[논문]시판양조 및 재래식 조선간장으로부터 분리한 다당의 면역증강 활성 비교

박혜령; 이문수; 조선영; 원혜진; 이현순; 이호; 신광순

doi:10.9721/kjfst.2012.44.2.228

시판양조 및 재래식 조선간장으로부터 분리한 다당의 면역증강 활성 비교
Immuno-stimulating Activities of Polysaccharides Isolated from Commercial Soy Sauce and Traditional Korean Soy Sauce 원문보기

한국식품과학회지 = Korean journal of food science and technology, v.44 no.2, 2012년, pp.228 - 234

박혜령 (경기대학교 식품생물공학과) , 이문수 (경기대학교 식품생물공학과) , 조선영 (경기대학교 식품생물공학과) , 원혜진 (경기대학교 기초과학연구소) , 이현순 (경기대학교 기초과학연구소) , 이호 (경기대학교 식품생물공학과) , 신광순 (경기대학교 식품생물공학과)

초록
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현재 우리나라에서 시판되고 있는 대부분의 양조간장은 일본의 $koji$ 방식으로 제조되고 있는 반면, 재래식 조선간장은 자연적으로 미생물이 접종 및 발효된 메주를 이용하여 제조되고 있다. 본 연구는 일본식으로 만들어진 양조간장과 우리나라 전통방식으로 만들어진 재래식 조선간장으로부터 얻어진 다당의 특성과 면역증진활성을 비교하였다. 조선간장 유래 다당인 KTSP-0는 2-keto-3-deoxy-D-$manno$-2-octulosonic acid(KDO)(1.1%)의 구조를 가지는 rhamnogalacturonan II(RG-II)가 있음을 확인하였다. 양조간장 유래 다당 CSP-0와 KTSP-0의 보체계 활성화능을 측정한 결과 두 시료 모두 농도의존적으로 증가하는 보체계 활성을 가지고 있었으나, $1,000{\mu}g/mL$ 농도에서 KTSP-0는 64.7%, CSP-0는 56%의 활성을 나타내었다. C3의 보체계 활성 경로를 확인하기 위해 2차원 면역전기영동을 행하였다. 그 결과, CSP-0는 고전경로로만 보체계를 활성화 시키는 반면, KTSP-0는 고전경로와 부경로 모두를 통해 보체계를 활성화 시키는 것으로 나타났다. CSP-0와 KTSP-0는 비장 유래세포와 macrophage에 대한 세포독성이 없음이 확인되었으며, KTSP-0는 활성화된 복강유래 macrophage에서 IL-6는 $8-1,000{\mu}g/mL$의 비교적 넓은 범위에서, IL-12는 $40{\mu}g/mL$의 농도에서 cytokine의 분비를 증가시켰다. 본 연구를 통해 양조간장보다 조선간장이 보체계 활성화를 통해 높은 면역 증강 효과를 가지고 있는 것으로 확인되었다.

Abstract ▼ AI-Helper

The varying characteristics between traditional and commercial soy sauce may be initiated by raw materials and fermentation techniques for the production of $meju$ and $koji$. We examined properties regarding polysaccharides isolated from commercial soy sauce made by the $koji$ process (CSP-0) and Korean traditional soy sauce made by the $meju$ process (KTSP-0) as well as their immuno-stimulating activities. KTSP-0 had rhamnogalacturonan II (RG-II) including 1.1% of unusual monosaccharides 3-deoxy-D-$manno$-2-octulosonic acid (KDO). Anti-complementary activities of CSP-0 and KTSP- 0 were increased dose-dependently but KTSP-0 (64.7%) was higher than CSP-0 (56%) at $1,000{\mu}g/mL$. C3 activation products were identified by crossed immuno-electrophoresis. CSP-0 caused complementary activations $via$ only classical pathway while KTSP-0 caused complementary activations $via$ both alternative and classical pathways. KTSP-0 significantly increased the secretion of interleukin (IL)-6 at $8-1,000{\mu}g/mL$ and IL-12 at $40{\mu}g/mL$ on macrophages. The results suggest that the immuno-stimulating activity of KTSP-0 is greater than that of CSP-0 from anti-complementary activity.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

