[논문]구강에서 채취한 혐기성 세균에 대한서양산 고추냉이 뿌리 추출물의 항균효과

장용걸; 박호원; 신일식; 이주현; 서현우

구강에서 채취한 혐기성 세균에 대한서양산 고추냉이 뿌리 추출물의 항균효과
THE ANTIMICROBIAL EFFECT OF HORSERADISH(ARMORACIA RUSTICANA) ROOT EXTRACTS AGAINST ANAEROBES ISOLATED FROM ORAL CAVITY 원문보기

大韓小兒齒科學會誌 = Journal of the Korean academy of pediatric dentistry, v.37 no.2, 2010년, pp.168 - 178

장용걸 (강릉원주대학교 치과대학 소아치과학교실 및 구강과학연구소) , 박호원 (강릉원주대학교 치과대학 소아치과학교실 및 구강과학연구소) , 신일식 (강릉원주대학교 해양생명공학부 식품미생물학교실) , 이주현 (강릉원주대학교 치과대학 소아치과학교실 및 구강과학연구소) , 서현우 (강릉원주대학교 치과대학 소아치과학교실 및 구강과학연구소)

초록
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서양산 고추냉이(Horseradish, Armoracia rusticana)의 주성분인 allylisothiocyanate(AIT)는 각종 세균에 대한 살균 효과로 주목받고 있다. 이전 연구들을 통해 구강내 다양한 세균 및 진균류에 대한 항균성이 입증되었으나 근단내 병소를 유발 하는 혐기성 세균에 대한 연구는 미진한 실정이다. 본 연구에서는 사람의 근단 병소에서 직접 분리한 E. faecalis와 F. nucleatum에 대한 서양산 고추냉이 뿌리 추출물의 항균활성을 표준균주와 비교해보고 이를 대표적인 항균제인 클로르헥시딘과 비교하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 서양산 고추냉이 뿌리 추출물은 E. faecalis 임상 분리균주에 대하여 표준균주와 같거나 약간 높은 농도에서 항균효과를 나타냈고, $625.0\sim1,250.0{\mu}g/ml$의 농도에서 클로르헥시딘($7.8\sim15.6{\mu}g/ml$)과 대등한 항균효과를 가지는 것으로 나타났다. 2. 서양산 고추냉이 뿌리 추출물은 F. nucleatum 임상 분리균주에 대하여 표준균주와 같거나 약간 높은 농도에서 항균효과를 나타냈고, $78.1\sim312.5{\mu}g/ml$의 농도에서 클로르헥시딘($7.8\sim15.6{\mu}g/ml$)과 대등한 항균효과를 가지는 것으로 나타났다. 이번 연구로 표준균주 뿐만 아니라 구강에서 직접 분리한 혐기성 세균에 대한 서양산 고추냉이 뿌리 추출물의 항균성을 확인할 수 있었고, 추후 근관 세척제나 소독제로 서양산 고추냉이 뿌리 추출물을 이용할 수 있는 가능성을 보여주었다.

Abstract ▼ AI-Helper

Objective : The aim of this study was to determine the antimicrobical effect of horseradish root extracts against Enterococcus faecalis and Fusobacterium nucleatum isolated from oral cavity compared with reference strain, and compared with that of chlorhexidine. Method : Horseradish root extracts and chlorhexidine were sequentially diluted and tested against anaerobes(E. faecalis, F. nucleatum) isolated from children's oral cavity. The microbes were anaerobically incubated and the minimum inhibitory concentration(MIC) and minimum bactericidal concentration(MBC) were detected. Results :1. Horseradish root extracts showed antimicrobial effect against E. faecalis isolated strain at same or slightly higher concentration compared with MIC of reference strain. 2. $625.0\sim1,250.0{\mu}g/ml$ horseradish root extracts showed similar antimicrobial effect with chlorhexidine($7.8\sim15.6{\mu}g/ml$). 3. Horseradish root extracts showed antimicrobial effect against F. nucleatum isolated strain at same or slightly higher concentration compared with MIC of reference strain. 4. $78.1\sim312.5{\mu}g/ml$ horseradish root extracts showed similar antimicrobial effect with chlorhexidine($7.8\sim15.6{\mu}g/ml$). Conclusions : The results of this study confirm that horseradish root extracts has antimicrobial effect against anaerobes isolated from oral cavity as well as reference strain. And we found the potential of horseradish root extracts as a canal irrigant or disinfectant.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구는 사람의 감염된 치근관 내에서 직접 분리한 혐기성 세균과 이에 대응하는 표준균주에 대한 서양산 고추냉이 뿌리 추출물의 항균효과를 비교해보고, 이를 대표적인 구강용 항균제인 클로르헥시딘과 비교하여 서양산 고추냉이 뿌리 추출물을 이용한 근관용 세척제 개발에 기초자료를 마련하기 위해 시행 하였다.

