[논문]유산균 발효에 의한 인삼열매 추출물의 항산화 및 항노화 효과

전지민; 최성규; 김윤정; 장수진; 천종우; 이현상

doi:10.15230/scsk.2011.37.1.075

유산균 발효에 의한 인삼열매 추출물의 항산화 및 항노화 효과
Antioxidant and Antiaging Effect of Ginseng Berry Extract Fermented by Lactic Acid Bacteria 원문보기

大韓化粧品學會誌 = Journal of the society of cosmetic scientists of Korea, v.37 no.1, 2011년, pp.75 - 81

전지민 ((주)에이씨티 기술연구소) , 최성규 ((주)에이씨티 기술연구소) , 김윤정 ((주)에이씨티 기술연구소) , 장수진 ((주)에이씨티 기술연구소) , 천종우 ((주)에이씨티 기술연구소) , 이현상 ((주)에이씨티 기술연구소)

초록
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본 연구에서는 유산균 발효에 의한 인삼열매 추출물의 여러 가지 생리활성을 평가하였다. 고성능액체크로마토그래피를 수행하여 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물의 ginsenoside Re, Rc 및 Rb1의 함량분석 결과 유산균 발효에 의해 ginsenoside Re, Rc 및 Rb1의 함량이 모두 증가하였다. 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물의 DPPH free radical 소거활성과 SOD 유사활성 측정결과 1.00 %의 농도에서 유산균 발효 인삼열매 추출물은 각각 86.34, 76.82 %의 DPPH free radical 소거활성과 SOD 유사활성을 나타내었고, 인삼열매 추출물은 각각 49.78, 40.80 %의 DPPH free radical 소거활성과 SOD 유사활성을 나타내어 유산균 발효에 의해 항산화 활성이 증가하는 것을 확인하였다. 또한 유산균 발효 인삼열매 추출물 0.50 %의 농도로 처리한 피부 섬유아세포에서 procollagen type I (COL1A1)은 828.13 % 증가하였으며, matrix metalloproteinase (MMP)-1은 87.88 %, tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$는 99.92 %감소하는 효과를 보여주었다. 이처럼 항산화, 주름, 항염에 효능을 보이는 유산균 발효에 의한 인삼열매 추출물은 기능성 화장품 소재로 개발될 수 있는 가능성이 있다.

Abstract ▼ AI-Helper

The effect of lactic acid bacteria.fermented ginseng berry extract (FGBE) on physiological activities was evaluated. The contents of ginsenosides Re, Rc, and Rb1 in ginseng berry extract (GBE) were increased after fermentation by lactic acid bacteria when analyzed by high performance liquid chromatography. Antioxidant activity of GBE and FGBE was also analyzed by DPPH radical scavenging activity assay and SOD.like activity assay. FGBE showed a 86.34 % inhibition of DPPH radical and a 76.82 % inhibition by SOD.like activity at a concentration of 1.00 %. GBE showed a 49.78 % inhibition of DPPH radical and a 40.80 % inhibition by SOD.like activity at the same concentration. Furthermore, procollagen type I (COL1A1) gene expression increased by 823.13 % and matrix metal-loproteinase(MMP)-1 and tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$ gene expression decreased by 87.88 % and 99.92 %, respectively, in human fibroblast cultured with FGBE at a concentration of 0.50 %. These results suggest that FGBE could be used as an active ingredient for functional cosmetics.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

따라서 본 연구에서는 유산균 발효에 의한 인삼열매 추출물의 생리활성 성분 변화 및 효능을 확인하였다. 유산균 발효 전 · 후의 인삼열매 추출물이 함유한 사포닌 함량 변화 및 항산화 활성과 콜라겐 합성에 관여하는 procollagen type I (COL1A1)의 발현 및 피부 구성 단백질을 분해하는 matrix metalloproteinase-1 (MMP)-1과 피부 염증을 유발하는 tumor necrosis factor (TNF)-α 의 저해효과를 평가하였다.