따라서 CSP-0 및 KTSP-0의 항보체 활성이 보체계 활성화에 기인한 것인지, 혹은 시료의 보체 저해활성에 의한 것인지를 확인하기 위하여 보체계 활성화에서 가장 중요한 성분으로 알려진 C3의 활성화 여부를 조사하였다. 일반적으로 보체계가 활성화되면 C3는 C3a와 C3b로 분해되므로(23) 시료와 정상인 혈청을 반응시킨 후 1차 전기영동을 실시하고 anti-human C3를 이용하여 2차 면역전기영동을 행함으로써 C3 분해산물을 동정하고자 하였다.
현재 시판되는 대부분의 양조간장은 일본의 shoyu처럼 밀과 콩을 원료로 하여 koji 방식으로 만들어지는 반면 우리나라의 재래식 조선간장은 대두만으로 만들어진 메주에 볏짚과 공기 중의 미생물이 자연적으로 접종하게 한 후 1-2개월 발효시키는 과정에서 대두의 단백질 및 당류 성분이 별도의 가공처리없이 분해되는 과정을 통해 만들어 진다(14). 본 연구는 일본식으로 만들어진 양조 간장과 우리나라 전통방식으로 만들어진 재래식 조선간장으로부터 얻어진 다당의 면역증진활성을 비교하여 우리나라 전통방식으로 만들어진 재래간장의 기능성을 알리기 위한 기초자료를 제공하고자 한다.
현재 우리나라에서 시판되고 있는 대부분의 양조간장은 일본의 koji 방식으로 제조되고 있는 반면, 재래식 조선간장은 자연적으로 미생물이 접종 및 발효된 메주를 이용하여 제조되고 있다. 본 연구는 일본식으로 만들어진 양조간장과 우리나라 전통방식으로 만들어진 재래식 조선간장으로부터 얻어진 다당의 특성과 면역증진활성을 비교하였다. 조선간장 유래 다당인 KTSP-0는 2- keto-3-deoxy-D-manno-2-octulosonic acid(KDO)(1.

가설 설정

2)Polysaccharide isolated Korea traditional soy sauce made by meju process.
3)KDO means 2-keto-3-deoxy-D-manno-octulosonic acid.

