식품 중 비만치료제 시부트라민의 유사물질인 데스메틸시부트라민을 규명하였다. 데스메틸시부트라민 함유 시료로부터 메탄올을 이용하여 대상성분을 추출하고 핵산으로 세척 등을 통하여 정제한 후 HPLC/PDA, HPLC/MS, HPLC/MSIMS 및 NMR로 확인 및 분석하였다. 또한, 식품 중 시부트라민 및 데스메틸시부라민을 분석하기 위하여 균질화한 시료를 디클로로메탄으로 추출하여 여과, 농축하고 메탄올로 희석하여 HPLC/UV로 분석하였다. 평균 회수 87~91%이었으며, 정량한계는 $2.5\;{\mu}g/kg$이었다. 분석 결과 식품시료 54건에서 시부트라민 및 데스메틸시부트라민이 검출되지는 않았다.
식품 중 비만치료제 시부트라민의 유사물질인 데스메틸시부트라민을 규명하였다. 데스메틸시부트라민 함유 시료로부터 메탄올을 이용하여 대상성분을 추출하고 핵산으로 세척 등을 통하여 정제한 후 HPLC/PDA, HPLC/MS, HPLC/MSIMS 및 NMR로 확인 및 분석하였다. 또한, 식품 중 시부트라민 및 데스메틸시부라민을 분석하기 위하여 균질화한 시료를 디클로로메탄으로 추출하여 여과, 농축하고 메탄올로 희석하여 HPLC/UV로 분석하였다. 평균 회수 87~91%이었으며, 정량한계는 $2.5\;{\mu}g/kg$이었다. 분석 결과 식품시료 54건에서 시부트라민 및 데스메틸시부트라민이 검출되지는 않았다.
It has been elucidated desmethylsibutramine in food, that is an analogue of sibutramine used for anti-obesity drug. After separating and purifying in food samples, it was analyzed and identified by the instrument such as HPLC/PDA, HPLC/MS, HPLC/MS/MS and NMR. To analyze sibutamine and desmathylsibut...
It has been elucidated desmethylsibutramine in food, that is an analogue of sibutramine used for anti-obesity drug. After separating and purifying in food samples, it was analyzed and identified by the instrument such as HPLC/PDA, HPLC/MS, HPLC/MS/MS and NMR. To analyze sibutamine and desmathylsibutramine in foods, they were analyzed and identified by HPLC/PDA after extracting in dichloromethane, filtering, concentration and diluting in methanol. The overall recoveries were ranged from 87% to 91% and the limit of quantitation was $2.5\;{\mu}g/kg$. As results, sibutramine and desmethylsibutramine was not detected in all the selected 54 food samples.
It has been elucidated desmethylsibutramine in food, that is an analogue of sibutramine used for anti-obesity drug. After separating and purifying in food samples, it was analyzed and identified by the instrument such as HPLC/PDA, HPLC/MS, HPLC/MS/MS and NMR. To analyze sibutamine and desmathylsibutramine in foods, they were analyzed and identified by HPLC/PDA after extracting in dichloromethane, filtering, concentration and diluting in methanol. The overall recoveries were ranged from 87% to 91% and the limit of quantitation was $2.5\;{\mu}g/kg$. As results, sibutramine and desmethylsibutramine was not detected in all the selected 54 food samples.
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문제 정의
부정물질을 규명하여 식품 중 기준. 규격 및 시험법을 식품공전에 설정하고 있다 이에 본 연구에서는 식품 중에서 검출된 비만치료제 시부트라민 유사물질인 미지 물질을 데 스메틸시 부트라민으로 규명 하고 유통식품 중에서 분석한 결과를 보고하고자 한다.
제안 방법
HPLC 및 photodiode array (PDA) 검줄기는 Nanospace Sl-2 (Shiseido Fine Chemicals, Yokohama, Japan)을 사용하였으며, C" 컬럼은 Type UG120 (Shiseido Fine Chemicals, Tokyo, Japan)을 시용하였다. Mass Spectrometer는 Finnigan TSQ Quantum Ultra (Thermo, Germany)를 사용하였다.
이동상은 초기에 A용액 30% (B용액 70%)에서 시작하여 15분 후에 A용액 55%(B용액 45%)로, 28분 후에 A용액 100%로, 31분 후에 A용액 30% (B용액 70%)가 되도록 gradient 조건을 조정하였다. UV 200~400 nm에서의 PDA 스펙트럼을 확인하였으며 동일 조건에서의 표준물질 스펙트럼과 비교함으로서 정성 및 정량분석하였다. 유속은 1.
부트라민을 규명 하였다. 데스메 틸시 부트라민 함유 시료로부터 메탄올을 이용하여 대상성분을 추출하고 헥산으로세척 등을 통하여 정제한 후 HPLC/PDA, HPLC/MS, HPLC/MS/MS 및 NMR로 확인 및 분석하였다. 또한, 식품중 시부트라민 및 데스메틸시부트라민을 분석하기 위하여균질화한 시료를 디클로로메탄으로 추출하여 여과, 농축하고 메탄올로 희석하여 HPLC/UV로 분석하였다.
데스메 틸시 부트라민 함유 시료로부터 메탄올을 이용하여 대상성분을 추출하고 헥산으로세척 등을 통하여 정제한 후 HPLC/PDA, HPLC/MS, HPLC/MS/MS 및 NMR로 확인 및 분석하였다. 또한, 식품중 시부트라민 및 데스메틸시부트라민을 분석하기 위하여균질화한 시료를 디클로로메탄으로 추출하여 여과, 농축하고 메탄올로 희석하여 HPLC/UV로 분석하였다. 평균 회수율은 87~91%이었으며, 정량한계는 2.