제안 방법

DPPH radical에 대한 소거활성은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다[17]. 96 well plate에 ethanol에 용해한 DPPH 용액 100 µL (0.
각 유전자들의 primer 서열은 Table 2와 같다. PCR에 의하여 생성된 산물은 1 % agarose gel에서 전기영동 하여 image analyzer로 확인하였으며 각 band의 intensity는 Densitometric program (Gene Tools, Syngene, UK)을 이용하여 측정하였다.
PCR은 cDNA로부터 GAPDH, COL1A1, MMP-1, TNF-α를 증폭하기 위하여 cDNA 3 µL, 10X buffer [10 mM Tris - HCl (pH 8.8), (NH4)2SO4, 20 mM MgSO4] 5 µL, 2.5 mM dNTP 2 µL, 10 pmol primer 각각 2 µL, taq polymerase 0.5 µL를 혼합하고 증류수를 더하여 50 µL로 조정하였다.
이후 UVB (50 mJ/cm²)를 1 h 동안 조사한 후 mRNA 분리를 위해 세포 내의 total RNA를 섬유아세포 배양으로부터 Trizol reagent (Invitrogen, USA)를 사용하여 추출하였다. RNA의 순도와 무결성은 A₂₆₀/A₂₈₀비율 측정을 통해 확인하였고, RNA 수득률은 260 nm에서 흡광도를 측정하여 계산하였다.
SOD 유사활성은 xanthine oxidase에 의해 hypoxanthine을 uric acid로 전환시키는 과정에서 생성되는 superoxide를 NBT와 반응시켜 발색하는 방법을 이용하여 측정하였다. 50 mM phosphate buffer (pH 7.
cDNA합성은 3 µg의 total RNA를 Oligo dT 15 (500 ng/µL) primer, dNTP (10 mM), RTase inhibitor (40 units/µL), Powerscript Ⅱ RTase (Clontech, USA)를 첨가하여 25 ℃에서 10 min간 primer annealing, 42 ℃에서 60 min 간 cDNA를 합성하고 95 ℃에서 5 min간 RTase denaturation시켰다.
구성사포닌 분석은 조 사포닌 측정시료를 HPLC급 methanol 5 mL에 용해하여 0.45 µm syringe filter (SmartPor, Pall Corporation, USA)로 여과한 후 HPLC로 분석하였다.
자외선에 의하여 MMP-1이 과 발현되면, 피부 구조 단백질들이 분해되어 피부 탄력이 저하되고 피부 주름이 생성되는 것으로 알려져 있다[19]. 따라서 MMP-1 유전자 발현 양 확인을 통해 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물이 피부 탄력 및 피부 주름에 관한 효능을 평가하였다. 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물의 농도에 따른 MMP-1 유전자 발현은 Figure 5와 같다.
따라서 TNF-α 유전자 발현 확인을 통해 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물의 염증에 관한 효능을 평가하였다.
4 mM)와 동량의 시료를 가하여 37 ℃에서 30 min간 반응하였다. 반응 후 517 nm에서 흡광도를 측정하여 DPPH radical 소거활성을 측정하였다. 비교물질로는 BHT를 사용하였다.
반응 후 96 well plate에 200 µL씩 분주하여 560 nm에서 흡광도를 측정하여 SOD 유사활성을 측정하였다.
배양된 유산균 (Lactobacillus bulgaricus) starter (106 ∼ 108 CFU/mL) 3 % (v/v)를 접종한 후 37 ℃에서 48 h 동안 발효를 행하였다.
1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), xanthine oxidase, xanthine, nitroblue tetrazolium (NBT) 및 thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT)는 Sigma (USA)로부터 구입하여 사용하였다. 분석시약은 모두 HPLC용 시약을 사용하여 측정하였으며, 추출 및 분획용 용매는 모두 특급시약을 사용하였다. ELISA reader는 Spectra Max190 (Molecular device, USA), 분석용 HPLC는 ProStar (Varian, Inc.
유산균 발효 전 · 후의 인삼열매 추출물이 함유한 사포닌 함량 변화 및 항산화 활성과 콜라겐 합성에 관여하는 procollagen type I (COL1A1)의 발현 및 피부 구성 단백질을 분해하는 matrix metalloproteinase-1 (MMP)-1과 피부 염증을 유발하는 tumor necrosis factor (TNF)-α 의 저해효과를 평가하였다.
유산균 발효에 따른 인삼열매 추출물의 사포닌 변화를 확인하였다. 사포닌 함량 분석 결과, 인삼열매 추출물은 204.
인삼열매 추출물 및 유산균 발효 인삼열매 추출물의 COL1A1, MMP-1 및 TNF-α 유전자 발현에 미치는 효능 측정을 위하여 배양된 섬유아세포의 배지를 제거하고 인산완충용액으로 두 번씩 세척한 후 인삼열매 유산균 발효 추출물 및 인삼열매 추출물이 농도별로 첨가된 배지를 분주하여 24 h 동안 배양하였다. 이후 UVB (50 mJ/cm²)를 1 h 동안 조사한 후 mRNA 분리를 위해 세포 내의 total RNA를 섬유아세포 배양으로부터 Trizol reagent (Invitrogen, USA)를 사용하여 추출하였다. RNA의 순도와 무결성은 A₂₆₀/A₂₈₀비율 측정을 통해 확인하였고, RNA 수득률은 260 nm에서 흡광도를 측정하여 계산하였다.
인삼열매 추출물 및 유산균 발효 인삼열매 추출물의 COL1A1, MMP-1 및 TNF-α 유전자 발현에 미치는 효능 측정을 위하여 배양된 섬유아세포의 배지를 제거하고 인산완충용액으로 두 번씩 세척한 후 인삼열매 유산균 발효 추출물 및 인삼열매 추출물이 농도별로 첨가된 배지를 분주하여 24 h 동안 배양하였다.
인삼열매 추출물 및 유산균 발효 인삼열매 추출물의 조 사포닌 함량은 ethyl ether를 가하여 지용성 성분을 제거하고 n-butanol 추출법을 이용하여 조 사포닌을 추출 후 분석하였다.
자외선에 의한 피부 탄력과 광 노화의 기전에 관여하는 콜라겐의 발현을 통해 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물의 피부 탄력에 관한 효능을 평가하였다. 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물의 농도에 따른 COL1A1 유전자 발현은 Figure 4와 같다.