제안 방법

, Gwacheon, Korea) 의 비장을 적출하여 적혈구를 제거하고, 7% FBS를 함유한 RPMI-1640 배지에서 배양하였다. 각 세포에 대한 독성은 농도를 달리 하여 3일간 처리 후 WST-1을 이용하는 cell counting kit(CCK)-8(Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan)을 이용하여 제조사의 지침에 따라 측정하였다(24).
각각의 간장 1 L에 4배의 에탄올을 첨가하여 최종농도가 80%가 되도록 에탄올을 첨가하여 하룻밤 방치한 후, 원심분리(6,000 rpm, 30 min)하여 얻은 침전물을 재용해한 다음 Spectra/Por 2 투석막(MWCO: 12,000-14,000, Spectrum Laboratories Inc., Rancho Dominguez, CA, USA)을 이용하여 2-3일간 투석한 다음 동결건조하여 사용하였다.
전개된 gel은 bromophenol blue로 염색시켜 항체와 반응하여 형성된 침강선을 관찰함으로써 C3의 분해산물을 확인하였다(22). 각각의 반응액은 총보체 용혈의 저지율을 측정함으로써 시료의 보 체계 활성화 경로를 비교 검토하였다.
구성당 분석은 시료를 2 M TFA로 가수분해한 후, 각각 alditol acetate 유도체(19)로 전환시킨 후, SP-2380 capillary column(0.2μm film, 0.25 mm i.d.×30 m, Supelco, Bellefonte, PA, USA)과 GC ACME-6100(Young-Lin Co., Anyang, Korea)을 이용하여 분석하였다.
, Anyang, Korea)을 이용하여 분석하였다. 구성당의 mole%는 peak의 면적비, flame ionization detector (FID)에 대한 반응계수 및 각 구성당의 alditol acetate 유도체의 분자량으로부터 계산하였다.
두 종의 간장유래 다당을 GVB2+ 기본반응계와 2가 금속이온을 모두 제거한 EDTA-GVB2− 반응계 및 Ca2+이온만을 선택적으로 제거한 Mg2+-EGTA-GVB2− 반응계로 나누어 농도별로 항보체활성 (ITCH50)을 비교 측정하였다.
두 종의 간장으로부터 유래한 다당의 면역관련 세포주인 mouse leukaemic monocyte macrophage 유래 RAW 264.7, primary cultured peritoneal macrophage 및 primary cultures spleen cell에 대한 독성을 측정하였다(Fig. 4). RAW 264.
보체계의 활성화 경로 측정은 2차원 면역전기영동(Crossed immuno-electrophoresis)을 이용하여 측정하였다. GVB²⁺ buffer, 10 mM EDTA가 함유된 EDTA-GVB²⁻ buffer, Mg²⁺이온만이 함유된 Mg²⁺-EGTA-GVB²⁻ buffer에 정상인의 혈청과 시료를 각각 혼합하여 37℃, 30분간 반응시킨 후, 25 mM barbital buffer(pH 8.
상기에 제시된 방법으로 회수된 macrophage에 시료를 처리하고 24시간 후 배지를 회수하여 IL-6, IL-12를 ELISA kit(Pharmingen, San Jose, CA, USA)를 구입하여 제조사의 지침에 따라 측정하였다.
따라서 CSP-0 및 KTSP-0의 항보체 활성이 보체계 활성화에 기인한 것인지, 혹은 시료의 보체 저해활성에 의한 것인지를 확인하기 위하여 보체계 활성화에서 가장 중요한 성분으로 알려진 C3의 활성화 여부를 조사하였다. 일반적으로 보체계가 활성화되면 C3는 C3a와 C3b로 분해되므로(23) 시료와 정상인 혈청을 반응시킨 후 1차 전기영동을 실시하고 anti-human C3를 이용하여 2차 면역전기영동을 행함으로써 C3 분해산물을 동정하고자 하였다. 양조간장 유래 CSP-0와 혈청을 기본반응계(GVB²⁺)에서 반응시킨 경우는 C3의 활성화가 일어나 두 개의 침강선이 형성된 것을 관찰할 수 있었다(Fig.
5% anti-human C3 serum이 함유된 1% agarose gel 상에서 약 15시간 동안 2차 전기영동을 행하였다(1 mA/cm). 전개된 gel은 bromophenol blue로 염색시켜 항체와 반응하여 형성된 침강선을 관찰함으로써 C3의 분해산물을 확인하였다(22). 각각의 반응액은 총보체 용혈의 저지율을 측정함으로써 시료의 보 체계 활성화 경로를 비교 검토하였다.

대상 데이터

세포 배양시 사용한 Eagle’s minimal essential medium(EMEM), RPMI-1640, fetal bovine serum(FBS)는 Gibco BRL Co.(Grand Island, NY, USA) 제품을 사용하였다. 구성당 분석 시 사용한 표준당, trifluoroacetic acid(TFA), anti-human C3 serum, thioglycollate는 Sigma Chemical Co.
Mouse leukaemic monocyte macrophage 유래 세포주인 RAW 264.7(ATCC® TIB 71TM) cell은 미국 American Type Culture Collection(ATCC, Rockbille, MD, USA)에서 분양받아 10% FBS 를 함유한 EMEM에서 배양하여 실험에 사용하였다.
7(ATCC^® TIB 71^TM) cell은 미국 American Type Culture Collection(ATCC, Rockbille, MD, USA)에서 분양받아 10% FBS 를 함유한 EMEM에서 배양하여 실험에 사용하였다. Peritoneal macrophage 세포는 6-8주령 웅성 BALB/c mouse(G-Bio Co., Gwacheon, Korea)의 복강에 5% thioglycollate를 주입한 후 72-96시간 내에 유도된 macrophage를 회수하여 사용하였다(23). 비장 세포는 6-8주령의 웅성 ICR mouse(G-Bio Co.
본 실험에 사용한 양조간장은 샘표식품(Gyeonggi, Korea) 제품 중 대두와 밀만을 사용하여 koji 방식으로 만들어진 100% 양조 간장을 대형 유통마트에서 구입하여 사용하였으며, 우리나라 재래식 조선간장은 전북 순창에 소재한 농림부 지정 전통식품 제조업체(제 26호)인 이기남할머니고추장에서 전통방식으로 제조및 숙성된 조선간장을 구입하여 사용하였다. 세포 배양시 사용한 Eagle’s minimal essential medium(EMEM), RPMI-1640, fetal bovine serum(FBS)는 Gibco BRL Co.
, Gwacheon, Korea)의 복강에 5% thioglycollate를 주입한 후 72-96시간 내에 유도된 macrophage를 회수하여 사용하였다(23). 비장 세포는 6-8주령의 웅성 ICR mouse(G-Bio Co., Gwacheon, Korea) 의 비장을 적출하여 적혈구를 제거하고, 7% FBS를 함유한 RPMI-1640 배지에서 배양하였다. 각 세포에 대한 독성은 농도를 달리 하여 3일간 처리 후 WST-1을 이용하는 cell counting kit(CCK)-8(Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan)을 이용하여 제조사의 지침에 따라 측정하였다(24).

