhee HI. 2006.

상세보기
Yu KW, Kiyohara H, Matsumoto T, Yang HC, Yamada H.

상세보기
Page B, Page M, Noel C. 1993. A new fluorometric assay

상세보기
Andoh A, Fujiyama Y, Kitoh K, Niwakawa M, Hodohara K, Bamba T, Hosoda S. 1993. Macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) enhances complement component C3 production by human monocytes/macrophages. Int J Hematol 57: 53-59.

상세보기
Ha ES, Hwang SH, Shin KS, Yu KW, Lee KH, Choi JS,

원문보기 상세보기
Dong Q, Yao J, Fang JN, Ding K. 2007. Structural characterization and immunological activity of two cold-water extractable polysaccharides from Cistanche deserticola Y. C. Ma. Carbohydr Res 342: 1343-1349.

상세보기
Bafna AR, Mishra SH. 2006. Immunostimulatory effect of methanol extract of Curculigo orchioides on immunosuppressed mice. J Ethnopharmacol 104: 1-4.

상세보기
Lee SH, Lillehoj HS, Cho SM, Chun HK, Park HJ, Lim CI, Lillehoj EP. 2009. Immunostimulatory effects of oriental plum (Prunus salicina Lindl.). Comp Immunol Microbiol Infect Dis 32: 407-417.

상세보기
Woo JH, Shin SL, Chang YD, Lee CH. 2009. Comparison of antioxidant effects by different extraction methods in flowers of Aster scaber, Aster maackii , Coreopsis lanceolata and Coreopsis tinctoria. Korean J Plant Res 22: 381-388.
Ju IO, Jung GT, Ryu J, Choi JS, Choi YG. 2005. Chemical components and physiological activities of bamboo (Phyllostachys bambusoides Starf) extracts prepared with different methods. Korean J Food Sci Technol 37: 542-548.
Lai YH, D'Souza MJ. 2008. Microparticle transport in the human intestinal M cell model. J Drug Target 16: 36-42.

상세보기
Koh JH, Yu KW, Suh HJ, Choi YM, Ahn TS. 2002. Activation of macrophages and the intestinal immune system by an orally administered decoction from cultured mycelia of Cordyceps sinensis. Biosci Biotechnol Biochem 66: 407-411.

상세보기
Hong T, Matsumoto T, Kiyohara H, Yamada H. 1998.

상세보기
Mosmann TR, Coffman RL. 1989. TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annu Rev Immunol 7: 145-173.

상세보기
Lotz M, Jirik F, Kabouridis P, Tsoukas C, Hirano T, Kishimoto T, Carson DA. 1988. B cell stimulating factor 2/interleukin 6 is a costimulant for human thymocytes and T lymphocytes. J Exp Med 167: 1253-1258.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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