[논문]HPLC를 이용한 의약품 주성분인 옥시라세탐의 Analytical Method Validation

김유곤; 서홍석; 원찬희

doi:10.5806/ast.2010.23.6.587

HPLC를 이용한 의약품 주성분인 옥시라세탐의 Analytical Method Validation
Analytical method validation of oxiracetam using HPLC 원문보기

분석과학 = Analytical science & technology, v.23 no.6, 2010년, pp.587 - 594

김유곤 (전북대학교 공과대학 환경공학과) , 서홍석 (전북대학교 공과대학 환경공학과) , 원찬희 (전북대학교 공과대학 환경공학과)

초록
AI-Helper

완제품의 주성분인 옥시라세탐이 함유된 의약품의 시험법실시 계획서에 따른 시험이 적절히 진행되었는지 시험법의 검증여부를 하고 본 protocol이 완제품 중 옥시라세탐의 정량분석을 위한 HPLC 분석법의 타당성을 검증하기 위한 문서화된 절차를 제공하는 것을 목적으로 한다. 본 실험에서는 옥시라세탐 함량시험에 사용된 분석법에 대하여 시스템 적합성, 정밀성, 직선성, 범위, 정확도, 특이성, 정량한계, 검출한계에 대하여 확인하였다. 실험결과 시스템적합성에서 정밀도(RSD%) 0.127%이하, 이론단수 15081, tailing factor 0.49, 그리고 분리능 32.41을 나타내었고, 정밀도실험에서는 RSD% 0.359% 이하의 결과를 보였다. 그리고 직선성 실험에서는 상관계수($R^2$)가 1을 나타내었고, 정확도 실험에서는 recovery test로서 최소 98.4%, 최대 99.6%로 기준을 만족하였다. 검출한계는 0.1 mg/L이였으며, 정량한계는 0.5 mg/L이었다. 그리고 특이성 실험에 있어서도 기준을 만족하는 결과를 나타내어 옥시라세탐을 주성분으로 하는 완제의약품 시험법은 적합한 시험법임이 검증되었다.

Abstract ▼ AI-Helper

This study aims to determine that the test of medicines containing oxiracetam as their main ingredient was properly performed according to protocol. Furthermore, the study is to provide the written form of protocol in order to examine the validity of the HPLC analytical method for the quantitative analysis of oxiracetam in the finished products. In this experiment, system suitability, precision, linearity, range, accuracy, specificity, quantitative limit, and detection limit of the analytical method which was used to determine the contained quality of oxiracetam, were examined. The result shows that system suitability indicates 0.127% RSD, plate number 15081, tailing factor 0.49, and resolution 32.41. The experiment of precision reveals the result of below 0.359% for repetitiveness and among the subjects. In the linearity experiment, a coefficient of correlation ($R^2$) indicates that it is 1. The accuracy experiment satisfies the standards of the recovery test, which is minimum 98.4% and maximum 99.6%. Detection limit is 0.1 mg/L and quantitative limit was found to be 0.5 mg/L. The experiment to check the specificity also satisfies the standards, so the finished product using oxiracetam as the main ingredient is verified as suitable.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

확인방법은 정량의 목적 성분을 추가하여 정량할 때 추가된 양이 정확하게 회수되는 지로 입증한다. 견고성은 다소의 조건 변동이 주어지더라도 측정결과가 변동되지 않도록 설정되어 있는가를 보는 것으로 검토한다.^1-3
본 Protocol은 의약품 중 옥시라세탐의 정량분석을 위한 HPLC 분석법의 타당성을 검증하기 위한 문서화된 절차를 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 실험의 목적은 의약품의 주성분인 옥시라세탐 시험법실시 계획서에 따른 시험이 적절히 진행되었는지 결과를 확인하고 시험법의 검증여부를 확인한다.

