Objectives : Scutellaria barbata has been widely used in oriental medicine used for treatment of acute and chronic inflammatory diseases. In this study, to investigate the protective effect of Scutellaria barbata on type I allergic response, we determined whether Scutellaria barbata inhibits early o...
Objectives : Scutellaria barbata has been widely used in oriental medicine used for treatment of acute and chronic inflammatory diseases. In this study, to investigate the protective effect of Scutellaria barbata on type I allergic response, we determined whether Scutellaria barbata inhibits early or late allergic responses. Methods : To assess the effect of Scutellaria barbata Pharmacopuncture Extract(SB) in RBL-2H3 cells, we investigated the levels of the markers of degranulation such as ${\beta}$-hexosaminidase and histamine, inflammatory mediator such as IL-4, TNF-${\alpha}$, PGE2 and cysLT, and mRNA expression of cytokines and enzymes. In addition, we determined the levels of intracellular ROS by DCFH-DA assay and the free radical scavenging activity by DPPH method. Results : We found that SB suppressed the release of ${\beta}$-hexosaminidase and histamine and the production of IL-4, TNF-${\alpha}$, PGE2 and cysLT in RBL-2H3 by the antigen stimulation. SB also significantly inhibited the enzyme mRNA expressions, such as HDC2, COX-1, COX-2, 5-LOX and iNOS2, along with reduced cytokine mRNA expressions, such as IL-$1{\beta}$, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, TNF-${\alpha}$ and GM-CSF in RBL-2H3. In addition, SB suppressed the levels of intracellular ROS. Conclusions : Our results indicate that SB protects against type I allergic response and exert an anti-inflammatory effect through the inhibition of degranulation, inflammatory mediator release and mRNA expression of cytokines and enzymes.
Objectives : Scutellaria barbata has been widely used in oriental medicine used for treatment of acute and chronic inflammatory diseases. In this study, to investigate the protective effect of Scutellaria barbata on type I allergic response, we determined whether Scutellaria barbata inhibits early or late allergic responses. Methods : To assess the effect of Scutellaria barbata Pharmacopuncture Extract(SB) in RBL-2H3 cells, we investigated the levels of the markers of degranulation such as ${\beta}$-hexosaminidase and histamine, inflammatory mediator such as IL-4, TNF-${\alpha}$, PGE2 and cysLT, and mRNA expression of cytokines and enzymes. In addition, we determined the levels of intracellular ROS by DCFH-DA assay and the free radical scavenging activity by DPPH method. Results : We found that SB suppressed the release of ${\beta}$-hexosaminidase and histamine and the production of IL-4, TNF-${\alpha}$, PGE2 and cysLT in RBL-2H3 by the antigen stimulation. SB also significantly inhibited the enzyme mRNA expressions, such as HDC2, COX-1, COX-2, 5-LOX and iNOS2, along with reduced cytokine mRNA expressions, such as IL-$1{\beta}$, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, TNF-${\alpha}$ and GM-CSF in RBL-2H3. In addition, SB suppressed the levels of intracellular ROS. Conclusions : Our results indicate that SB protects against type I allergic response and exert an anti-inflammatory effect through the inhibition of degranulation, inflammatory mediator release and mRNA expression of cytokines and enzymes.
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문제 정의
실험 과정에서 RBL-2H3에 β-hexosaminidase release assay, Histamine release assay, IL-4 and TNF-α secretion assay, PGE2 and cysLT secretion assay, RNA extraction and RT-PCR을 이용한 실험적 알레르기 반응의 관찰, 세포내 ROS 생산에 미치는 영향 관찰 등을 통해 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
이에 저자는 세포 탈과립과 염증매개물질 분비 억제에 대한 半枝蓮 藥鍼 抽出物(이하 SB)의 활용 가능성을 살펴보고 응용범위를 넓히기 위해 SB의 RBL-2H3 세포 탈과립과 염증매개물질 분비 억제 효과를 살펴보았다.