가설 설정

이번 연구는 다음과 같은 한계점과 보완점들을 가지고 있다. 첫째, 연구에 사용된 균의 종류가 적다. 본 실험에 사용된 균은치근단 병변을 가진 환아의 근관내 또는 개방되지 않은 농양에서 채취한 것으로 모두 6명의 환자에서 채취한 균을 대상으로 실험하였다.

제안 방법

, Palo Alto, California, USA)을 사용하였다. Injection port와 FID의 온도는 각각 250℃, 260℃로 유지하였으며, carrier gas는 질소를 사용하였다.
의 방법을 사용하였다. MIC 측정 후 균주의 증식이 관찰되지 않은 배양액을 한 백금이 취하여 평판배지에 도말 한 후, 혐기성 상자에 넣어 37℃에서 각각 24시간, 48시간 동안 배양한 후 증식유무를 확인하였다.
세균의 동정은 16s rRNA 염기서열 분석으로 이루어졌다. PCR 반응은 PTC-225 Peltier Thermal Cycler(MJ Research, Inc., Waltham, Massachusetts, USA)를 사용하였고, 염기 서열 분석은 ABI PRISM BigDyeTM Terminator Cycle Sequencing Kit(Applied Biosystems, Inc., Foster City, California, USA)를 이용하여 진행하였다. 6명의 환자로부터총 14종류의 상이한 세균군락에 대한 평판배지를 얻었으며, 이중 분석결과가 나오지 않은 3개를 제외하고 나머지 11개의 배지에 대한 결과를 얻었다(Table 1).
RCM agar 평판배지에 도말한 단일 세균을 37℃ 혐기성 조건 하에서 48시간 동안 배양한 후, 세균의 동정을 위해 마크로젠사(Macrogen Co., Ltd., Seoul, Korea)에 의뢰하였다. 세균의 동정은 16s rRNA 염기서열 분석으로 이루어졌다.
5% sodium hypochlorite로 재차 소독한 후 5% sodium thiosulfate로 불활성화하였다. 멸균 소독한 bur로 분무 없이 치수강을 개방하고 file을 이용하거나 근관이 넓은 경우 멸균된 paper point를 근단부에 1분간 유지한 후 빼내어 근관내 세균을 채취하였고, 개방되지 않은 농양에서 세균을 채취한 경우 5% iodine tincture로 주변부 구강점막을 소독하고, 18G needle로 흡인하였다. 채취한 세균은 Reinforced Clostridial Medium(RCM, Oxoid, Ogdensburg, New York, USA) 0.
멸균된 96-well flat-bottom microplate(Greiner bio-one GmbH, Frickenhausen, Germany)의 첫 well은 blank(BHI 또는 RCM 배지만 200 μl) 로 설정하고, 두 번째 well은 negative control(BHI 또는 RCM 배지 100 μl와 접종액 100 μl)로 설정하였다.
멸균된 직경 10 mm filter paper disk(Whatman No.2)를 각 균주가 도말된 배지에 밀착시키고 서양산 고추냉이 뿌리 추출물 30 μl를 흡수시켜 혐기성 상자에 넣은 후, 37℃에서 각각 24시간, 48시간 동안 배양하였다.
이 때 서양산 고추냉이 뿌리 추출물 농도는 예비실험 결과와 박 등²⁸⁾의 이전 연구 설계를 참고로 각각 80,000 μg/ml, 20,000 μg/ml 농도로 설정하였다. 배양 후 disk 주변에 형성된 투명환(clear zone)의 유무로 항균효과 여부를 확인하였다.
본 연구에서는 서양산 고추냉이 뿌리 추출물을 이용하여 사람의 구강내에서 직접 분리한 혐기성 세균에 대한 항균효과를 알아보고, 표준균주에 대한 항균효과와의 차이를 평가하였으며, 이를 대표적인 구강용 항균제인 클로르헥시딘과 비교하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
서양산 고추냉이 뿌리 추출물 사용군과 동일한 방법으로 각 균주에 대한 클로르헥시딘의 최소살균농도를 측정하였다.
서양산 고추냉이 뿌리 추출물 사용군과 동일한 방법으로 각 균주에 대한 클로르헥시딘의 최소억제농도를 측정하였다. 클로르헥시딘은 BHI 배지로 단계 희석하여 E.
서양산 고추냉이 뿌리 추출물 사용군과 동일한 방법으로 각 균주에 대한 클로르헥시딘의 항균활성을 확인하였다.
, Seoul, Korea)에 의뢰하였다. 세균의 동정은 16s rRNA 염기서열 분석으로 이루어졌다. PCR 반응은 PTC-225 Peltier Thermal Cycler(MJ Research, Inc.