데이터처리

시료간 및 처리 농도간 유의성은 ANOVA test 후 구체적인 사후 검증은 p<0.05 수준에서 Duncan’s multiple range test로 실시하였다.
실험결과는 SPSS 12.0(SPSS Inc., IL, USA)을 이용하여 통계처리하였으며 모든 측정 항목에 대한 평균(mean)과 표준편차 (standard deviation, SD)로 나타내었다. 시료간 및 처리 농도간 유의성은 ANOVA test 후 구체적인 사후 검증은 p<0.

이론/모형

중성당 함량은 galactose를 표준물질로 하여 phenol-sulfuric acid 법(15)으로, 산성당 함량은 galacturonic acid를 표준물질로 하여 m-hydroxydiphenyl법(16)으로, 단백질 함량은 표준물질 bovine serum albumin을 사용하여 Bradford법(17)으로, 2-keto-3-deoxy-Dmanno- octulosonic acid(KDO)는 thiobarbituric acid(TBA) 비색정량법(18)을 사용하였다.
항보체 활성(anti-complementary activity)은 Mayer법(20)을 이용하여 시료에 의한 보체 활성화 후, 잔존하는 보체에 의한 적혈구 용혈활성에 근거를 둔 complement fixation test로 측정하였다. 즉정상인의 혈청과 2% gelatin, 3 mM Ca²⁺, 10 mM Mg²⁺이 함유된 GVB²⁺ 완충용액(gelatin veronal buffered saline, pH 7.