이에 저자는 세포 탈과립과 염증매개물질 분비 억제에 대한 半枝蓮 藥鍼 抽出物의 활용가능성을 살펴보고 응용범위를 넓히기 위해 SB가 RBL-2H3 세포생존 및 증식에 미치는 영향, degranulation에 미치는 영향, IL-4와 TNF-α cytokine 생산에 미치는 영향, PGE2와 cysLT 생산에 미치는 영향, cytokine 유전자 발현에 미치는 영향, enzyme 유전자 발현에 미치는 영향, 세포내 ROS 생산에 미치는 영향, DPPH 라디칼 소거활성을 살펴보았다.
제안 방법
Microplate reader(Molecular Devices Co. Ltd., USA)를 사용하여 405∼420 nm에서 흡광도를 측정하여 누출된 PGD2와 cysLT의 양을 계산하였다.
Microplate reader(Molecular Devices Co. Ltd., USA)를 사용하여 450 nm에서 흡광도를 누출된 IL-4와 TNF-α의 양을 계산하였다.
RBL-2H3 cells를 10% FBS를 포함한 DMEM에 현탁 시킨 후 48 well plate(Cornig, USA)에 5×104 cells/ ml의 세포 수가 되도록 분주하여 37℃ 5% CO2 incubator에서 24시간 배양하였다. SB를 농도별(0, 1, 5, 10, 15 및 20 mg/ml)로 처리한 후 1시간 동안 반응시켰다. 배양액을 제거한 후 5 mg/ml의 MTT를 각 well에 넣고 잘 섞어 준 후 4시간 37℃ incubator에서 배양한 후 tetrazolium bromide salt를 제거하고 DMSO를 150 μl씩 분주하여 well에 생성된 formazin이 잘 녹을 수 있게 충분히 흔들어 모두 녹인 후 microplate reader(Molecular Devices, USA)를 사용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하여 평균값과 표준 편차를 구하였다.
Don)은 옴니허브(대구, 한국)에서 구입하여 사용하였다. 半枝蓮 100 g을 증류수로 水洗하여 1 L의 75% Ethanol을 加하여 incubator(iNtRON BIOTECHNOLOGY, Korea)에서 60℃, 90 rpm 조건하에서 24시간 동안 추출하였다. 추출된 용액을 원심분리를 통하여 상층액을 분리하고, 0.
RT-PCR은 one-step RT-PCR PreMix kit(iNtRON Biotechnology, Korea)를 사용하여 45℃에서 30분, 94℃에서 5분간 반응시킨 후 94℃에서 30초간 denaturation시키고, 55℃에서 30초간 annealing시킨 다음, 72℃에서 1분간 extension시키는 cycle을 32회 반복한 뒤, 마지막 extension은 72℃에서 5분간 PCR machine(GeneAmp, PCR system 9,700, USA)에서 수행하였다. 각 PCR products는 2% agarose gel에 loading하여 100 V 조건에서 30분간 전기영동을 통하여 분석하였다.
각 well의 세포들을 Siraganian buffer(119 mM NaCl, 5 mM KCl, 0.4 mM MgCl2, 25 mM PIPES, 40 mM NaOH, pH7.2)로 2번 세척한 다음 각 well당 5.6 mM glucose, 1 mM CaCl2와 0.1% BSA가 포함된 Siraganian buffer를 첨가하고 SB를 농도별(0, 5 및 10 mg/ml)로 1시간 동안 37℃ 5% CO2 incubator에서 배양한 후 DNP- HSA(10 μg/ ml)로 처리하여 1시간 동안 반응시키고 ice bath에서 10분 동안 방치한 후 반응을 종결시켰다.
각 well의 세포들을 Siraganian buffer(119 mM NaCl, 5 mM KCl, 0.4 mM MgCl2, 25 mM PIPES, 40 mM NaOH, pH7.2)로 2번 세척한 다음 각 well당 5.6 mM glucose, 1 mM CaCl2와 0.1% BSA가 포함된 Siraganian buffer를 첨가하고 SB를 농도별(0, 5 및 10 mg/ml)로 1시간 동안 37℃ 5% CO2 incubator에서 배양한 후 DNP-HSA(10 μg/ ml)로 처리하여 1시간 동안 반응시키고 ice bath에서 10분 동안 방치한 후 반응을 종결시켰다.