셋째, 이번 연구에서는 구강내에서 임상 분리한 혐기성 세균에 대한 서양산 고추냉이 뿌리 추출물의 항균성을 알아보기 위해 상용되는 근관 세척제 중 대표적인 구강내 항균제인 클로르헥시딘과 항균활성을 비교하였다. 그러나 근관용 세척제로의 가능성을 알아보기 위해서는 세균에 대한 항균력 뿐만 아니라 세포 독성, 조직 용해 능력에 대한 평가와 함께 NaOCl이나 수산화칼슘과 같은 다른 약제와의 비교 실험도 필요할 것이다.
채취한 세균이 담긴 에펜도르프 튜브를 바로 Anaerobic chamber(Bactron, Sheldon Manufacturing, Cornelius, Oregon, USA)로 운반하였다. 수 회 vortexing 한 후, 한 백금이 취해 RCM agar 평판배지에 도말하여 37℃ 혐기성 조건 (H2 5%, CO2 5%, N2 90%)하에서 48시간 동안 배양하였다. 이 때 성장한 세균군락 중에서 형태, 색깔 및 모양이 다른 군과 상이한 군락을 선별하여 한 백금이 취한 후 RCM agar 평판배지에 다시 도말하고 48시간 동안 배양하였다.
절대 혐기성 세균의 경우 산소에 상당히 민감하기 때문에 실험 중 산소노출을 최소화하려는 노력이 필요하다. 이 등²⁹⁾의 연구 설계 중 한계점으로 지적된 완전한 혐기성 작업조건을 만들어 주기 위해 모든 실험과정을 Anaerobic chamber 안에서 진행하였고, 이것이 본 연구에서 F. nucleatum에 대한 MIC, MBC 값이 이전 연구에 비해 다소 높게 나온 원인 중 하나로 생각 해 볼 수 있다.
이 때 서양산 고추냉이 뿌리 추출물 농도는 예비실험 결과와 박 등28)의 이전 연구 설계를 참고로 각각 80,000 μg/ml, 20,000 μg/ml 농도로 설정하였다.
접종액 100 μl를 각 평판배지에 분주하고 멸균된 spreader를 사용하여 균일하게 도말하였다.
본 연구에 사용된 정유형태의 서양산 고추냉이 뿌리 추출물은 각 균주에 맞는 배지로 희석하여 사용하였다. 정유의 경우 물에 쉽게 녹지 못하므로 에탄올과 혼합하면 균일하게 희석되어 희석시 발생하는 농도 오차를 줄일 수 있으나, 에탄올 자체의 항균작용으로 인한 상승효과가 생길 가능성이 있기 때문에 순수한 고추냉이 뿌리 추출물의 항균활성 평가를 위해 배지로희석하였다^27,28). 추출물의 희석시 microtube를 사용하여 잉여 공간으로 휘발할 수 있는 AIT 증기의 양을 최소화 하였고, 정유를 배지에 넣고 충분히 vortexing 하여 알갱이가 잘 분산되어 섞이도록 하였다^27,28).
최소억제농도 측정을 위한 96-well plate의 설계시 같은 plate 안에 동종의 표준균주와 분리균주를 함께 분주하여 항균제의 효과를 직접 비교 할 수 있도록 하였고, 서양산 고추냉이뿌리 추출물의 경우 AIT의 휘발성이 인접 well에 영향을 줄 수있기 때문에 가능한 멀리 떨어진 위치에 배치하였다. 그리고 편성 혐기성 세균인 E.
정유의 경우 물에 쉽게 녹지 못하므로 에탄올과 혼합하면 균일하게 희석되어 희석시 발생하는 농도 오차를 줄일 수 있으나, 에탄올 자체의 항균작용으로 인한 상승효과가 생길 가능성이 있기 때문에 순수한 고추냉이 뿌리 추출물의 항균활성 평가를 위해 배지로희석하였다^27,28). 추출물의 희석시 microtube를 사용하여 잉여 공간으로 휘발할 수 있는 AIT 증기의 양을 최소화 하였고, 정유를 배지에 넣고 충분히 vortexing 하여 알갱이가 잘 분산되어 섞이도록 하였다^27,28).
세균은 만성 또는 급성의치근단 염증이 있는 유치 또는 영구치의 근관내 또는 개방되지 않은 농양에서 채취 하였으며, 이전에 근관치료를 받지 않은 치아를 대상으로 하였다. 해당 치아에 러버댐을 장착하고 3% 과산화수소로 클램프, 러버 쉬트, 치관부 등 치아 주변을 소독하였다. 2.
헥산층 1 μl를 이용 하여 FID(Flame Ionization Detector)가 부착된 가스 크로마토그래피(HP 6890 series, Hewlett Packard Development Co., Palo Alto, California, USA)로 AIT의 농도를 측정하였고, column은 HP-Innowax capillary column(30 mm ×0.32 mm, 0.5 μm film thickness, Agilent Technologies, Inc., Palo Alto, California, USA)을 사용하였다.

