뱀머리돌고래, Steno bredanensis에서 분리된 Enterococcus faecium의 특성 Characteristics of Enterococcus faecium isolated from rough-toothed dolphin, Steno bredanensis원문보기
제주도에서 좌초된 뱀머리돌고래, Steno bredanensis에서 Enterococcus faecium이 분리 되었다. E. faecium은 간, 비장, 신장, 심장, 폐에서 $1.54{\times}10^6$ cfu/g까지 분리 되었다. E. faecium KCCM 12118과 분리균주 사이의 효소 활성은 차이가 없었고 생화학적 특성은 같거나 유사하였다. 모든 분리균주는 6 종류 항균제에 대해 다재내성을 갖고 있었으나 chloramphenicol과 vancomycin에 대한 내성은 없었다.
제주도에서 좌초된 뱀머리돌고래, Steno bredanensis에서 Enterococcus faecium이 분리 되었다. E. faecium은 간, 비장, 신장, 심장, 폐에서 $1.54{\times}10^6$ cfu/g까지 분리 되었다. E. faecium KCCM 12118과 분리균주 사이의 효소 활성은 차이가 없었고 생화학적 특성은 같거나 유사하였다. 모든 분리균주는 6 종류 항균제에 대해 다재내성을 갖고 있었으나 chloramphenicol과 vancomycin에 대한 내성은 없었다.
Enterococcus faecium was isolated from the internal organs of the rough-toothed dolphine, Steno bredanensis which was stranded at Jeju island. E. faecium were isolated from the liver, spleen, kidney, heart and lung up to $1.54{\times}10^6$ cfu/g. No significant differences of bacterial en...
Enterococcus faecium was isolated from the internal organs of the rough-toothed dolphine, Steno bredanensis which was stranded at Jeju island. E. faecium were isolated from the liver, spleen, kidney, heart and lung up to $1.54{\times}10^6$ cfu/g. No significant differences of bacterial enzyme activities between E. faecium KCCM 12118 and the isolates were found. Biochemical constellation was the same or similar to that of E. faecium KCCM 12118 according to API20 strep. All isolates had the multi-drug resistance to 6 antibiotics by an agar disk diffusion method but these isolates didn't have resistance to chloramphenicol and vancomycin.
Enterococcus faecium was isolated from the internal organs of the rough-toothed dolphine, Steno bredanensis which was stranded at Jeju island. E. faecium were isolated from the liver, spleen, kidney, heart and lung up to $1.54{\times}10^6$ cfu/g. No significant differences of bacterial enzyme activities between E. faecium KCCM 12118 and the isolates were found. Biochemical constellation was the same or similar to that of E. faecium KCCM 12118 according to API20 strep. All isolates had the multi-drug resistance to 6 antibiotics by an agar disk diffusion method but these isolates didn't have resistance to chloramphenicol and vancomycin.
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문제 정의
E. faecium이 고래류에서 분리된 보고는 없으므로 이번 연구에서는 뱀머리돌고래에서 처음 분리된 E. faecium의 특성을 조사하고자 하였다.
제안 방법
, 1995) 동정하였다. 16S rRNA 염기서열 분석법은 27f, 1492r primer를 사용하였으며 PCR (polymerase chain reaction) 법으로 세균의 유전자 부분을 증폭한 후 sequencing을 실시하고 GenBank의 Blast 분석을 실시하여 종을 동정하였다.
간, 비장, 심장 시료로부터 각 1 균주씩, 신장과 폐 시료로부터 각 2 균주씩 총 7 균주를 무작위로 선정하였으며 API20 strep kit (Biomerieux, France)와 16S rRNA 염기서열 분석으로 (Wiik et al., 1995) 동정하였다. 16S rRNA 염기서열 분석법은 27f, 1492r primer를 사용하였으며 PCR (polymerase chain reaction) 법으로 세균의 유전자 부분을 증폭한 후 sequencing을 실시하고 GenBank의 Blast 분석을 실시하여 종을 동정하였다.
부검시 적출된 뱀머리돌고래의 간, 비장, 신장, 심장, 폐 조직의 정량적 세균 수 분석을 위해 조직과 멸균된 PBS (phosphate buffer saline)를 1:9 (w/v)로 혼합하여 pellet pestle (Sigma, USA)를 사용하여 마쇄하였다. 마쇄된 조직을 PBS로 10 배씩 단계 희석한 후 BHIA (brain heart infusion agar)에 100㎕를 도말하였고 37℃로 유지된 배양기에서 48시간 동안 배양하여 형성된 집락의 수를 측정하였다.
