선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 따라서 본 연구는 이러한 고로쇠 수액의 나노입자를 일반고로쇠 수액과의 비교를 통하여 기능성화장품으로서 적용 가능성을 검토하고, 더 나아가 향장소재와 관련된 분야에 활용하기 위한 기초 자료로 이용하고자 수행하였다.
제안 방법
- Tyrosinase 억제효과는 dopachrome방법을 이용하여 측정하였다. 150 ㎕의 mushroom tyrosinase-150 unit, 225 ㎕의 2.5 mM L-tyrosine, 225 ㎕의 0.4 M hepes buffer (pH 6.8), 그리고 300 ㎕의 ethanol 용액 혹은 시료 (1 ㎎/㎖) 용액을 섞은 후 배양 전과 15분간 배양 후 각각의 흡광도를 475 ㎚에서 측정하여 억제되는 정도를 살펴보았다. Tyrosinase의 억제 정도는 다음과 같이 계산하였다.
- , 2006). Clone M-3 세포 접종 후 3일간 시료를 처리하고 배지를 제거한 다음 세포를 PBS로 세척하고, 각 well 당 1 ㎖의 1 N NaOH를 첨가한 후 교반하여 세포막을 융해함으로써 melanin 성분을 녹여 나오게 하여, 가시광선 영역대 중 가장 파장이 짧은 푸른색 가시광선 영역인, 400 ㎚에서 흡광도를 측정함으로써 생성량을 비교하였다.
- )를 이용하였다. TEM 사진을 찍기 위해서 phosphotungstic acid solution을 이용하여 negative staining을 하였다. 나노 입자가 충분히 염색이 된 후, formvar/carbon으로 코팅된 grid에 얇게 펴서 말린 뒤 EFTEM (LEO 912AB OMEGA, Carl Zeiss, Germany), 120 kV에서 관찰하였다(Saxena et al.
- 고로쇠 수액 나노입자의 Clone M-3 세포주 melanin 생성에 미치는 영향을 알아보기 위해서 100%의 농도로 샘플 처리하여 멜라닌 생성량을 측정하였다. 대조군으로 사용된 Melasolv는 미백제로 알려진 합성물질이며 처리 시 59%의 저해활성을 보였다.
- 고로쇠 수액 나노입자의 항산화 활성 측정은 메탄올 0.5 ㎖에 각각 50, 100, 250, 500 ㎍/㎖의 농도로 추출물을 녹여 시료를 조제하였으며, 대조군으로 L-ascorbic acid를 사용하였다. 이 후 0.
- TEM 사진을 찍기 위해서 phosphotungstic acid solution을 이용하여 negative staining을 하였다. 나노 입자가 충분히 염색이 된 후, formvar/carbon으로 코팅된 grid에 얇게 펴서 말린 뒤 EFTEM (LEO 912AB OMEGA, Carl Zeiss, Germany), 120 kV에서 관찰하였다(Saxena et al., 2005).
- 세포독성은 3-(4,5-dimethythiazo-2-yl)-2,5-dipheny-tetrazoliumbromide (MTT) 시약을 이용하여 세포 생존율을 측정하는 Mosmann방법을 변형하여 실시하였다 (Mosmann, 1983). CCD-986sk 세포를 2×104cells/well 농도로 96 well plate에 접종한 후, 각 well에 70-80% confluency배양시점에 시료를 투여하여 CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다.
- 실험에 사용된 고로쇠 나노 시료의 농도는 1.0 ㎎/㎖로 조절하여 정상세포에 대한 세포독성을 검토하였다. Fig.
- 5㎖ trichloroacetic acid (10%, w/v)를 첨가하여 650 × g에서 10분간 원심분리 하였다. 원심분리한 상징액 5 ㎖에 탈이온수 5 ㎖와 1% ferric chloride 1 ㎖를 첨가시킨 후 UV-vis Spectrophotometer (852A Diode Array Spectrophotometer, Hewlett Packard)를 이용하여 700 ㎚에서 흡광도를 측정하였다 (Oyaizu, 1986).
- 항산화 활성 및 미백 효능의 증진을 목적으로 하여 제조된 고로쇠 수액 나노입자는 수용성 추출물을 유상이 포집한 W/O 형태의 리포솜으로 구성된다. 제조된 고로쇠 나노입자의 형태를 확인하기 위하여 TEM을 이용하여 관찰하였다 (Fig. 1). 나노입자들은 negative staining에 의해서 하얗게 보이는 구형들이다.