대상 데이터

본 연구에 사용된 E. faecalis 임상 분리균주는 소아의 유구치협측 치은의 개방되지 않은 농양에서 채취하였다.
nucleatum KCTC 5103이며, 한국생명공학연구원 생물자원센터(KCTC, Daejeon, Korea)로부터 분양받아 사용하였다. E. faecalis 임상 분리균주와 표준균주는 배양배지로 Brain Heart Infusion broth(BHI, Difco, BD Diagnostic Systems, Loveton circle, Sparks, Maryland, USA)와 Brain Heart Infusion agar(BHI agar, Difco, BD Diagnostic Systems, Loveton circle, Sparks, Maryland, USA)를 사용하였고, F. nucleatum은 배양배지로 Reinforced Clostridial Medium(RCM, Oxoid, Ogdensburg, New York, USA)과 Reinforced Clostridial Medium agar(RCM agar, Oxoid, Ogdensburg, New York, USA)를 사용하였다. E.
Microtube를 이용하여 서양산 고추냉이 뿌리 추출물 원액을 BHI 배지로 단계 희석하여 E. faecalis 실험용으로 준비하였고, 같은 방법으로 RCM 배지로 단계 희석한 것을 F. nucleatum 실험용으로 준비하였다. 멸균된 96-well flat-bottom microplate(Greiner bio-one GmbH, Frickenhausen, Germany)의 첫 well은 blank(BHI 또는 RCM 배지만 200 μl) 로 설정하고, 두 번째 well은 negative control(BHI 또는 RCM 배지 100 μl와 접종액 100 μl)로 설정하였다.
강릉대학교 치과병원 소아치과에 내원한 환자들 중 전신적으로 건강이 양호한 자로서 전신질환, 약물 알러지, 특이체질 및 최근 3개월 이내에 항생제 및 기타 약물을 복용한 사실이 없는 소아를 대상으로 세균을 채취 하였다. 세균은 만성 또는 급성의치근단 염증이 있는 유치 또는 영구치의 근관내 또는 개방되지 않은 농양에서 채취 하였으며, 이전에 근관치료를 받지 않은 치아를 대상으로 하였다.
첫째, 연구에 사용된 균의 종류가 적다. 본 실험에 사용된 균은치근단 병변을 가진 환아의 근관내 또는 개방되지 않은 농양에서 채취한 것으로 모두 6명의 환자에서 채취한 균을 대상으로 실험하였다. 이는 아이들의 구강건강에 대한 부모들의 관심이 높아지면서 감염된 근관을 가진 환자를 발견하기가 어려웠고, 몇 명은 균 채취 도중 행동조절이 되지 않아 분리 도중에 중단하였으며, 균 채취 대상자 부모 중 일부는 자녀의 구강에서 균을 채취하는 것에 대해 거부감을 나타내어 사전 동의를 얻는데 실패하였기 때문이다.