부검시 적출된 뱀머리돌고래의 간, 비장, 신장, 심장, 폐 조직의 정량적 세균 수 분석을 위해 조직과 멸균된 PBS (phosphate buffer saline)를 1:9 (w/v)로 혼합하여 pellet pestle (Sigma, USA)를 사용하여 마쇄하였다. 마쇄된 조직을 PBS로 10 배씩 단계 희석한 후 BHIA (brain heart infusion agar)에 100㎕를 도말하였고 37℃로 유지된 배양기에서 48시간 동안 배양하여 형성된 집락의 수를 측정하였다.
분리된 세균의 효소 활성은 API ZYM kit (Biomerieux, France)를 사용하여 조사하였으며 표준균주인 E. faecium KCCM 12118 (ATCC 19434)와 비교하였다.
대상 데이터
2012년 8월 26일에 제주도 김녕 연안에 좌초된 뱀머리돌고래는 치료 과정에서 2012년 8월 31일에 폐사하였고 사체는 냉동보관 후 2013년 2월 18일에 국립수산과학원 고래연구소에서 부검되었다 (Fig. 1).
83 m, 체중은 최대 155 kg으로 알려져 있다(West et al., 2011). 2012년에 제주도에서 뱀머리돌고래 1마리가 좌초되었고 구조되어 치료를 받는 도중에 폐사하였다. 폐사원인을 조사하기 위해 부검이 실시되었고 죽은 뱀머리돌고래의 내부 장기에서 Enterococcus faecium이 분리되었다.
검사된 뱀머리돌고래는 체장 214 cm, 체중 71.3 kg의 암컷이었고 부검에서 소화가 되지 않은 어류, 뼈와 함께 비닐 등 이물질이 위에서 다량 발견되었다. 뱀머리돌고래의 간, 신장, 비장, 심장과 폐에서 세균이 분리되었다.
항균제 내성의 판정은 CLSI의 Enterococcus spp.에 대한 내성 기준에 따라 해석하였고 실험의 정도관리를 위한 대조균주로 Staphylococcus aureus ATCC 25923을 사용하였다.
이론/모형
분리된 세균의 항균제 감수성은 CLSI (2006)의 disc diffusion 법으로 8 종류의 항균제, ampicillin, chloramphenicol, ciprofloxacin, doxycycline, erythromycin, norfloxacin, tetracycline, vancomycin 에 대해 조사하였고 37℃에서 16-24 시간 동안 배양한 후에 저지대 크기를 측정하였다. 항균제 내성의 판정은 CLSI의 Enterococcus spp.
성능/효과
API ZYM kit에 의한 효소 이용능 확인 결과는 7 개 분리균주와 E. faecium KCCM 12118이 모두 동일하여 esterase (C4), esterase lipase (C8), leucine arylamidase, naphtol-AS-BI-phosphohydrolase, β-glucuronidase, β-glucosidase의 활성을 갖고 있었다 (Table 2).
54 × 106 cfu/g까지 분리 되었다. E. faecium KCCM 12118과 분리균주 사이의 효소 활성은 차이가 없었고 생화학적 특성은 같거나 유사하였다. 모든 분리균주는 6 종류 항균제에 대해 다재내성을 갖고 있었으나 chloramphenicol과 vancomycin에 대한 내성은 없었다.
faecium로 재확인되었다. 분리 균주 중에서 2개 균주는 E. faecium (accession number JN560903.1)과 100% 일치하였고 3개 균주는 E. faecium (JN560903.1), 1개 균주는 E. faecium (KC422716.1), 또 다른 1개 균주는 E. faecium (JN560869.1)과 99% 일치하였다.
분리 균주의 생화학적 성상은 1 균주의 API 20 strep kit에 의한 생화학적 성상이 표준 균주인 E. faecium KCCM 12118과 동일하였고 6 균주는 E. faecium KCCM 12118과 달리 αGAL (6-bromo-2-naphthyl-αD-galactopyranoside)가 양성반응을 나타내었으나 (Table 1) 모두 E. faecium 로 동정되었다.