성능/효과

2)PSK, a known immuno-active polysaccharide from Coriolus versicolor was used as a positive control and its concentration is 1,000 μg/mL.
CSP-0와 KTSP-0는 비장 유래세포와 macrophage에 대한 세포독성이 없음이 확인되었으며, KTSP-0는 활성화된 복강유래 macrophage 에서 IL-6는 8-1,000 μg/mL의 비교적 넓은 범위에서, IL-12는 40 μg/mL의 농도에서 cytokine의 분비를 증가시켰다.
IL-12에 대한 영향을 측정해 본 결과 8-200 μg/ mL의 농도에서 KTSP-0가 더 높은 효과를 보였으나 그 이상의 농도에서는 두 시료간 차이는 없었다(Fig. 5B).
RAW 264.7에 시료 농도를 달리하여 cytotoxic response를 측정한 결과(Fig. 4A) 양조간장 및 조선 간장 유래 다당 모두 처리농도(0.32-1000 μg/mL) 내에서는 세포독성이 없음이 확인되었으며 200 μg/mL 이상 처리시 세포증식 효과가 있는 것으로 확인되었다.
)을 비교 측정하였다. 그 결과(Fig. 2) 양조간장 유래 다당인 CSP-0의 경우(Fig. 2A), Ca²⁺ 및 Mg²⁺이 모두 존재하는 기본 반응계에서의 활성과 비교할 때 2가 금속이 모두 제거된 반응계에서는 대조군에 비해 거의 완전한 활성의 소실이 관찰되었으나 Mg²⁺이온만 존재하는 반응계에서는 매우 낮은 활성이 유지되는 반면, 조선간장 유래 다당인 KTSP-0의 경우(Fig. 2B), Mg²⁺이온만 존재하는 반응계에서도 활성이 유지되는 결과를 보였다. 이러한 결과 CSP-0는 고전경로를 통해서만 보체계를 활성화 시킬 수있는 반면, KTSP-0는 고전경로와 부경로 모두 활성화시킬 수 있음을 추론할 수 있었다.
C3의 보체계 활성 경로를 확인하기 위해 2차원 면역전기영동을 행하였다. 그 결과, CSP-0는 고전경로로만 보체계를 활성화 시키는 반면, KTSP-0는 고전경로와 부경로 모두를 통해 보체계를 활성화 시키는 것으로 나타났다. CSP-0와 KTSP-0는 비장 유래세포와 macrophage에 대한 세포독성이 없음이 확인되었으며, KTSP-0는 활성화된 복강유래 macrophage 에서 IL-6는 8-1,000 μg/mL의 비교적 넓은 범위에서, IL-12는 40 μg/mL의 농도에서 cytokine의 분비를 증가시켰다.
그러나 Ca2+이온을 선택적으로 제거한 Mg2+-EGTA-GVB2−반응계(Fig. 3Bb)에서는 C3의 침강선은 양조간장에 비해 확실히 줄어들었으며 C3a와 C3b로 분해된 침강선은 양조간장에 비해 높아진 것을 확인할 수 있었다.
금속이온을 모두 제거한 EDTA-GVB2−반응계에서는 C3의 활성화가 진행되지 않아 1개의 침강선이 관찰된 반면, Ca2+이온을 선택적으로 제거한 Mg2+-EGTA-GVB2− 반응계에서는 2개의 침강선이 관찰되었으나 아직 활성화가 되지 않은 C3의 침강선도 확인 할 수 있었다(Fig. 3Ab).
1%의 다당을 얻을 수 있었다. 두 간장 유래 다당 모두보체계 활성화능을 가지고 있으며 활성의 정도는 재래방식으로 제조된 조선간장이 더 높은 것을 확인하였다. 또한 양조간장 유래 다당은 주로 고전경로로만 보체계를 활성화시키는 반면 조선 간장 유래 다당은 고전경로와 부경로 모두 활성화시킬 수 있음을 확인 할 수 있었다.
Inngjerdingen 등(26)의 연구에 의하면 KDO와 같은 특수당을 가진 RG-II 구조는 IL-6와 nerve growth factor(NGF)를 증가시키는 활성을 가지고 있다고 보고하였다. 두 시료간의 성분분석 결과에서도 양조간장 유래 다당에서는 KDO 구조가 없는 것으로 확인되었으나 조선간장 유래 다당은 KDO를 1.1% 가지고 있는 것으로 확인되었다.
두 시료의 활성화된 peritoneal macrophage에서 IL-6와 IL-12 같은 cytokine 분비능을 측정해 본 결과, IL-6의 경우 CSP-0는 40μg/mL 처리시 대조군보다 유의적으로 높아졌으나 그 이상의 농도나 그 이하의 농도에서는 유의적 차이가 없었다.
3Aa). 따라서 CSP-0의 항보체 활성은보체계의 저해가 아닌 직접 활성화에 기인함을 확인할 수 있었다. CSP-0를 Mg²⁺-EGTA-GVB²⁻ 및 EDTA-GVB²⁻ 반응계에서 반응시킨 후 그 분해산물을 관찰한 결과는 Fig.
따라서 본 연구진은 간장유래 다당의 활성화된 peritoneal macrophage에서 IL-6 생성능은 KDO 구조에 기인한 것으로 추정할 수 있었다.