또한 수산화칼슘 등의 항균제에 내성이 있는 것으로 밝혀져 있다⁴¹⁾. 본 연구에 사용된 F. nucleatum 한 종은 외상으로 함입된 후 치료되지 않은 유중절치 치근단에서 분리되었고, 나머지 한 종은 치수노출을 동반한 치관파절로 부분 치수절단술을 시행한 영구 중절치의 치근단 병소에서 분리하였다. 감염된 근관내에서 발견되는 모든 혐기성 세균에 대한 평가가 이루어지지는 않았으나 대표적인 통성 혐기성 구균인 E.
본 연구에서 임상 분리균주와의 항균효과 비교를 위해 사용된 표준균주는 E. faecalis KCTC 5289와 F. nucleatum KCTC 5103이며, 한국생명공학연구원 생물자원센터(KCTC, Daejeon, Korea)로부터 분양받아 사용하였다. E.
서양 와사비 분말(Biscoats Co., Ltd., Seoul, Korea)을 증류수와 혼합한 후 증류하여 추출한 정유를 서양산 고추냉이 뿌리 추출물 시료로 사용하였고, AIT 농도측정을 위해 AIT 표준 용액(Fluka Co., Haan, Germany)과 헥산(Hexane, Showa Co., Tokyo, Japan)을 사용하였다. 항균효과의 비교를 위해 1,000 μg/ml 클로르헥시딘 용액(Hexamedine, Bukwang Co.
강릉대학교 치과병원 소아치과에 내원한 환자들 중 전신적으로 건강이 양호한 자로서 전신질환, 약물 알러지, 특이체질 및 최근 3개월 이내에 항생제 및 기타 약물을 복용한 사실이 없는 소아를 대상으로 세균을 채취 하였다. 세균은 만성 또는 급성의치근단 염증이 있는 유치 또는 영구치의 근관내 또는 개방되지 않은 농양에서 채취 하였으며, 이전에 근관치료를 받지 않은 치아를 대상으로 하였다. 해당 치아에 러버댐을 장착하고 3% 과산화수소로 클램프, 러버 쉬트, 치관부 등 치아 주변을 소독하였다.
6명의 환자로부터총 14종류의 상이한 세균군락에 대한 평판배지를 얻었으며, 이중 분석결과가 나오지 않은 3개를 제외하고 나머지 11개의 배지에 대한 결과를 얻었다(Table 1). 이 가운데 감염된 치근관에 특징적으로 분포하는 세균인 E. faecalis 1종과 F. nucleatum 2종이 동정되어 이를 실험에 사용하였다.
서양산 고추냉이 뿌리 추출물 사용군과 동일한 방법으로 각 균주에 대한 클로르헥시딘의 최소억제농도를 측정하였다. 클로르헥시딘은 BHI 배지로 단계 희석하여 E. faecalis 실험용으로, RCM 배지로 단계 희석하여 F. nucleatum 실험용으로 사용하였다.
항균효과의 비교를 위해 1,000 μg/ml 클로르헥시딘 용액(Hexamedine, Bukwang Co., Ltd., Ansan, Korea)을 사용하였다.