항산화활성을 측정하기 위하여 DPPH 라디칼 소거활성법은 Itoh T, Umekawa H, Furuichi Y13) 의 방법에 따라 수행되었다. 간략하게 설명하면 0.5 mM DPPH 라디칼 용액 0.1 ml, 99% 에탄올 0.8 ml과 SB 용액 0.1 ml의 반응 혼합물로 측정하였다. 각 용액을 잘 혼합한 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 대조군으로 Vitamin C(L-ascorbic acid)가 사용되었다.
그 후 PBS로 배지에 남아 있는 H2DCF-DA를 제거한 후 SB(0, 5 및 10 mg/ml)를 처리하여 30분 동안 배양하고 DNPHSA(10 μg/ml)에 10분 동안 자극하였다.
그 후 PBS로 배지에 남아 있는 H2DCF-DA를 제거한 후 SB(0, 5 및 10 mg/ml)를 처리하여 30분 동안 배양하고 DNPHSA(10 μg/ml)에 10분 동안 자극하였다. 그 후 얼음 위에서 반응을 정지시킨 후 490 nm(excitation)과 530 nm(emission)에서 fluorometer(SPECTRAMAX M2, Molecular Devices Co. Ltd. USA) 를 사용하여 ROS에 의해 산화된 DCF의 양을 측정하였으며, 다음 식에 의해 계산하였다.
배양액을 제거한 후 5 mg/ml의 MTT를 각 well에 넣고 잘 섞어 준 후 4시간 37℃ incubator에서 배양한 후 tetrazolium bromide salt를 제거하고 DMSO를 150 μl씩 분주하여 well에 생성된 formazin이 잘 녹을 수 있게 충분히 흔들어 모두 녹인 후 microplate reader(Molecular Devices, USA)를 사용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하여 평균값과 표준 편차를 구하였다.
배지교환 후 SB(0, 5 및 10 mg/ml)를 처리하여 1시간 동안 37℃ 5% CO2 incubator에서 배양한 후 DNPHSA(10 μg/ml)를 처리하여 30분 동안 자극시키고 ice bath에서 10분 동안 방치하여 반응을 종결시켰다.
배지교환 후 SB(0, 5 및 10 mg/ml)를 처리하여 1시간 동안 37℃ 5% CO2 incubator에서 배양한 후 DNPHSA(10 μg/ml)를 처리하여 4시간 동안 자극시키고 ice bath에서 10분 동안 방치하여 반응을 종결시켰다.
새로운 DMEM배지로 교환한 후 SB를 농도별(0, 5 및 10 mg/ml)로 세포에 처리하여 1시간 동안 배양한 후 PBS로 2회 세척한 다음 DNP-HSA(10 μg/ml)을 4시간 동안 처리하여 면역반응을 유도하였다.
세포내 ROS의 양은 H2DCF-DA fluorescent probe(Molecular Probes Inc., Eugene, OR, USA)를 사용하여 측정하였다. H2DCF-DA는 ROS 측정에 특이적인 세포에 침투가 가능한 형광 탐촉자이다.
알레르기 즉시반응의 지표인 탈과립에 대한 억제효과를 살펴보기 위하여 β-hexosaminidase의 분비를 측정하였다.
알레르기 즉시반응의 지표인 탈과립에 대한 억제효과를 살펴보기 위하여 histamine의 분비를 측정하였다. RBL-2H3 cells를 10% FBS를 포함한 DMEM에 현탁시킨 후 24 well plate(Corning, USA)에 5×105 cells/ml의 세포수가 되도록 분주하였다.
여기에서 얻어진 수층 100 μl에 1 N NaOH 용액 200 μl와 OPT (o-phthaldialdehyde) 용액 5 μl를 넣고 혼합 후 37℃에서 3분 동안 반응시킨 후 3 N HCl 용액 10 μl를 넣고 혼합하여 2분 동안 방치한 후 360 nm(excitation)과 450 nm(emission)에서 fluorometer(SPECTRAMAX M2, Molecular Devices Co. Ltd. USA)로 형광도를 측정하였다.