대상 데이터

인삼열매는 충북 음성군 삼성면에 소재한 농장에서 재배된 것으로 2009년 7월 중순에 채취하여 60 ℃에서 24 h 건조한 후 분쇄한 파우더를 실험에 사용하였다. 1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), xanthine oxidase, xanthine, nitroblue tetrazolium (NBT) 및 thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT)는 Sigma (USA)로부터 구입하여 사용하였다. 분석시약은 모두 HPLC용 시약을 사용하여 측정하였으며, 추출 및 분획용 용매는 모두 특급시약을 사용하였다.
2 mL/ min, 시료 주입량은 20 µL로 UV 203 nm에서 분석하였다. 또한 이동상은 용매 A (Water)와 용매 B (Acetonitrile)의 gradient 조건을 이용하였다. Gradient 조건은 Table 1과 같다.
본보에서는 흔히 사용하는 인삼뿌리가 아닌 인삼열매를 대상으로 연구하였다. 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼 열매 추출물의 사포닌 함량의 변화를 측정한 결과, 유산균 발효 후 사포닌의 함량이 증가하였다.
반응 후 517 nm에서 흡광도를 측정하여 DPPH radical 소거활성을 측정하였다. 비교물질로는 BHT를 사용하였다.
반응 후 96 well plate에 200 µL씩 분주하여 560 nm에서 흡광도를 측정하여 SOD 유사활성을 측정하였다. 비교물질로는 L-ascorbic acid를 사용하였다.
사람의 섬유아세포(CCD-986Sk human fibroblasts)는 American type culture colletion (ATCC, USA)에서 구입하였으며, 섬유아세포를 37 ℃, 5 % CO2하에서 10 %의 태아소혈청(FBS, Lonza), 50 µg/mL의 streptomycin 을 첨가한 ISCOVES MODIFIED DULBECCOS MEDIA (IMDM)에서 배양하였다.
사용된 유산균은 Korea collection for type cultures (KCTC, Korea)에서 분양 받은 Lactobacillus bulgaricus (KCTC 3635)를 사용하였으며, 동결건조된 균주를 MRS agar (Difco, USA)에 접종하여 37 ℃에서 24 h 배양 후 생성된 집락을 MRS broth에 접종 후 다시 37 ℃에서 24 h 동안 배양하여 발효 균주로 사용하였다.
인삼열매는 충북 음성군 삼성면에 소재한 농장에서 재배된 것으로 2009년 7월 중순에 채취하여 60 ℃에서 24 h 건조한 후 분쇄한 파우더를 실험에 사용하였다. 1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), xanthine oxidase, xanthine, nitroblue tetrazolium (NBT) 및 thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT)는 Sigma (USA)로부터 구입하여 사용하였다.