데이터처리

이는 Anaerobic chamber와 혐기성 상자에서의 세균배양 실험 결과 후자의 환경에서 혐기성 세균성장이 더 잘 이루어진다는 이전 연구를 근거로 하였다⁵²⁾. 모든 임상 분리균주 및 표준균주에 대하여 동일한 과정을 3회 반복하여 평균과 표준편차를 구 하였다.

이론/모형

MBC의 측정은 Bamba 등³⁰⁾의 방법을 사용하였다. MIC 측정 후 균주의 증식이 관찰되지 않은 배양액을 한 백금이 취하여 평판배지에 도말 한 후, 혐기성 상자에 넣어 37℃에서 각각 24시간, 48시간 동안 배양한 후 증식유무를 확인하였다.
1). 본 실험에서는 이 추출물에 각각의 세균 배양배지를 가하여 double dilution법으로 희석하여 사용 하였다.
서양산 고추냉이 뿌리 추출물의 항균활성은 disk paper method를 이용하여 측정하였다. 각 균주를 전배양하여 640 nm(V530 UV/VIS spectrophotometer, Jasco, Tokyo, Japan) 파장에 대한 흡광도(A640)가 0.

성능/효과

1. 서양산 고추냉이 뿌리 추출물은 E. faecalis 임상 분리균주에 대하여 표준균주와 같거나 약간 높은 농도에서 항균 효과를 나타냈다.
2. 서양산 고추냉이 뿌리 추출물은 E. faecalis에 대하여 625.0~1,250.0 μg/ml의 농도에서 클로르헥시딘 (7.8~15.6 μg/ml)과 대등한 항균효과를 가지는 것으로 나타났다.
3. 서양산 고추냉이 뿌리 추출물은 F. nucleatum 임상 분리 균주에 대하여 표준균주와 같거나 약간 높은 농도에서 항균효과를 나타냈다.
4. 서양산 고추냉이 뿌리 추출물은 F. nucleatum에 대하여 78.1~312.5 μg/ml의 농도에서 클로르헥시딘(7.8~15.6μg/ml)과 대등한 항균효과를 가지는 것으로 나타났다.
, Foster City, California, USA)를 이용하여 진행하였다. 6명의 환자로부터총 14종류의 상이한 세균군락에 대한 평판배지를 얻었으며, 이중 분석결과가 나오지 않은 3개를 제외하고 나머지 11개의 배지에 대한 결과를 얻었다(Table 1). 이 가운데 감염된 치근관에 특징적으로 분포하는 세균인 E.
AIT 표준용액의 농도별 가스 크로마토그래피 결과를 수식화하여 서양산 고추냉이 뿌리 추출물의 AIT 함량을 적정하였으며, 그 결과 추출물은 약 560,000±1,208.3 μg/ml의 AIT를 함유하고 있었다(Fig. 1).
구강내에서 채취한 두 종류의 혐기성 세균에 대한 서양산 고추냉이 뿌리 추출물과 클로르헥시딘의 항균활성 유무를 알아보기 위해 disk paper method를 사용하였는데, 모두 disk 주위로 투명환을 형성함으로써 두 임상 분리균에 대해 항균활성이 있음을 확인하였다. 그러나 이전 연구들^25,27-29)에서와 같이 그 모양과 퍼짐 양상은 항균제에 따라 다르게 나타났다.
mutans 임상 분리균주에 대하여 표준균주와 같거나 약간 낮은 농도에서 항균효과를 나타낸다고 하였다. 그러나 본 연구에서는 E. faecalis, F. nucleatum 모두 서양산 고추냉이 뿌리 추출물에 대하여 임상 분리균주가 표준균주에 비해 더 큰 MIC, MBC 값을 기록하였다. 노 등⁵⁴⁾은 녹차 추출물을 이용한 항균활성 연구에서 분리된 균주가 표준균주에 비해 더 내성이 강하다고 하였고, 이는 표준균주에 비해 야생균주가 외부환경에 대응하는 능력이 우수하기 때문이라고 하였다.
서양산 고추냉이 뿌리 추출물 희석액을 이용한 측정 결과, 환자의 구강내에서 직접 채취한 E. faecalis 임상 분리균주와 표준균주의 MIC는 각각 1,250.0 μg/ml와 1,041.7 μg/ml로 나타났고, MBC의 경우 임상 분리균주는 8,333.3 μg/ml, 표준균주는 6,666.7 μg/ml였다.
실험에 사용된 모든 임상 분리균주 및 표준균주의 평판배지에서 paper disk 주위로 투명환이 형성되었으며, 이 결과로 서양산 고추냉이 뿌리 추출물과 클로르헥시딘은 표준균주는 물론 구강내에서 분리된 E. faecalis와 F. nucleatum 임상균주에 대하여 항균활성이 있음을 확인하였다(Fig. 2, 3).
이번 실험에서도 총 14개의 샘플 중 3개가 실험과정 중 오염되었거나 두 개이상의 균이 섞여 있어 분석결과가 나오지 않았다. 하나의 샘플은 분주 과정 중에 오염된 것으로 보이고, 나머지 두 개의 샘플은 3회의 반복된 분리 동정으로도 단일 세균으로 완전히 분리 되지 못한 것으로 판단된다. 이를 개선하기 위해서는 균의 채취, 이송, 분주 그리고 배양과정 중에 오염이 되지 않도록 좀 더세심한 주의가 필요할 것이다.