- 둥근바닥플라스크에 식용 가능한 lecithin 50 ㎎을 chloroform (minimum, 99%, USA)에 녹여 감압기를 사용해 multilayer를 형성시킨다. 질소가스를 이용하여 유화제를 완전히 건조시킨후 건조된 layer가 형성된 둥근바닥플라스크에 고로쇠 및 우산고로쇠 수액 50 ㎖ 넣고, 초음파 분산기 (VCX-500, SONIC, USA)를 이용하여 상온에서 20 ㎑ 로 2시간 동안 균질화시켜 수용성 나노입자를 제조하였다 (Kang et al., 2005).
- 본 실험에서 사용된 고로쇠, 우산고로쇠 수액은 2010년 2월~4월에 채취된 것을 바로 실험실로 옮겨 실험에 사용하였다. 채취 방법은 천공법으로 하였으며 나무와 나무사이를 호스로 연결하여 채취하는 연결식으로 하였다. 천공은 드릴로 직경 12 ㎜ , 깊이 15 m로 수간부에 구멍을 뚫어 수액을 채취하였다.
대상 데이터
- Human dermal fibroblasts는 CCD-986sk으로 한국세포주은행(KCLB)로부터 동결 상태로 구입하였다. 또한 melanocyte인 Clone-M3 (KCLB No.
- 한국세포주은행으로부터 구입한 CCD986sk와 Clone-M3 cell을 각각 DMEM배지와 RPMI1640 배지에 10% fetal bovine serum (FBS, Hyclone), 1% penicillinstreptomycin을 첨가하여 37℃, 5% CO2조건하에서 배양하여 사용하였다. 그 외 실험에 사용된 모든 시약들은 Sigma Chemical사에서 구입하여 사용하였다.
- 고로쇠 수액 나노입자의 Clone M-3 세포주 melanin 생성에 미치는 영향을 알아보기 위해서 100%의 농도로 샘플 처리하여 멜라닌 생성량을 측정하였다. 대조군으로 사용된 Melasolv는 미백제로 알려진 합성물질이며 처리 시 59%의 저해활성을 보였다. Fig.
- Human dermal fibroblasts는 CCD-986sk으로 한국세포주은행(KCLB)로부터 동결 상태로 구입하였다. 또한 melanocyte인 Clone-M3 (KCLB No. 10053.1)도 한국 세포주은행으로부터 동결상태로 구입하였다. 한국세포주은행으로부터 구입한 CCD986sk와 Clone-M3 cell을 각각 DMEM배지와 RPMI1640 배지에 10% fetal bovine serum (FBS, Hyclone), 1% penicillinstreptomycin을 첨가하여 37℃, 5% CO2조건하에서 배양하여 사용하였다.
- 본 실험에서 사용된 고로쇠, 우산고로쇠 수액은 2010년 2월~4월에 채취된 것을 바로 실험실로 옮겨 실험에 사용하였다. 채취 방법은 천공법으로 하였으며 나무와 나무사이를 호스로 연결하여 채취하는 연결식으로 하였다.
- 채취 방법은 천공법으로 하였으며 나무와 나무사이를 호스로 연결하여 채취하는 연결식으로 하였다. 천공은 드릴로 직경 12 ㎜ , 깊이 15 m로 수간부에 구멍을 뚫어 수액을 채취하였다. 천공 위치는 지면으로부터 1 m 이내로 하였다 (Moon and Kwon, 2004).
- 1)도 한국 세포주은행으로부터 동결상태로 구입하였다. 한국세포주은행으로부터 구입한 CCD986sk와 Clone-M3 cell을 각각 DMEM배지와 RPMI1640 배지에 10% fetal bovine serum (FBS, Hyclone), 1% penicillinstreptomycin을 첨가하여 37℃, 5% CO2조건하에서 배양하여 사용하였다. 그 외 실험에 사용된 모든 시약들은 Sigma Chemical사에서 구입하여 사용하였다.
데이터처리
- 또한 각 활성 실험 등에 대한 결과는 3반복 실험에 의한 Mean ± SD로 표시했으며 각 평균치 간의 차이는 student t-test에 의해 p = 0.05 수준에서 유의성을 검증하였다.
- 초고압 처리된 고로쇠 수액 나노입자의 피부 면역 및 미백 활성 효과는 Microsoft excel의 student t-test에 의해 유의성을 검정하였다. 또한 각 활성 실험 등에 대한 결과는 3반복 실험에 의한 Mean ± SD로 표시했으며 각 평균치 간의 차이는 student t-test에 의해 p = 0.
이론/모형
- Tyrosinase 억제효과는 dopachrome방법을 이용하여 측정하였다. 150 ㎕의 mushroom tyrosinase-150 unit, 225 ㎕의 2.