제안 방법

50 mL 메스플라스크에 옥시라세탐 표준품 50 mg을 넣고 물 5 mL로 녹인 후 아세토니트릴 40 mL와 내부표준액 1 mL를 넣어 녹인 후 이동상으로 표선 맞추어 제조한 시험용액을 6회 반복 실험하여⁹ 다음항목, Peak area RSD (%) 1.0%이하, RT RSD (%) 1.0%이하, 최저이론단수(N) 2000이상, Tailing factor(T) 2.0이하, Resolution (R) 1.5이상을 만족하는지를 실험 하였다. 실험결과 Table 1.
표준액 제조방법은 옥시라세탐 표준품 50 mg을 50 mL 메스플라스크에 넣어 물 5 mL를 넣어 녹이고 아세토니트릴 40 mL와 내부표준액 1 mL를 넣어 녹인 후 이동상으로 표선을 맞추었다. QL, DL 표준액은 표준액(1000 mg/L) 1 mL를 100 mL메스플라스크에 넣은 후 이 용액을 1 mL, 5 mL, 10 mL를 취하여 각각 0.1 mg/L, 0.5 mg/L, 10 mg/L이 되도록 제조하였다. 검출한계는 S/N비를 3이상, 정량한계를 S/N비를 10이상일 때를 적정 조건으로 설정하였다.
5 mg/L, 10 mg/L이 되도록 제조하였다. 검출한계는 S/N비를 3이상, 정량한계를 S/N비를 10이상일 때를 적정 조건으로 설정하였다. 그리고 용매피크의 높이의 평균값으로 각각 분석한 개별 data를 나눈 값으로 S/N비를 산출 하였다.
실험방법은 위약 2 mg과 옥시라세탐 표준품 각각 40 mg, 50 mg, 60 mg을 50 mL 메스플라스크에 넣고 물 5 mL로 녹인 후 아세토니트릴 40 mL와 내부표준액 1 mL를 넣어 녹인 후 이동상으로 표선을 맞추어 제조하였다. 실험결과는 회수율로서 평가하였으며,^7,8 얻어지는 평균값과 참값의 편차가 3.
완제의약품의 주원료인 옥시라세탐 함량시험에 사용된 분석법에 대하여 시스템 적합성, 정밀성, 직선성, 범위, 정확도, 특이성, 정량한계, 검출한계에 대하여 확인 하였다. 따라서 옥시라세탐을 주성분으로 하는 완제의약품 시험법은 적합한 시험임이 검증되었다.
^4,5 표준원액 제조는 표준품 500 mg을 100 mL메스플라스크에 넣은 후 물 10 mL로 넣어 녹이고 아세토니트릴 80 mL 넣어 녹인 후 이동상으로 표선을 맞춤. 표준용액은 50 mL 메스플라스크에 표준원액 각각 8 mL, 9 mL, 10 mL, 11 mL, 12 mL를 넣을 후 아세토니트릴 40 mL와 내부표준액 1 mL를 넣어 용해 후 이동상으로 표선을 맞추어 제조농도는 각각 800, 900, 1000, 1100, 1200 mg/L이 되었다. 기준은 Linearity 상관계수(R²) 0.

데이터처리

검출한계는 S/N비를 3이상, 정량한계를 S/N비를 10이상일 때를 적정 조건으로 설정하였다. 그리고 용매피크의 높이의 평균값으로 각각 분석한 개별 data를 나눈 값으로 S/N비를 산출 하였다.