半枝蓮 100 g을 증류수로 水洗하여 1 L의 75% Ethanol을 加하여 incubator(iNtRON BIOTECHNOLOGY, Korea)에서 60℃, 90 rpm 조건하에서 24시간 동안 추출하였다. 추출된 용액을 원심분리를 통하여 상층액을 분리하고, 0.2 mm 여과지에서 여과하여 rotary evaporator로 200 ml가 되도록 減壓濃縮한 후 냉동 건조하여 10.3 g의 半枝蓮 藥鍼 抽出物을 얻었다. -20℃에 보관하였다가 실험 직전 생리식염수나 배지에 희석하여 0.
항산화 활성은 ROS와 DPPH 소거활성의 측정을 통해서 조사하였다. 세포내 ROS의 생산에 미치는 영향에서 anti-DNP IgE와 DNP-HSA로 항원항체 면역반응을 유도한 세포는 시간에 따라 ROS 생산이 증가하였으며, SB를 처리한 세포에서 농도의존적으로 세포내 DCF 산화를 감소시켜 ROS의 생산이 감소하는 것으로 나타났다(Fig.
대상 데이터
RBL-2H3(rat basophilic leukemia cell line)은 한국 세포주은행(Korea Cell Line Bank, KCLB)에서 분양 받아 배양하였다. 세포의 배양을 위하여 10% heat-inactivated FBS(Gibco BRL, USA)과 1% penicillin 및 streptomycin(Gibco BRL, USA)을 포함한 DMEM(Gibco BRL, USA) 배양액에서 배양하였다.
본 실험에 사용된 anti-dinitrophenyl(DNP) immunoglobulin E(IgE), DNP-HSA는 Sigma(USA)로부터, Dulbecco's modification Eagle medium (DMEM), fetal bovine serum(FBS), penicillin, streptomycin 및 trypsin-EDTA solution은 Gibco BRL로부터, tetrazolium bromide salt(MTT) 및 dimethylsulfoxide(DMSO)는 Amresco로부터, PGE2와 cysLT kit는 Cayman Chemical로부터, Interleukin(IL)-4와 tumor necrosis factor alpha(TNF-α) kit는 BD Biosciences Pharmingen으로부터, RT-PCR kit(one-step RT-PCR PreMix kit)는 iNtRON Biotechnology, Inc.로부터 구입하여 사용하였다.
본 실험에 사용된 半枝蓮(Scutellaria barbata D. Don)은 옴니허브(대구, 한국)에서 구입하여 사용하였다. 半枝蓮 100 g을 증류수로 水洗하여 1 L의 75% Ethanol을 加하여 incubator(iNtRON BIOTECHNOLOGY, Korea)에서 60℃, 90 rpm 조건하에서 24시간 동안 추출하였다.
RBL-2H3(rat basophilic leukemia cell line)은 한국 세포주은행(Korea Cell Line Bank, KCLB)에서 분양 받아 배양하였다. 세포의 배양을 위하여 10% heat-inactivated FBS(Gibco BRL, USA)과 1% penicillin 및 streptomycin(Gibco BRL, USA)을 포함한 DMEM(Gibco BRL, USA) 배양액에서 배양하였다. 세포는 37℃, 5% CO2 조건하에서 배양하였고, 세포의 증식에 따른 과밀도 현상을 해소하기 위하여 0.
항체의 본체는 immunoglobulin이라고 하는 단백질이고, IgE, IgA, IgG, IgM, IgD의 다섯 종류가 있으며, 알레르기의 대부분은 IgE에 의하여 일어난다. 몸의 조직 중 비만세포는 장기 등을 형성하지 않고 각각 단독으로 존재한다.
데이터처리
成績은 SPSS 17.0K for Windows 통계 프로그램 패키지를 사용하여 평균치±표준편차로 나타내었고 유의수준은 p<0.05로 하였다.
05로 하였다. 각 실험군 간의 통계학적 분석은 one way-ANOVA와 Dunett test 검정을 실시하였다.
이론/모형
cells/ml) were treated with the indicated concentrations(0, 1, 5, 10, 15, and 20 mg/ml) of SB for 1h. Cell viability was evaluated using a colorimetric assay based on MTT assay. Results represent as the mean±SD.
IL-4 and TNF-α concentration was measured from cell supernatant using ELISA method.
SB(5 and 10 mg/ml) was pretreated for 1 h prior to DNP-HSA stimulation for 30 min. PGE2 and cysLT concentration was measured from cell supernatant using ELISA method. The absorbance was measured at 405 nm with a microplate reader.