미지 물질의 분자구조 규명을 위하여 국외정보에 따라 사전 예측적으로 합성하여 보유하고 있는 표준물질의 H-NMR 스펙트럼과 비교 . 확인하였다.
식품 중 비만치료제 시부트라민의 유사물질인 데스메틸시 부트라민을 규명 하였다. 데스메 틸시 부트라민 함유 시료로부터 메탄올을 이용하여 대상성분을 추출하고 헥산으로세척 등을 통하여 정제한 후 HPLC/PDA, HPLC/MS, HPLC/MS/MS 및 NMR로 확인 및 분석하였다.
1% 개미산이 함유된 수용액(B)을 사용하였다. 이동상은 초기에 A용액 15%(B용액 85%)를 3분간 유지시킨 후, 15분 후에 A용액 30%(B용액 70%)로, 20분 후에 A용액 40%(B용액 60%)로, 30분 후에 A용액 65%(B용액 35%)로, 35분 후에 A용액 100%가 되도록 gradient 조건을 조정하였다. ESI (Electron spray ionization) 모드로 이온화하였으며, spray voltage는 4, 000 V 이 었고 capillary 온도는 34CTC이 었다.
1% 인산용액(B)을 사용하였다. 이동상은 초기에 A용액 30% (B용액 70%)에서 시작하여 15분 후에 A용액 55%(B용액 45%)로, 28분 후에 A용액 100%로, 31분 후에 A용액 30% (B용액 70%)가 되도록 gradient 조건을 조정하였다. UV 200~400 nm에서의 PDA 스펙트럼을 확인하였으며 동일 조건에서의 표준물질 스펙트럼과 비교함으로서 정성 및 정량분석하였다.
대상 데이터
25g을 취해 50% 메탄올 용액(25mL)에 용해하고 30분간 진탕추출한 후 여과하여 시험용액으로 하였다. HPLC/PDA 분석을 위하여 컬럼 규격은 4.6 mm i.d. x 250 mtn, 5 pm이었으며 , 이동상으로는 95% 아세토니트릴 (A)과 0.1% 헥산설폰산나트륨이 함유된 0.1% 인산용액(B)을 사용하였다. 이동상은 초기에 A용액 30% (B용액 70%)에서 시작하여 15분 후에 A용액 55%(B용액 45%)로, 28분 후에 A용액 100%로, 31분 후에 A용액 30% (B용액 70%)가 되도록 gradient 조건을 조정하였다.
Japan)을 시용하였다. Mass Spectrometer는 Finnigan TSQ Quantum Ultra (Thermo, Germany)를 사용하였다. NMR 은 Advanced 400 spectrometer (9.
NMR 분석을 위한 용매로는 dimethylsulfoxide-d6 사용하였으며 기 기 분석 은 서 울대 학교 약학대 학에서 수행 하였다. 미지 물질의 분자구조 규명을 위하여 국외정보에 따라 사전 예측적으로 합성하여 보유하고 있는 표준물질의 H-NMR 스펙트럼과 비교 .
. x 250 mm, 5 #이 었으며 , 이 동상으로는 0.1% 개 미 산이함유된 아세토니트릴 용액 (A)과 0.1% 개미산이 함유된 수용액(B)을 사용하였다. 이동상은 초기에 A용액 15%(B용액 85%)를 3분간 유지시킨 후, 15분 후에 A용액 30%(B용액 70%)로, 20분 후에 A용액 40%(B용액 60%)로, 30분 후에 A용액 65%(B용액 35%)로, 35분 후에 A용액 100%가 되도록 gradient 조건을 조정하였다.
확인하였다. 또한, 미지물질의 COSY DEPT, HMQC도 구조규명에 이용하였다.
분석용 시약은 HPLC급 또는 잔류농약급을 J.T. Baker (Phillipsburg, NJ, USA) 및 Wako Pure Chemical Industries Inc. (Osaka, Japan)에서 구매하였다. 표준물질 시부트라민메실산(99.
또한, 비만치료제 유사 물질 등의 분석 은 다이 어 트용으로 시 중에 유통. 판매 되는 식품 54건을 대상으로 하였다.
미지물질의 분자구조를 더욱 확고히 규명하기 위하여 미지물질과 분자구조가 일치하는 합성물질과 1H-NMR 스펙트럼을 비교한 결과는 Fig. 5 및 Table 2에 나타나 있는데, 미지물질과 합성물질의 chemical shift, split pattern 및 integration이 일치함을 알 수 있었다. 미지물질의 "C-NMR 스펙트럼(Fig.
5 μg/kg이었다. 분석결과 식품시료 54건에서 시부트라민 및 데스메틸시부트라민이 검출되지는 않았다.
시중에 유통되고 있는 다이어트용 식품 중 본 연구에서규명한 데스메틸시부트라민을 분석한 결과 분석된 모든식품 시료에서 불검출되었다. 이러한 결과는 향후에도 식품 중 부정물질 분석에 매우 유용하게 적용되어 유통 식품의 안전을 확보할 수 있으리라 사료된다.
이에 시부트라민 유사물질의 분자구조 규명을 위하여 시부트라민과 HPLC/MS/MS 스펙트럼을 비교한 결과, Fig. 4 에 나타나 있듯이 미지물질이 시부트라민의 분자구조의 특징을 나타내는 분자이온의 패턴과 일치함을 알 수 있다. 따라서 시부트라민의 분자량과 비교할 때 차이가 14이므로-N(CH3)2 (m/z 44)가 -NH-CH3 (m/z 30)로 변형되었음을추정할 수 있다.
후속연구
데스메틸시부트라민을 분석한 결과 분석된 모든식품 시료에서 불검출되었다. 이러한 결과는 향후에도 식품 중 부정물질 분석에 매우 유용하게 적용되어 유통 식품의 안전을 확보할 수 있으리라 사료된다.
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