성능/효과

107%의 결과를 나타내었다. 그리고 시험자간 비교실험에서(Table 3, 4)는 표준액 피크면적 RSD (%)는 0.135%, 내부표준액 피크면적 RSD (%)는 0.158%, 검액 6개의 대한 표준액 반복실험에서 피크면적 RSD (%)는 0.098~0.326%, 내부표준액 피크면적 반복실험에서는 RSD (%)는 0.007~0.109%로 결과를 모두 만족하였다.
36%의 결과를 보였다. 그리고 직선성 실험에서는 상관계수(R²)가 1을 나타내었고 범위에서도 기준범위를 만족하는 결과를 나타내었으며, 정확도 실험에서는 Recovery test로서 최소 98.4%, 최대 99.6%로 기준을 만족하였다. 검출한계를 S/N 3이상을 만족하는 농도로 0.
4%의 결과를 보였다. 그리고 직선성 실험에서는 상관계수(R²)가 1을 나타내었고 범위에서도 기준범위를 만족하였고, 정확도 실험에서는 Recovery test로서 최소 98.4%, 최대 99.6%로 기준을 만족하였다. 검출한계는 0.
정밀성은 재현성을 반복해서 분석할 때 재현성이 얼마나 좋으냐를 나타내는 것이다. 다시 말해 분석 값이 평균치에 얼마나 집중되어 있느냐를 나타내는 것이며, 실제 측정 시에는 n회 반복 시험하여 얻은 결과의 표준편차를 확인하여 2% 이내이면 적합한 것으로 본다. 표준편차가 크면 원인을 알 수 없는 오차인 우연오차가 크다는 것을 말 해준다.
완제의약품의 주원료인 옥시라세탐 함량시험에 사용된 분석법에 대하여 시스템 적합성, 정밀성, 직선성, 범위, 정확도, 특이성, 정량한계, 검출한계에 대하여 확인 하였다. 따라서 옥시라세탐을 주성분으로 하는 완제의약품 시험법은 적합한 시험임이 검증되었다.
본 실험결과 시스템적합성에서 정밀도(RSD%) 0.13%이하, 이론단수 15081, Tailing factor 0.49, 그리고 분리능 32.41을 나타내었고, 정밀도실험에서는 반복성의 시험자간실험에서 각각 0.2%, 0.4%의 결과를 보였다. 그리고 직선성 실험에서는 상관계수(R²)가 1을 나타내었고 범위에서도 기준범위를 만족하였고, 정확도 실험에서는 Recovery test로서 최소 98.
본 실험결과 시스템적합성에서 피크면적과 R.T의 정밀도(RSD%) 0.13%이하, 이론단수 15081, Tailing factor 0.49, 그리고 분리능 32.41을 나타내었고, 정밀도실험 중 반복실험의 RSD% 0.27~0.44%, R.T와 시험자간실험에서 각각 0.11%, 0.36%의 결과를 보였다. 그리고 직선성 실험에서는 상관계수(R²)가 1을 나타내었고 범위에서도 기준범위를 만족하는 결과를 나타내었으며, 정확도 실험에서는 Recovery test로서 최소 98.
상기 실험용액제조방법으로 제조한 표준용액과 내부표준액은 10회 반복 분석하여 표준액은 R.T와 Area의 RSD(%)가 1.0%이하를 만족하는지와 검액에서는 검액 6개를 각 3회식 반복 주입하여 검액 6개의 함량값 RSD(%) 2.0%이하일 때 만족하는 것으로 판정하였으며,^9,10 실험자간 결과 비교는 표준액, 검액 6개 각 3회씩 반복 주입하여 기준에 적합여부를 확인 하였다. 실험결과 Table 1에 나타난 것처럼 표준액 R.
실험결과 data는 직선성 표준액 중 내부표준물질에 대한 옥시라세탐의 면적비로 환산하였다. 실험결과 Linearity 상관계수(R²)은 1로 나타나 직선성에서는 좋은 결과를 나타내었다.
5이상을 만족하는지를 실험 하였다. 실험결과 Table 1.에서 보듯이 Peak area RSD%는 0.078% (I.S), 0.127%의 결과를 나타내었고, RT RSD (%)는 0.108% (I.S), 0.028%, 최저이론단수(N)는 15081.4, Tailing factor (T)는 0.49, Resolution(R)은 32.410로 상기의 기준을 모두 만족하는 결과를 나타내었다.
0%이하일 때 만족하는 것으로 판정하였으며,^9,10 실험자간 결과 비교는 표준액, 검액 6개 각 3회씩 반복 주입하여 기준에 적합여부를 확인 하였다. 실험결과 Table 1에 나타난 것처럼 표준액 R.T RSD (%)는 0.028~0.108%, Area RSD (%)는 0.078~0.127%로 만족하는 결과를 보였고, 검액 6개의 표준액 반복실험에서(Table 2) 피크면적 RSD (%) 0.063~0.151%, 내부표준액 RSD (%) 0.024~0.107%의 결과를 나타내었다. 그리고 시험자간 비교실험에서(Table 3, 4)는 표준액 피크면적 RSD (%)는 0.
실험방법은 위약 2 mg과 옥시라세탐 표준품 각각 40 mg, 50 mg, 60 mg을 50 mL 메스플라스크에 넣고 물 5 mL로 녹인 후 아세토니트릴 40 mL와 내부표준액 1 mL를 넣어 녹인 후 이동상으로 표선을 맞추어 제조하였다. 실험결과는 회수율로서 평가하였으며,^7,8 얻어지는 평균값과 참값의 편차가 3.0% 이내일 경우 적합으로 판정하였고, 실험결과 98.85~99.57%로 적합한 결과를 나타내었다.
매개정밀성은 동일 시료에 대해 다른 날짜, 다른 시험자, 다른 설비 등의 실험실 변동이 미치는 변화를 확인하는 것이며, 표준편차 2% 이내이면 적합한 것으로 본다. 정확성과 회수율은 실제실험에 있어서의 정확성은 동일검체에 대하여 동일한 방법으로 n회 반복 시험하여 그 평균치 X를 계산할 때 X가 실제 들어있는 물질의 양에 얼마나 접근하는지를 가지고 정확성을 알 수 있다. 통계적 처리는 실제 들어있는 표준치 X와 측정평균치 X(n,s)(s; 표준편차) 사이의 차이에 대한 유의성을 판정한다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	옥시라세탐 함량시험에 사용된 분석법에 대하여 확인한 부분은 무엇인가?	완제품의 주성분인 옥시라세탐이 함유된 의약품의 시험법실시 계획서에 따른 시험이 적절히 진행되었는지 시험법의 검증여부를 하고 본 protocol이 완제품 중 옥시라세탐의 정량분석을 위한 HPLC 분석법의 타당성을 검증하기 위한 문서화된 절차를 제공하는 것을 목적으로 한다. 본 실험에서는 옥시라세탐 함량시험에 사용된 분석법에 대하여 시스템 적합성, 정밀성, 직선성, 범위, 정확도, 특이성, 정량한계, 검출한계에 대하여 확인하였다. 실험결과 시스템적합성에서 정밀도(RSD%) 0.
	분석법의 개발 초기단계에는 어떠한 작업을 시행하는가?	분석법의 개발 초기단계에서는 분석법의 신뢰성을 높이기 위해 주로 분석법의 변동원인을 검토하고, 개발이 완료되고 표준화된 분석법 혹은 기존의 분석법을 특정 시험법의 분석법으로서 채택하는 것인지의 여부 결정에는 시험법의 목적에 맞추어 주로 random적 변동요인의 영향도 예상되는 작업을 시행한다. 시험법에서 채택하고 있는 분석법을 수정하거나 의약품의 제조방법을 변경할 경우 수정과 변경의 정도에 따른 revalidation이 필요하게 된다.
	validation이란 용어가 자주 쓰이게 된 이유는 무엇인가?	GMP제도가 정착되면서 validation이란 용어가 자주 쓰이게 되었다. 이는 GMP 체제하의 의약품제조관리가 validation에 의하여 뒷받침되어야 하는데에 기인된다. 즉, 의약품의 품질보장은 최종제품의 시험성적만으로 이를 보장할 수 없으며, 원료선정에서부터 제품완성에 이르기까지 제조 전 과정에서의 품질변화 요인을 과학적인 검증으로 validation이 뒷받침 되어야 하기 때문이다. 그리하여, GMP의 운영, 관리는 물론 의약품의 허가요건에도 validation이 영향을 주게 되었기 때문이다.