RBL-2H3 세포의 생존 및 증식에 미치는 영향을 알아보기 위하여 MTT법을 사용하였다. RBL-2H3 cells를 10% FBS를 포함한 DMEM에 현탁 시킨 후 48 well plate(Cornig, USA)에 5×104 cells/ ml의 세포 수가 되도록 분주하여 37℃ 5% CO2 incubator에서 24시간 배양하였다.
항산화활성을 측정하기 위하여 DPPH 라디칼 소거활성법은 Itoh T, Umekawa H, Furuichi Y13) 의 방법에 따라 수행되었다. 간략하게 설명하면 0.
5. 半枝蓮 藥鍼 抽出物은 cytokine 및 enzyme mRNA의 발현량을 억제시켰다.
6. 半枝蓮 藥鍼 抽出物은 세포내 ROS의 생산을 억제시켰다.
Cytokine 유전자 발현에 미치는 영향을 보면 RBL-2H3 cells에서 cytokine 유전자의 발현에 대해 조사한 결과, 항원으로 자극한 세포는 IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, TNF-α과 GM-CSF mRNA의 발현량이 현저하게 증가하였으며, SB를 처리한 세포는 모든 mRNA의 발현이 현저히 감소하는 것으로 나타났다(Fig. 5).
DPPH 라디칼 소거활성에 대해 조사한 결과, vitamin C에서 5, 10 and 15 mg/ml의 농도에서 각각 80.73%, 81.07%와 81.05%의 소거활성을 나타내었고, 반면 SB는 5, 10 and 15 mg/ml의 농도에서 각각 31.10%, 19.29%와 3.24%의 소거활성을 나타내어 농도가 증가할수록 free radical 소거활성이 감소함을 보였다(Fig. 8).
DPPH 소거활성의 측정에서 vitamin C와 SB를 비교하여 볼 때 SB의 농도가 증가할수록 free radical 소거활성이 감소함을 보이는데(Fig. 8), 이러한 결과로 유추할 때 SB에 의한 세포내 ROS 생산의 억제는 radical scavenging activties에 기인한 것이 아니고 다른 기전이 관여하는 것으로 생각된다.
Degranulation에 미치는 영향에서 항원-항체 반응에 의한 β-hexosaminidase 분비에 미치는 SB의 효과를 살펴본 결과 SB는 농도의존적으로 유의성 있는 억제효과를 나타내었고(Fig. 2A), 또한 histamine 분비에 미치는 SB의 효과를 살펴본 결과 SB는 농도의존적으로 유의성 있는 억제효과를 나타내었다(Fig. 2B).
Enzyme 유전자 발현에 미치는 영향을 보면 RBL-2H3 cells에서 비만세포 과립내 L-histidine을 histamine으로 전환시키는 효소인 HDC2 유전자의 발현을 조사한 결과, 항원으로 자극한 세포는 HDC2 mRNA의 발현이 현저히 증가하였으나 SB 처리에 의해 농도의존적으로 발현이 감소하는 것으로 나타났고, prostaglandin과 leukotriene 등의 지질대사물의 생산에 관여하는 염증성 enzyme 유전자의 발현에 대해 조사한 결과, 항원으로 자극한 세포에서 COX-1, COX-2, 5-LOX와 iNOS mRNA 의 발현량이 현저하게 증가하였으며, SB를 처리한 세포에서 mRNA의 발현이 농도의존적으로 감소하는 것으로 나타났다(Fig. 6).
RBL-2H3 cells에서 cytokine 유전자의 발현에 대해 조사한 결과, 아무런 처리를 하지 않은 세포에 비해 항원으로 자극한 세포에서 IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, TNF-α과 GM-CSF mRNA의 발현량이 현저하게 증가하였으며, SB(5 and 10 mg/ml)를 처리한 세포에서 모든 mRNA의 발현이 현저히 감소하는 것으로 나타났다(Fig. 5).
RBL-2H3 cells에서 분비된 IL-4의 양은 아무런 처리를 하지 않은 세포에서 7.62±2.38 pg/ml이었으며, 항원으로 자극한 세포에서 149.80±44.53 pg/ml 로 아무런 처리를 하지 않은 세포에 비해 유의한 (p<0.05) 증가를 나타내었다.