후속연구

또한 배양배지 자체가 일부 종들에게는 독성을 나타내거나 성장을 억제시키기도 하며⁴⁵⁾, 샘플 내의 다른 세균들이 연구대상 종을 억제시키는 물질들을 생산하기도 한다⁴⁶⁾. 결과적으로 이번 연구에서는 통성 혐기성 균주인 E. faecalis와 절대 혐기성 균주인 F. nucleatum만이 분리되어 실험에 사용하였으나, 앞으로 이 세균들 이외에도 Prevotella 종, Porphyromonas 종 및 Peptostreptococcus 종 등 다양한 절대 혐기성 세균들도 분리 동정하여, 이들 균주에 대한 서양산 고추냉이 뿌리 추출물의 항균활성을 평가해야 할 것이다.
셋째, 이번 연구에서는 구강내에서 임상 분리한 혐기성 세균에 대한 서양산 고추냉이 뿌리 추출물의 항균성을 알아보기 위해 상용되는 근관 세척제 중 대표적인 구강내 항균제인 클로르헥시딘과 항균활성을 비교하였다. 그러나 근관용 세척제로의 가능성을 알아보기 위해서는 세균에 대한 항균력 뿐만 아니라 세포 독성, 조직 용해 능력에 대한 평가와 함께 NaOCl이나 수산화칼슘과 같은 다른 약제와의 비교 실험도 필요할 것이다.
이러한 이유로 천연물질에서 항균제를 개발하려는 움직임이 계속되고 있고, 본 실험을 통해 서양산 고추냉이 뿌리 추출물의 구강내 혐기성 임상 분리 균에 대한 항균력을 확인하여 근관내 세척제로의 가능성을 발견하였다는데 의의가 있다. 근관 세척제로서의 또 하나의 장점은 휘발성인데, 실험을 통해 확인한 AIT의 휘발성은 복잡한 근 관내에서 일반 세척제로는 제거하기 힘든 부위에 존재하는 세균에 항균효과를 미칠 수 있는 가능성을 제시한다.
둘째, 이번 연구는 in vitro에서 진행된 실험으로, 서양산 고추냉이 뿌리 추출물을 이용한 근관 세정제의 개발을 위해서는 추후 in vivo에서의 항균효과에 대해서도 연구되어야 할 것이다. 실험실 조건들은 in vivo 상황을 완전하게 재현할 수 없으므로⁵³⁾, 서양산 고추냉이 뿌리 추출물을 근단 세척제로 사용하기 위해서는 실제 치근관내 적용시 추출물의 침투도, 항균성 및 AIT 자체의 휘발성이 미치는 영향에 대한 현미경학적 연구 등이 필요할 것으로 사료된다.
둘째, 이번 연구는 in vitro에서 진행된 실험으로, 서양산 고추냉이 뿌리 추출물을 이용한 근관 세정제의 개발을 위해서는 추후 in vivo에서의 항균효과에 대해서도 연구되어야 할 것이다. 실험실 조건들은 in vivo 상황을 완전하게 재현할 수 없으므로⁵³⁾, 서양산 고추냉이 뿌리 추출물을 근단 세척제로 사용하기 위해서는 실제 치근관내 적용시 추출물의 침투도, 항균성 및 AIT 자체의 휘발성이 미치는 영향에 대한 현미경학적 연구 등이 필요할 것으로 사료된다.
하나의 샘플은 분주 과정 중에 오염된 것으로 보이고, 나머지 두 개의 샘플은 3회의 반복된 분리 동정으로도 단일 세균으로 완전히 분리 되지 못한 것으로 판단된다. 이를 개선하기 위해서는 균의 채취, 이송, 분주 그리고 배양과정 중에 오염이 되지 않도록 좀 더세심한 주의가 필요할 것이다.