6% 측정되었다. 따라서 양조간장은 제조과정 중 생성된 산에 의해 KDO를 함유한 RG-II 구조가 파괴되지만 재래식 조선간장의 경우 남아있는 것으로 추정할 수 있었다.
7%의 높은 활성을보였다. 따라서 양조간장이나 재래식 조선간장 유래 다당 모두 농도의존적 보체계 활성화능을 가지고 있으며 조선간장이 더 높은 활성화능을 가지고 있음을 알 수 있었다. 조선간장 유래 다당은 보체계의 강력한 활성인자로 알려져 있으며 본 실험에서 양성대조군으로 사용한 구름버섯(Coriolus versicolor, 운지버섯) 기원의 PSK(polysaccharide-K)(23)보다도 높은 활성을 가지고 있었다.
두 간장 유래 다당 모두보체계 활성화능을 가지고 있으며 활성의 정도는 재래방식으로 제조된 조선간장이 더 높은 것을 확인하였다. 또한 양조간장 유래 다당은 주로 고전경로로만 보체계를 활성화시키는 반면 조선 간장 유래 다당은 고전경로와 부경로 모두 활성화시킬 수 있음을 확인 할 수 있었다. 조선간장 유래 다당은 KDO를 가지고 있는 RG-II 구조를 가지고 있어 활성화된 peritoneal macrophage에서 IL-6의 생산능을 높이는 것을 확인하였다.
복강에서 분리된 primary cultured macrophage(Fig. 4B) 및 primary cultured spleen cell(Fig. 4C)에 처리한 결과 두 시료 모두 처리농도(0.32-1000 μg/mL) 내에서는 세포독성이나 증식효과가 없음이 확인되었다.
현재 우리나라에서 시판되고 있는 대부분의 간장은 일본의 koji 방식으로 제조되고 있는 반면, 재래식 조선간장은 자연적으로 미생물이 접종 및 발효된 메주를 이용하여 제조되고 있다. 본 연구결과 양조간장 및 조선간장 모두 발효과정 중 간장의 재료에 들어있는 단백질은 모두 분해되 었지만 대두의 세포벽에 있는 다당은 발효 후에도 남아 있는 것을 알 수 있었다.
CSP-0와 KTSP-0는 비장 유래세포와 macrophage에 대한 세포독성이 없음이 확인되었으며, KTSP-0는 활성화된 복강유래 macrophage 에서 IL-6는 8-1,000 μg/mL의 비교적 넓은 범위에서, IL-12는 40 μg/mL의 농도에서 cytokine의 분비를 증가시켰다. 본 연구를 통해 양조간장보다 조선간장이 보체계 활성화를 통해 높은 면역 증강 효과를 가지고 있는 것으로 확인되었다.
양조간장 및 재래식 조선간장으로부터 80% 에탄올 침전법을 이용하여 침전물을 회수한 결과(Table 1), 양조간장으로부터 5.3 g/L의 고형물(Commercial soy sauce polysaccharide, CSP-0)을 얻었으며 그 성분을 분석한 결과 순수한 산성다당체임을 알 수 있 었다. 양조간장으로부터 얻은 구성당을 분석한 결과 galactose (18.
양조간장 및 조선간장 유래 다당에 대한 보체계 활성화능을 측정한 결과(Fig. 1), 양조간장으로부터 얻은 CSP-0는 1,000 μg/mL 농도에서 ITCH50값이 약 56.0%에 이르는 보체계 활성화능을 보였으며 조선간장으로부터 얻은 KTSP-0는 250 μg/mL에서 54.6%, 500 μg/mL에서는 62.2%, 1,000 μg/mL에서 64.7%의 높은 활성을보였다.
양조간장 유래 다당 CSP-0와 KTSP-0의 보체계 활성화능을 측정한 결과 두 시료 모두 농도의존적으로 증가하는 보체계 활성을 가지고 있었으나, 1,000 μg/mL 농도에서 KTSP-0는 64.7%, CSP-0는 56%의 활성을 나타내었다.
양조간장과 재래간장에서 분리된 다당의 KDO 함량을 측정한 결과(Table 1), 양조간장에서는 KDO가 측정되지 않았지만 재래식 조선간장에서는 1.1±0.6% 측정되었다.
Tilg 등(35)은 IL-6는 염증반응에서 IL-1 receptor antagonist 와 tumor necrosis factor-α(TNF-α)의 수용체의 분비를 증가시키는 anti-inflammatory cytokine에 속한다고 주장하였으며, Xing 등(36) 과 Kaplanski 등(34)도 면역 초기반응이나 염증을 감소시키는 과정에서 IL-6는 anti-inflammatory cytokine이라고 주장하였다. 양조간장과 조선간장 유래 다당은 활성화된 peritoneal macrophage에서 IL-6의 생산에 대한 효과에서 현저한 차이를 보였다.