RBL-2H3 cells에서 분비된 PGE2의 양은 아무런 처리를 하지 않은 세포에서 0.06±0.05 pg/ml이었으며, 항원으로 자극한 세포에서 0.49±0.10 pg/ml 로 아무런 처리를 하지 않은 세포에 비해 유의한 (p<0.05) 증가를 나타내었다.
RBL-2H3 cells에서 비만세포 과립내 L-histidine을 histamine으로 전환시키는 효소인 HDC2 유전자의 발현을 조사한 결과 항원으로 자극한 세포에서 HDC2 mRNA의 발현이 현저히 증가하였으나 SB(5 and 10 mg/ml)처리에 의해 농도의존적으로 발현이 감소하는 것으로 나타났다. 또한 prostaglandin과 leukotriene 등의 지질대사물의 생산에 관여하는 염증성 enzyme 유전자의 발현에 대해 조사한 결과, 아무런 처리를 하지 않은 세포에 비해 항원으로 자극한 세포에서 COX-1, COX-2, 5- LOX와 iNOS mRNA의 발현량이 현저하게 증가하였으며, SB(5 and 10 mg/ml)를 처리한 세포에서 mRNA의 발현이 농도의존적으로 감소하는 것으로 나타났다(Fig.
형광을 띠지 않는 H2DCF-DA는 세포내 에스테르 활성에 의해 디아세틸화되고 ROS에 의한 세포내 산화를 통해 2',7'-dichlorofluorescein(DCF)로 형광을 띠게 된다. RBL-2H3 cells에서의 세포내 ROS 의 생산에 미치는 영향에 대해 조사한 결과, antiDNP IgE와 DNP-HSA로 항원-항체 면역반응을 유도한 세포에서 시간에 따라 ROS 생산이 증가하였으며, SB(0, 5 and 10 mg/ml)을 처리한 세포에서 농도의존적으로 세포내 DCF 산화를 감소시켜 ROS의 생산이 감소하는 것으로 나타났다(Fig. 7).
RBL-2H3 세포의 생존 및 증식에 미치는 영향을 알아본 결과 SB를 처리하지 않은 세포는 1.27±0.20의 흡광도를 나타내었고, SB를 농도별(1, 5, 10, 15 및 20 mg/ml)로 처리한 세포에서 각각 1.36±0.08, 1.29±0.15, 1.30±0.10, 1.22±0.14, 및 1.17±0.09의 흡광도를 나타내어 20 mg/ml 농도 이하에서 세포생존 및 증식 데이터의 결과가 유의성이 없었으므로 독성작용이 없는 것으로 나타났다(Fig. 1).
또한 RBL-2H3 cells에서 분비된 TNFα의 양은 아무런 처리를 하지 않은 세포에서 1.04±1.06 ng/ml이었으며, 항원으로 자극한 세포에서 1.58± 0.22 ng/ml로 아무런 처리를 하지 않은 세포에 비해 유의한(p<0.05) 증가를 나타내었다.
또한 histamine 분비에 미치는 SB의 효과를 살펴본 결과 SB 5 mg/ml 농도에서 32.49±15.38%의 억제효과를 나타내었고, SB 10 mg/ml 농도에서 43.52±13.87%의 억제효과를 나타내 농도의존적으로 유의성 있는 억제효과를 나타내었다(Fig. 2B).
RBL-2H3 cells에서 비만세포 과립내 L-histidine을 histamine으로 전환시키는 효소인 HDC2 유전자의 발현을 조사한 결과 항원으로 자극한 세포에서 HDC2 mRNA의 발현이 현저히 증가하였으나 SB(5 and 10 mg/ml)처리에 의해 농도의존적으로 발현이 감소하는 것으로 나타났다. 또한 prostaglandin과 leukotriene 등의 지질대사물의 생산에 관여하는 염증성 enzyme 유전자의 발현에 대해 조사한 결과, 아무런 처리를 하지 않은 세포에 비해 항원으로 자극한 세포에서 COX-1, COX-2, 5- LOX와 iNOS mRNA의 발현량이 현저하게 증가하였으며, SB(5 and 10 mg/ml)를 처리한 세포에서 mRNA의 발현이 농도의존적으로 감소하는 것으로 나타났다(Fig. 6).
