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국내 우군에서 소 결핵 진단을 위한 피내검사법과 Interferon-γ 생성 검사의 비교

Comparison of tuberculin skin test with Interferon-γ assay for the diagnosis of bovine tuberculosis in Korean cattle

大韓獸醫學會誌 = Korean journal of veterinary research, v.51 no.2 = no.143, 2011년, pp.117 - 122  

신승원 (서울대학교 수의과대학 및 BK21 수의과학인력양성사업단) ,  신민경 (서울대학교 수의과대학 및 BK21 수의과학인력양성사업단) ,  차승빈 (서울대학교 수의과대학 및 BK21 수의과학인력양성사업단) ,  우종태 (경기도 축산위생연구소) ,  이성모 (인천광역시 보건환경연구원 가축위생시험소) ,  구복경 (농림수산검역검사본부 동식물위생연구부 세균질병과) ,  조윤상 (농림수산검역검사본부 동식물위생연구부 세균질병과) ,  정석찬 (농림수산검역검사본부 동식물위생연구부 세균질병과) ,  유한상 (서울대학교 수의과대학 및 BK21 수의과학인력양성사업단)

Abstract AI-Helper 아이콘AI-Helper

Bovine tuberculosis (bTB), caused primarily by Mycobacterium bovis, continues to exert an economic loss, even in countries with active control measures, and is one of zoonotic diseases enable to be transmitted to human. The control and eradication of bTB are mainly based on a test and slaughter poli...

주제어

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제안 방법

  • 01 M PBS(nil antigen), PPD-A, PPD-B를 첨가한 3개의 평균흡광노 값을 구하고 이수치를 다음과 같은 기준에 의해서 양성 또는 음성으로 판정 하였다. PPD-B의 OD 값과 PBS 의 OD 값의 차이가 0.1 이상이고, PPD-B OD 값과 PPD-A OD 값의 차이 가 0.1 이상인 경우 양성 으로 판정 하였다. 음성은 PPD- B OD와 PBS에 의한 OD 차이가 0.
  • 흡광 노를 측정한 후 제조사에서 제공한 기준에 따라서 판정하였다. 각 well 당 2회 반복실험하여 흡광도의 평균값을 사용하였으며, sample마다 0.01 M PBS(nil antigen), PPD-A, PPD-B를 첨가한 3개의 평균흡광노 값을 구하고 이수치를 다음과 같은 기준에 의해서 양성 또는 음성으로 판정 하였다. PPD-B의 OD 값과 PBS 의 OD 값의 차이가 0.
  • 비교피내검사는 단일피내검사 3일 후에 Huitema 방법 [12] 및 Norby 등 [1 기의 방법에 따라서 실시하였다. 간단히 설명하면, 3번과 4번 경골아래의 경측부 피내의 털을 12.5 cm 간격으로 털을 깎은 다음 각각의 피부의 두께를 측정하고 위는 우형 PPD 튜버클린(PPD-B)을, 아래는 조형 PPD 튜버클린 (PPD-A)을 0.1 mL 씩 피 내 접종하였다. 피내접종 72 시간후 접종부위의 종창차를 구한 뒤, PPD-B와 PPD-A 각각의 종창차이가 4 mm 이상인 개체를 양성으로, 0mm 초과 4mm 미만인 개체를의양성으로, 0mm 이하인 개체를 음성으로 판정하였다.
  • 단일피내진단법 및 비교피내진단법에 대한 IFN- y assay 의 민감노, 늑이노 및 Youden's Index를 구하였다. Youden's index는 진단 검 사범의 정 확노를 비교적 쉽게 평가하는 지표로서 1에 가까울수록 효율적인 진단기준이라 할 수 있으며, 그 공식은 다음과 같다.
  • 또한 이에 대한 Receiver-operating-characteristics(ROC) 곡선분석을 실시하고 area under curve(AUC)로 비교하였다. 통상적으로 AUC 수치에 따라 진단의 정확도가 우연의 일치로 일어날 수 있는(AUC = 0.
  • 대상으로 하였다. 위 실시요령에 따라 실시한 단일 피 내 검사 결과를 바탕으로 양성, 의양성, 음성의 142두에 대하여 비교피내 검사를 실시하였으며 , 단일피내 검사 결과 양성, 의양성, 음성의 141 두의 혈액을 이용하여 IFN- Y 분석법을 실시하였다.
  • 또한 현재는 우유를 중심으로 피내검사법을 적용하고 있기 때문에 한우 또는 육우에서의 소 결핵의 확산방지를 위한 새로운 진단법의 도입이 요구되는 시점이다. 이에 본연구에서는 국내에서 소 결핵 진단을 위해 사용되고 있는 단일피내검사 결과를 비교피내검사 및 IFN-y 검사법을 통하여 비교 분석하였다.
  • 즉, 국내에서 사육되는 12개월 이상의 소에 대하여 미근부 추벽의 피내에 튜버큐린 피내검사용 PPD 진단액을 접종후 48~72시간 사이에 피부두께를 측정하여 접종전과 후의 종창차이가 5 mm 이상이면 양성, 3~5 mm 이면 의양성, 3mm 미만은 음성으로 판정하였다. 비교피내검사는 단일피내검사 3일 후에 Huitema 방법 [12] 및 Norby 등 [1 기의 방법에 따라서 실시하였다.
  • Switzerland)을 이용하여 측정하였다. 즉, 피 내 진단검사 결과 3~30일 이내에 헤파린이 첨가된 시험관에 미정맥 또는 경정맥에서 혈액을 채취한 뒤 상온 상태로 실험실로 운반하여 30시간 이내에 PPD로 자극 시켰다. 채혈한 혈액은 24 well microplate에 well 당 혈액 1.
  • 1 mL 씩 피 내 접종하였다. 피내접종 72 시간후 접종부위의 종창차를 구한 뒤, PPD-B와 PPD-A 각각의 종창차이가 4 mm 이상인 개체를 양성으로, 0mm 초과 4mm 미만인 개체를의양성으로, 0mm 이하인 개체를 음성으로 판정하였다.
  • )를 측정하였다. 흡광 노를 측정한 후 제조사에서 제공한 기준에 따라서 판정하였다. 각 well 당 2회 반복실험하여 흡광도의 평균값을 사용하였으며, sample마다 0.