3 g/L의 고형물(Commercial soy sauce polysaccharide, CSP-0)을 얻었으며 그 성분을 분석한 결과 순수한 산성다당체임을 알 수 있 었다. 양조간장으로부터 얻은 구성당을 분석한 결과 galactose (18.0%), xylose(15.6%), manmose(10.9%), 그리고 Uronic acid (35.5%)가 주 구성당임을 알 수 있었다. 재래식 조선간장으로부터는 양조간장보다 2배 많은 10.
따라서 조선간장의 발효에 어떠한 미생물이 관여하는지 체계적인 연구가 필요하며 이러한 연구를 통해 표준화된 우수한 품질의 조선간장의 제조가 가능하리라 생각된다. 우리는 본 연구를 통해 양조간장보다 조선간장이 보체계 활성화를 통해 높은 면역증강 효과를 가지고 있는 것을 확인하였다. 본 연구는 조선간장의 우수성을 알리는데 기초자료로 활용될 것이라고 생각된다.
2B), Mg²⁺이온만 존재하는 반응계에서도 활성이 유지되는 결과를 보였다. 이러한 결과 CSP-0는 고전경로를 통해서만 보체계를 활성화 시킬 수있는 반면, KTSP-0는 고전경로와 부경로 모두 활성화시킬 수 있음을 추론할 수 있었다.
이상의 결과로부터 두 간장 유래 다당 모두 뚜렷한 보체 활성능을 가지고 있음이 확인되었으며 CSP-0는 주로 고전경로로만보체계를 활성화 시키는 반면 KTSP-0는 고전경로와 부경로 모두 활성화시킬 수 있음을 다시 한번 확인 할 수 있었다.
5%)가 주 구성당임을 알 수 있었다. 재래식 조선간장으로부터는 양조간장보다 2배 많은 10.7 g/L의 고형물(Korean traditional soy sauce polysaccharide, KTSP-0)을 회수할 수 있었으며 주로 mannose(18.2%), galactose(15.9%), xylose(12.7%), rhamnose (9.2%)로 구성된 다당체임을 알 수 있었다.
또한 양조간장 유래 다당은 주로 고전경로로만 보체계를 활성화시키는 반면 조선 간장 유래 다당은 고전경로와 부경로 모두 활성화시킬 수 있음을 확인 할 수 있었다. 조선간장 유래 다당은 KDO를 가지고 있는 RG-II 구조를 가지고 있어 활성화된 peritoneal macrophage에서 IL-6의 생산능을 높이는 것을 확인하였다.
따라서 양조간장이나 재래식 조선간장 유래 다당 모두 농도의존적 보체계 활성화능을 가지고 있으며 조선간장이 더 높은 활성화능을 가지고 있음을 알 수 있었다. 조선간장 유래 다당은 보체계의 강력한 활성인자로 알려져 있으며 본 실험에서 양성대조군으로 사용한 구름버섯(Coriolus versicolor, 운지버섯) 기원의 PSK(polysaccharide-K)(23)보다도 높은 활성을 가지고 있었다.
본 연구는 일본식으로 만들어진 양조간장과 우리나라 전통방식으로 만들어진 재래식 조선간장으로부터 얻어진 다당의 특성과 면역증진활성을 비교하였다. 조선간장 유래 다당인 KTSP-0는 2- keto-3-deoxy-D-manno-2-octulosonic acid(KDO)(1.1%)의 구조를 가지는 rhamnogalacturonan II(RG-II)가 있음을 확인하였다. 양조간장 유래 다당 CSP-0와 KTSP-0의 보체계 활성화능을 측정한 결과 두 시료 모두 농도의존적으로 증가하는 보체계 활성을 가지고 있었으나, 1,000 μg/mL 농도에서 KTSP-0는 64.
조선간장유래 KTSP-0와 혈청을 기본반응계(GVB2+)에서 반응시킨 경우는 C3의 활성화가 일어나 두 개의 침강선이 형성된 것을 관찰할 수 있었으며(Fig. 3Ba) 금속이온을 모두 제거한 EDTA-GVB2− 반응계(Fig. 3Bc)에서는 C3의 활성화가 진행되지 않아 1개의 침강선만 관찰되었다.

후속연구

현재 메주는 자연접종방식으로 만들어져 어떠한 미생물이 대두의 발효에 관여하는지 정확히 규명되지는 못하고 있으며 표준화된 생산이 불가능한 실정이다. 따라서 조선간장의 발효에 어떠한 미생물이 관여하는지 체계적인 연구가 필요하며 이러한 연구를 통해 표준화된 우수한 품질의 조선간장의 제조가 가능하리라 생각된다. 우리는 본 연구를 통해 양조간장보다 조선간장이 보체계 활성화를 통해 높은 면역증강 효과를 가지고 있는 것을 확인하였다.
우리는 본 연구를 통해 양조간장보다 조선간장이 보체계 활성화를 통해 높은 면역증강 효과를 가지고 있는 것을 확인하였다. 본 연구는 조선간장의 우수성을 알리는데 기초자료로 활용될 것이라고 생각된다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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