이론/모형

인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물의 세포독성을 확인하기 위해 MTT assay를 수행하였다. 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물 모두 사용 농도가 0.

성능/효과

MMP-1 유전자 발현 억제 효능 결과와 마찬가지로 추출물의 농도에 따라 TNF-α 유전자 발현이 억제되는 것으로 나타났고, 유산균 발효 후 인삼열매 추출물의 TNF-α 유전자 발현 억제가 더욱 증가하는 것으로 나타났다.
00 % 이상에서는 세포생존율이 약간 감소하였다. 그러나 5.00 %까지 사용 시에도 95.00 % 이상의 높은 세포 생존율을 보여주어 식품, 화장품 등에 독성이 없는 안전한 원료로 사용 가능함을 확인하였다 (Figure 3).
또한, 사포닌의 종류별 함량을 비교하였을 때 이미 연구된 바와 마찬가지로 인삼열매 추출물 사포닌의 경우, ginsenoside Re의 함량이 가장 높은 것으로 확인되었고, Rc, Rb1의 함량 모두 유산균 발효 인삼열매 추출물에서 보다 높은 함량으로 확인되었다[16]. 따라서 인삼열매의 사포닌 및 ginsenoside는 유산균 발효를 통하여 증가됨을 확인하였다.
인삼열매 추출물의 항산화 활성에 있어서는 DPPH free radical 소거와 superoxide 환원에 모두 효능이 있는 것으로 나타났으며, 유산균 발효 후 인삼열매 추출물의 항산화 활성이 더욱 증가하였다. 또한 인삼열매 추출물은 피부 구성 성분인 COL1A1의 발현을 증가시킴으로써 피부에 탄력과 힘을 주고, 피부 주름의 원인이 되는 MMP-1의 과발현을 억제하는 효능이 있는 것을 확인할 수 있었다. 뿐만 아니라 염증의 원인이 되는 TNF-α의 과발현을 억제하는 효능이 있는 것을 확인하였고, 이 역시 유산균 발효 후 인삼열매 추출물의 효능이 더 우수한 것을 확인하였다.
뿐만 아니라 염증의 원인이 되는 TNF-α의 과발현을 억제하는 효능이 있는 것을 확인하였고, 이 역시 유산균 발효 후 인삼열매 추출물의 효능이 더 우수한 것을 확인하였다.
유산균 발효에 따른 인삼열매 추출물의 사포닌 변화를 확인하였다. 사포닌 함량 분석 결과, 인삼열매 추출물은 204.37 mg/g의 사포닌을 함유하였고, 유산균 발효 인삼열매 추출물은 255.10 mg/g의 사포닌을 함유하는 것으로 나타났다. 또한, 사포닌의 종류별 함량을 비교하였을 때 이미 연구된 바와 마찬가지로 인삼열매 추출물 사포닌의 경우, ginsenoside Re의 함량이 가장 높은 것으로 확인되었고, Rc, Rb1의 함량 모두 유산균 발효 인삼열매 추출물에서 보다 높은 함량으로 확인되었다[16].
82%로 나타났다. 이 역시 DPPH free radical 소거활성 결과와 동일한 양상을 보이며, 유산균 발효 후 인삼열매 추출물의 SOD 유사활성이 증가하였다. SOD 유사활성은 free radical 중에서도 superoxide (O₂^-)에 대한 환원력을 나타내는 것으로 유산균 발효 인삼열매 추출물의 경우 free radical 뿐 아니라 free radical 중 superoxide에 대한 탁월한 항산화 활성을 갖고 있다.
인삼열매 추출물은 Figure 1에서 보이는 것처럼 유산균 발효에 의하여 항산화 활성이 증가하였다. 인삼열매 추출물 0.10, 1.00 % 처리 시 각각 24.85, 49.78 %의 DPPH free radical 소거활성을 나타내었고, 같은 농도에서 유산균 발효 인삼열매 추출물의 DPPH free radical 소거활성은 각각 54.30, 86.36 %로 나타났다.