항산화 활성은 ROS와 DPPH 소거활성의 측정을 통해서 조사하였다. 세포내 ROS의 생산에 미치는 영향에서 anti-DNP IgE와 DNP-HSA로 항원항체 면역반응을 유도한 세포는 시간에 따라 ROS 생산이 증가하였으며, SB를 처리한 세포에서 농도의존적으로 세포내 DCF 산화를 감소시켜 ROS의 생산이 감소하는 것으로 나타났다(Fig. 7).
세포생존 및 증식에 미치는 영향에서 RBL-2H3 세포의 생존 및 증식에 미치는 영향을 알아본 결과 SB를 농도별로 처리한 세포는 20 mg/ml 농도 이하에서 세포생존 및 증식 데이터의 결과가 유의성이 없었으므로 독성작용이 없는 것으로 나타났다(Fig. 1).
이상을 종합해서 보면 半枝蓮 藥鍼 抽出物은 MTT assay에서 세포생존 및 증식에 영향을 미치지 않았고, β-hexosaminidase release assay와 histamine release assay에서 탈과립을 유의성 있게 억제시켰으며, IL-4와 TNF-α secretion assay에서 IL-4와 TNF-α의 생산을 유의성 있게 억제시켰고, PGE2와 cysLT secretion assay에서 PGE2와 cysLT의 생산을 유의성 있게 억제시켰으며, RNA extraction and RT-PCR에서 cytokine 및 enzyme mRNA의 발현량을 유의성 있게 억제시켰고, 세포내 ROS 측정에서 세포내 DCF 산화를 감소시켜 ROS의 생산을 감소시켰음을 알 수 있었다.
이상의 결과를 종합하여 볼 때 半枝蓮 藥鍼 抽出物은 세포 탈과립과 염증매개물질 분비 억제효과가 있는 것으로 나타났다.
이상의 실험 결과를 총괄해서 볼 때, 半枝蓮 藥鍼 抽出物이 RBL-2H3 세포 탈과립과 염증매개물질의 분비를 효과적으로 억제하는 것으로 나타났으므로, 제I형 알르레기 반응을 유의하게 억제하는 효과가 있는 것으로 생각된다.
항원-항체 반응에 의한 β-hexosaminidase 분비에 미치는 SB의 효과를 살펴본 결과 SB 5 mg/ml 농도에서 65.83±3.19%의 억제효과를 나타내었고, SB 10 mg/ml 농도에서 95.79±4.42%의 억제효과를 나타내 농도의존적으로 유의성 있는 억제효과를 나타내었다(Fig. 2A).
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
RBL-2H3 세포를 이용하여 半枝蓮 藥鍼 抽出物 이 제I형 알레르기 반응에 미치는 영향을 연구한 결과 얻은 결론은?
1. 半枝蓮 藥鍼 抽出物은 세포생존 및 증식에 영향을 미치지 않았다.
2. 半枝蓮 藥鍼 抽出物은 β-hexosaminidase와 histamine의 분비를 억제시켰다.
3. 半枝蓮 藥鍼 抽出物은 IL-4와 TNF-α의 생산을 억제시켰다.
4. 半枝蓮 藥鍼 抽出物은 PGE2와 cysLT의 생산을 억제시켰다.
5. 半枝蓮 藥鍼 抽出物은 cytokine 및 enzyme mRNA의 발현량을 억제시켰다.
6. 半枝蓮 藥鍼 抽出物은 세포내 ROS의 생산을 억제시켰다.
알레르기의 유래는?
알레르기란 그리스어의 allos(change)+ergo(action), 즉 생체의 변화된 반응이라는 뜻의 합성어에서 유래되었다1). 정상적인 경우 인체에 해를 끼치지 않는 물질에 대해 면역체계가 이상반응을 일으키는 것을 말하며, 현대에 와서 그 발생이 더 많아졌다2).
半枝蓮란?
半枝蓮(Scutellaria barbata D. Don)은 꿀풀과 식물 半枝蓮의 全草이다. 性味는 맛은 맵고 성질은 平하다.
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