이번 연구로 표준균주 뿐만 아니라 구강에서 직접 분리한 혐기성 세균에 대한 서양산 고추냉이 뿌리 추출물의 항균성을 확인할 수 있었고, 추후 근관 세척제나 소독제로 서양산 고추냉이뿌리 추출물을 이용할 수 있는 가능성을 보여주었다.
넷째, 이번 연구에서는 알코올 자체의 항균성을 배제하기 위해 추출물 정유를 각각의 세균에 맞는 배지에 넣고 와류혼합 하여 유상액 형태로 만들어 사용하였는데 이러한 방법으로는 정유가 완전히 섞이지 않을 가능성이 있다. 추후 배지로만 희석한 경우와 소량의 알코올로 1차 희석한 후 배지로 2차 희석하여 알코올 함량을 최소한으로 낮춘 상태에서의 항균활성에 관한 연구가 이루어져야 할 것이다.
안 등²²⁾은 AIT 단독 사용시와 유기산인 초산(acetic acid)과 혼합 하여 사용했을 때의 MIC 농도를 조사한 결과, 초산 혼합 사용시 상승작용으로 인해 AIT의 MIC 농도를 1/20까지 줄일 수있다고 보고하여 유기산 혼합사용에 따른 MIC 농도 감소의 가능성을 제시한 바 있다. 향후 서양산 고추냉이 뿌리 추출물과 다른 유기산 및 타 항균제와의 혼합 사용시 항균활성, 상승작용및 농도 감소의 가능성에 대하여 더 많은 연구가 필요할 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	클로르헥시딘는 무엇인가?	클로르헥시딘은 그람 양성, 그람 음성균에 효과적인 넓은 항균 범위를 가지는 항균제이다. 클로르헥시딘과 수산화칼슘을 혼합하여 사용하면 절대 혐기성 세균에 강력한 항균효과를 나타내고, 상아질의 수산화인회석이 클로르헥시딘과 결합하여 치료가 끝난 뒤에도 오래 항균효과를 지속시킨다는 보고가 있다15,16).
	치수 및 치근단 질환의 주원인으로 알려진 세균과 그 부산물에는 어떠한 것들이 있는가?	치수 및 치근단 질환의 주원인으로 알려진 세균과 그 부산물은 근관내벽에 세균막 형태로 부착하여 병소를 유발한다1,2). 대표적으로 Fusobacterium nucleatum(이하 F. nucleatum), Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis, Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens 등이 괴사된 근관내의 혼합 감염 및 치근주위 병소와 관련되어 있다고 알려져 있다3-5). 이러한 절대 혐기성 간균뿐만 아니라 통성 혐기성 구균인 Enterococcus faecalis(이하 E.
	2%의 클로르헥시딘의 특징은 무엇인가?	클로르헥시딘과 수산화칼슘을 혼합하여 사용하면 절대 혐기성 세균에 강력한 항균효과를 나타내고, 상아질의 수산화인회석이 클로르헥시딘과 결합하여 치료가 끝난 뒤에도 오래 항균효과를 지속시킨다는 보고가 있다15,16). 또한 2%의 클로르헥시딘은 E. faecalis를 제거하는데 NaOCl 보다 더 효과가 있다는 것이 증명되었으며, 비교적 무독성이고 조직을 용해하지 않는다는 점에서 NaOCl과 차이를 보인다17). 그러나 Estrela 등18)은 E.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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