대상 데이터

  • 2007년 3~12월과 2010년 4-12월 사이에 경기도와 인천광역시 지역에서 사육되는 소들 중 우리나라 결핵병 및 브루셀라병 방역실시요령(농림수산식품부고시 제 2009-147호)에 의해 매년 실시하는 소 결핵 검사 대상우를 대상으로 하였다. 위 실시요령에 따라 실시한 단일 피 내 검사 결과를 바탕으로 양성, 의양성, 음성의 142두에 대하여 비교피내 검사를 실시하였으며 , 단일피내 검사 결과 양성, 의양성, 음성의 141 두의 혈액을 이용하여 IFN- Y 분석법을 실시하였다.
  • 단일피내검사를 위해 사용한 PPD는 국내 동물 약품업 체에서 생산하여 국가검정을 거친 M. bovis AN5 유래 PPD-B을 사용하였으며, 비교피내검사를 위한 PPD-B와 PPD-A는 국립수의과학검역원에서 M. bovis AN5 (ATCC35726)와 M. avium AV14141(ATCC35716)> 이용하여 조 등 [2]의 방법에 의하여 제조 및 역가검정을 실시하여 사용하였다.

데이터처리

  • 단일피내 진단법과 비교피내 진단법의 시험결과는 회귀분석을 실시하고 상관관계수를 구하여 유의성을 검정하였다. 단일피내진단법 및 비교피내진단법에 대한 IFN- y assay 의 민감노, 늑이노 및 Youden's Index를 구하였다.

이론/모형

  • IFN-y 생성검사는 Wood 등 [2기의 방법에 따라 전혈을 처리하여 실시하였으며, 생성량은 Bovigam ELISA Kit(Prionics, Switzerland)을 이용하여 측정하였다. 즉, 피 내 진단검사 결과 3~30일 이내에 헤파린이 첨가된 시험관에 미정맥 또는 경정맥에서 혈액을 채취한 뒤 상온 상태로 실험실로 운반하여 30시간 이내에 PPD로 자극 시켰다.
  • 단일피내검사는 국내 결핵병 및 브루셀라병 방역 실시요령(농림수산식품부 고시 제2009-147호)에 따라 실시하였다. 즉, 국내에서 사육되는 12개월 이상의 소에 대하여 미근부 추벽의 피내에 튜버큐린 피내검사용 PPD 진단액을 접종후 48~72시간 사이에 피부두께를 측정하여 접종전과 후의 종창차이가 5 mm 이상이면 양성, 3~5 mm 이면 의양성, 3mm 미만은 음성으로 판정하였다.
  • 즉, 국내에서 사육되는 12개월 이상의 소에 대하여 미근부 추벽의 피내에 튜버큐린 피내검사용 PPD 진단액을 접종후 48~72시간 사이에 피부두께를 측정하여 접종전과 후의 종창차이가 5 mm 이상이면 양성, 3~5 mm 이면 의양성, 3mm 미만은 음성으로 판정하였다. 비교피내검사는 단일피내검사 3일 후에 Huitema 방법 [12] 및 Norby 등 [1 기의 방법에 따라서 실시하였다. 간단히 설명하면, 3번과 4번 경골아래의 경측부 피내의 털을 12.
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참고문헌 (28)

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