인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물의 SOD 유사활성 측정결과는 Figure 2와 같다. 인삼열매 추출물 0.10, 1.00 % 처리 시 각각 SOD 유사활성은 각각 4.76, 40.80 %로 나타났고, 같은 농도에서 유산균 발효 인삼열매 추출물의 SOD 유사활성은 각각 20.05, 76.82%로 나타났다. 이 역시 DPPH free radical 소거활성 결과와 동일한 양상을 보이며, 유산균 발효 후 인삼열매 추출물의 SOD 유사활성이 증가하였다.
본보에서는 흔히 사용하는 인삼뿌리가 아닌 인삼열매를 대상으로 연구하였다. 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼 열매 추출물의 사포닌 함량의 변화를 측정한 결과, 유산균 발효 후 사포닌의 함량이 증가하였다. 인삼열매 추출물의 항산화 활성에 있어서는 DPPH free radical 소거와 superoxide 환원에 모두 효능이 있는 것으로 나타났으며, 유산균 발효 후 인삼열매 추출물의 항산화 활성이 더욱 증가하였다.
인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물의 세포독성을 확인하기 위해 MTT assay를 수행하였다. 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물 모두 사용 농도가 0.50 % 이하일 때 세포독성이 전혀 없는 것으로 나타났으며, 1.00 % 이상에서는 세포생존율이 약간 감소하였다. 그러나 5.
인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼 열매 추출물의 사포닌 함량의 변화를 측정한 결과, 유산균 발효 후 사포닌의 함량이 증가하였다. 인삼열매 추출물의 항산화 활성에 있어서는 DPPH free radical 소거와 superoxide 환원에 모두 효능이 있는 것으로 나타났으며, 유산균 발효 후 인삼열매 추출물의 항산화 활성이 더욱 증가하였다. 또한 인삼열매 추출물은 피부 구성 성분인 COL1A1의 발현을 증가시킴으로써 피부에 탄력과 힘을 주고, 피부 주름의 원인이 되는 MMP-1의 과발현을 억제하는 효능이 있는 것을 확인할 수 있었다.
인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물의 농도에 따른 COL1A1 유전자 발현은 Figure 4와 같다. 추출물의 농도에 따라 COL1A1 유전자 발현이 증가되는 것으로 나타났고, 유산균 발효 후 인삼열매 추출물의 COL1A1 유전자 발현이 더욱 증가하는 것으로 나타났다. 따라서 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물은 콜라겐의 발현을 증가시켜 피부 탄력의 증가로 자외선에 의한 광 노화에 도움이 될 것으로 생각된다.
인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물의 농도에 따른 MMP-1 유전자 발현은 Figure 5와 같다. 추출물의 농도에 따라 MMP-1 유전자 발현이 억제되는 것으로 나타났고, 유산균 발효 후 인삼열매 추출물의 MMP-1 유전자 발현 억제가 더욱 증가하는 것으로 나타났다. 따라서 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물은 피부 구조 단백질의 분해를 억제하여 피부 탄력과 피부 주름생성 억제에 도움이 될 것으로 생각된다.