참고문헌 (10)

식약청, 의약품등 밸리데이션 실시에 관한 규정", 식품의약품안전청고시 제2009-173호.
식약청, "의약품 등 기준 및 시험방법 심사의뢰서 심사규정", 식품의약품안전청고시 제2006-56호.
대한약전 제 9 개정,"의약품등 분석법 밸리데이션에 대한 지침", 1366.
Alison E. Bretnall and Graham S. Clarke, Validation of Analytical Test Methods, Separation Sci. Tech., 10(11), 429-457(2011).
G. S. Clarke, The validation of analytical methods for drug substances and drug products in UK pharmaceutical laboratories, J. Pharm. Biomed. Anal., 12(5), 643-652(1994).

상세보기
Johan Lindholm, Monika Johansson, Torgny Fornstedt, Guidelines for analytical method development and validation of biotechnological synthesis of drugs: Production of a hydroxyprogesterone as model, J. Chromatogr. B, 791(1-2), 323-336(2003).

상세보기
Eric Rozet, Attilio Ceccato, Cdric Hubert, Eric Ziemons, Radu Oprean, Serge Rudaz, Bruno Boulanger, Philippe Hubert, Analysis of recent pharmaceutical regulatory documents on analytical method validation, J. Chromatogr. A, 1158(1-2), 111-125(2007).

상세보기
ISO/IEC 17025, General requirements for the competence of testing and calibration laboratories, JIS Q 17025-2000(1999).
J. W. Collier, R. B. Shah, A. R. Bryant, M. J. Habib, M. A. Khan and P. J. Faustino, Development and application of a validated HPLC method for the analysis of dissolution samples of levothyroxine sodium drug products, J. Pharm. Biomed. Anal. (2010).
VAndreas S. L. Mendez, Martin Steppe and Elfrides E. S. Schapoval, Validation of HPLC and UV spectrophotometric methods for the determination of meropenem in pharmaceutical dosage, J. Pharm. Biomed. Anal., 33(5), 947-954(2003).

상세보기

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증