후속연구
E. faecium이 살아 있는 어류에서 분리되었다는 보고는 없으나 우리나라 수산물 시장에서 유통되는건 오징어와 쥐치포에서 검출된 보고가 있어 (Ham, 2007) 해산 어류에도 E. faecium이 분포할 가능성이 있으 므로 지속적인 분포조사가 필요할 것으로 생각된다.
faecium이 폐사에 직접적인 영향을 주었을 증거를 확보하지 못하였다. 그러나 E. faecium이 내부 장기에서 분리 되었고 특히 폐에서 가장 많이 분리 되었으므로 폐 등에서 병리조직학적 변화를 일으켰을 가능성이 높을 것이라고 생각된다.
, 2006) 유일한 보고이다. 이번 연구에서 처음으로 뱀머리돌고래의 폐, 심장, 신장, 비장, 간에서 E. faecium이 분리된 결과는 향후 고래류 질병 연구에 활용될 것으로 기대된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
우리나라 연안에는 어떤 고래류가 분포하고 있는가?
우리나라 연안에는 밍크고래, Balaenoptera acutorostrata, 긴부리참돌고래, Delphinus capensis 등 35종의 고래류가 분포하고 있다 (Kim et al., 2000; Sohn et al.
Enterococcus faecium란?
E. faecium은 그람 양성, 알파 용혈성 또는 용혈성이 없는 Enterococcus에 속하는 세균이고 사람의 장내에서 공생하지만 최근에는 신생아의 수막염을 일으키거나 (Ryan and Ray, 2004) 노인에게 폐렴을 일으 키기도 하는 것으로 알려졌다 (Kimura and Kobayashi, 2011).
우리나라에서 고래류에 관한 연구의 문제점은?
, 2012). 고래류는 먹이사슬의 최상위 포식자로 해양 생태계의 중요한 구성원임에도 불구하고 우리나라에서 고래류 질병에 관한 연구는 거의 이뤄지지 않고 있다.
참고문헌 (12)
Bracht, A.J., Brudea, R.L., Ewing, R.Y., Manire, C.A., Burea, K.A., Rosa, C., Beckmen, K.B., Maruniak, J.E. and Romero, C.H.: Genetic identification of novel poxviruses of cetaceans and pinnipeds. Arch. Virol., 151, 423-438, 2006.
CLSI: Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; Sixteenth informational supplement M100-S16. Clinical and Laboratory Standards Institute, Wayne, Pennsylvania, USA. 2006.
Ham, H.J.: E. faecalis and E. faecium isolated in dried marine products. J. Fd. Hyg. Safety, 22(4), 294-299, 2007.
Kim, Z.G., Lee J.U., Baik, C.I. and Sohn, H.: Whales and dolphins off Korean peninsula. Hangeul Graphics, Busan, Korea, p.133. 2000.
Kimura, Y. and Kobayashi, I.: A case of pneumonia due to Enterococcus faecium after near drowing. Kansenshogaku Zasshi. 85(4), 380-383, 2011.
Pier, G.B. and Madin, S.H.: Streptococcus iniae sp. nov., a beta hemolytic streptococcus isolated from an Amazon freshwater dolphin, Inia geoffrensis. Int. J. Syst. Bacteriol. 26, 545-553, 1976.
Ryan, K.J. and Ray, C.G.: Sherris Medical Microbiology (4th ed.). McGraw Hill. pp. 294-295. ISBN 0-8385-8529-9.
Sohn, H.S., Park, K.J., An, Y.R., Choi, S.G., Kim, Z.G., Kim, H.W., An, D.H., Lee, Y.R. and Park, T.G.: Distribution of whales and dolphins in Korean waters based on a Sighting Survey from 2000 to 2010. Kor. J. Fish Aquat. Sci. 45(5), 486-492, 2012.
Wang, J.T., Chang, S.C., Wang, H.Y., Chen, P.C., Shiau, Y.R., Lauderdale, T.L. and Hospitals T.: High rates of multidrug resistance in Enterococcus faecalis and E. faecium isolated from inpatients and outpatients in Taiwan. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, 75, 406-411, 2003.
Wiik, R., Stackebrandt, E., Valle, O., Daae, F.L., Rodseth, O.M. and Andersen, K.: Classfication of fish-pathogenic vibrio based on comparative 16S rRNA analysis. Int. J. Systematic Bacteriol., 45: 421-428, 1995.
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