후속연구

이상의 결과를 종합하여 볼 때 인삼열매 추출물은 뛰어난 항산화 활성과 피부 주름 및 염증 예방에 적용 가능한 소재가 될 수 있을 것으로 생각되며 특히, 유산균 발효 후의 인삼열매 추출물의 경우 구성사포닌의 증가로 더욱 월등한 효과가 있을 것으로 생각된다. 따라서 유산균 발효 인삼열매 추출물은 피부노화 및 피부 염증을 개선시킬 수 있는 신규 한방 소재로 활용 가능 할 것으로 생각된다.
MMP-1 유전자 발현 억제 효능 결과와 마찬가지로 추출물의 농도에 따라 TNF-α 유전자 발현이 억제되는 것으로 나타났고, 유산균 발효 후 인삼열매 추출물의 TNF-α 유전자 발현 억제가 더욱 증가하는 것으로 나타났다. 따라서 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물은 피부 주름생성 억제뿐만 아니라 염증 유발을 억제하는 데에도 도움이 될 것으로 생각된다.
이상의 결과를 종합하여 볼 때 인삼열매 추출물은 뛰어난 항산화 활성과 피부 주름 및 염증 예방에 적용 가능한 소재가 될 수 있을 것으로 생각되며 특히, 유산균 발효 후의 인삼열매 추출물의 경우 구성사포닌의 증가로 더욱 월등한 효과가 있을 것으로 생각된다. 따라서 유산균 발효 인삼열매 추출물은 피부노화 및 피부 염증을 개선시킬 수 있는 신규 한방 소재로 활용 가능 할 것으로 생각된다.
뿐만 아니라 염증의 원인이 되는 TNF-α의 과발현을 억제하는 효능이 있는 것을 확인하였고, 이 역시 유산균 발효 후 인삼열매 추출물의 효능이 더 우수한 것을 확인하였다. 이에 따라 유산균 발효 후 인삼열매 추출물은 피부 탄력과 주름예방, 염증 예방에 도움을 줄 것으로 기대된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	TNF-α는 무엇인가?	TNF-α는 가장 많이 연구된 대표적인 염증 유발 cytokine 중 하나로 TNF-α가 과 발현되면 피부 염증을 유발하는 것으로 알려져 있다[20]. 따라서 TNF-α 유전자 발현 확인을 통해 인삼열매 추출물과 유산균 발효 인삼열매 추출물의 염증에 관한 효능을 평가하였다.
	인삼이 함유하는 성분으로 어떤 것들이 알려져 있는가?	예로부터 인삼은 대표적인 생약제로 사용되어 왔으며, 사포닌, 폴리페놀, 폴리아세틸렌, 알카로이드, 다당체 등이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다[1]. 그 중에서 가장 대표적인 약리성분인 사포닌은 항암, 면역증강, 혈압강하, 혈당강하, 항염증 및 항산화 효과 등 매우 다양한 효능을 가지는 것으로 밝혀졌다[2-7].
	인삼의 대표적인 약리성분인 사포닌은 어떤 효능을 지니고 있는가?	예로부터 인삼은 대표적인 생약제로 사용되어 왔으며, 사포닌, 폴리페놀, 폴리아세틸렌, 알카로이드, 다당체 등이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다[1]. 그 중에서 가장 대표적인 약리성분인 사포닌은 항암, 면역증강, 혈압강하, 혈당강하, 항염증 및 항산화 효과 등 매우 다양한 효능을 가지는 것으로 밝혀졌다[2-7]. 배당체 화합물들은 식물유래 의약품 중 terpenoid 다음으로 많이 사용되는 천연물질이다.

참고문헌 (20)

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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