- 고로쇠 수액 나노입자의 크기와 균일성, 크기별 분포 측정을 위해 DLS (Dynamic light scattering, Brookhaven Instrument Co.)를 이용하였다. TEM 사진을 찍기 위해서 phosphotungstic acid solution을 이용하여 negative staining을 하였다.
성능/효과
- 2에 나타내었다. DLS 측정 결과, 레시틴으로 포집한 고로쇠 수액의 나노입자는 150~200 ㎚의 범위로 형성된 것을 알 수 있다. 이는 일반적으로 인체에 투과가 가능한 100~500 ㎚ 범위 내에 있으며, 균일한 크기로 분포하고 있으므로 이 고로쇠 나노입자가 연구의 목적에 알맞게 제조되었음을 알 수 있다.
- 대조군으로 사용된 Melasolv는 미백제로 알려진 합성물질이며 처리 시 59%의 저해활성을 보였다. Fig. 5를 보면 고로쇠 수액 나노입자는 1.0㎎/㎖의 농도에서 47.8%의 높은 멜라닌 생성 저해 활성을 보였으며 일반 고로쇠 수액의 경우 36.9%의 저해활성을 보였다. 고로쇠가 포집되지 않은 순수 레시틴 입자에 대해서는 멜라닌 생성 저해율이 2% 미만으로 거의 나타나지 않았다.
- , 2010). 고로쇠가 포집되지 않은 순수 레시틴 입자에 대해서는 tryosinase 저해활성이 5% 미만으로 거의 나타나지 않는 것으로 보아, 레시틴 자체는 미백활성에 전혀 영향을 미치치 않는 것으로 판단된다. 멜라닌 색소를 생성하는 효소인 tyrosinase는 활성이 적을수록 좋은 미백 효과를 가진다고 볼 수 있으므로, 고로쇠 수액 레시틴 나노입자는 기능성 미백 향장 소재로서 활용가치가 높을 것으로 사료된다.
- 환원력 측정에서의 흡광도 수치는 그 수치 자체가 추출물의 환원력을 나타내어, 높은 환원력을 가지는 추출물은 흡광도의 수치가 높게 나타난다. 실험 결과를 보면 추출물 농도가 점차적으로 증가함에 따라 환원력이 증가하는 경향을 보였으며, 1.0㎎/㎖의 농도에서 레시틴 나노입자의 O.D.값은 1.885, 일반고로쇠 수액의 O.D.값은 1.814로 측정되었다. 레시틴으로 포집한 고로쇠 수액 나노입자와 나노입자화 되지 않은 일반 고로쇠 수액의 환원력의 차이는 미미하지만 나노입자의 환원력이 더 높았으며, 이와 같은 결과는 고추잎 용매 분획물의 생리활성 연구에서 에틸아세테이트 고추잎 분획물이 1.
- 4에 나타내었다. 즉, 실험 결과를 보면 수액의 농도가 증가함에 따라 tyrosinase의 저해 활성도 증가하는 경향을 보였으며, 1 ㎎/㎖ 의 농도에서 85.8%의 높은 저해율을 나타냈다. 가래나무 추출물의 미백 효과 연구에서 300 ㎍/㎖ 의 농도에서 가래나무 추출물의 tyrosinase 저해율이 60% 정도였으나, 고로쇠 나노입자는 200㎍/㎖의 농도에서 73.
후속연구
- 814로 측정되었다. 레시틴으로 포집한 고로쇠 수액 나노입자와 나노입자화 되지 않은 일반 고로쇠 수액의 환원력의 차이는 미미하지만 나노입자의 환원력이 더 높았으며, 이와 같은 결과는 고추잎 용매 분획물의 생리활성 연구에서 에틸아세테이트 고추잎 분획물이 1.5 ㎎/㎖의 농도에서 0.8의 흡광도값을 갖는 것과 비교하여 보다 높은 환원력을 나타내므로 (Kim et al., 2003), 고로쇠 나노입자가 높은 항산화 활성을 가질 것으로 사료되며, 나노 제조 공정이 병행되면서 인체에 효과적으로 흡수됨에 따라 더 높은 활성을낼 수 있을 것으로 기대된다.
- 고로쇠가 포집되지 않은 순수 레시틴 입자에 대해서는 tryosinase 저해활성이 5% 미만으로 거의 나타나지 않는 것으로 보아, 레시틴 자체는 미백활성에 전혀 영향을 미치치 않는 것으로 판단된다. 멜라닌 색소를 생성하는 효소인 tyrosinase는 활성이 적을수록 좋은 미백 효과를 가진다고 볼 수 있으므로, 고로쇠 수액 레시틴 나노입자는 기능성 미백 향장 소재로서 활용가치가 높을 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.