10% 질산으로 탈회과정을 거친 골수생검조직에서는 각종 병리검사가 불가능하거나 재현성이 극히 제한적이었다. 각 실험군의 고정액으로는 산을 포함한 고정액과 산 비포함 고정액으로 나누어 사용하고, 탈회액으로는 산성 탈회액과 알카리성 탈회액(EDTA계열)으로 나누어 사용하였으며, 단계별 시간을 각각 다르게 하여 실험하였다. 산이 포함된 고정액 및 탈회액을 사용하였을 경우 모든 병리검사가 불가능할 정도로 검체가 불량하였다. 그러나 EDTA 계열의 탈회액으로 처리한 검체들은 EBV ISH에서는 비특이적 반응이 없어졌으며 FISH, DNA, RNA 검사에서도 병리진단이나 각종 연구에 적합한 수준의 결과를 얻었다. 골수생검조직의 고정방법과 탈회방법을 개선함으로써 ISH, FISH, DNA 검사뿐만 아니라 RNA 연구도 가능하게 하며 각종 검사법의 민감도, 특이도 및 재현성을 확보할 수 있게 되었다. 골수생검조직을 이용한 각종 검사법의 안정화로 환자의 진단, 예후 예측 및 치료 방침결정에 기여 할 수 있을 것으로 생각된다.
10% 질산으로 탈회과정을 거친 골수생검조직에서는 각종 병리검사가 불가능하거나 재현성이 극히 제한적이었다. 각 실험군의 고정액으로는 산을 포함한 고정액과 산 비포함 고정액으로 나누어 사용하고, 탈회액으로는 산성 탈회액과 알카리성 탈회액(EDTA계열)으로 나누어 사용하였으며, 단계별 시간을 각각 다르게 하여 실험하였다. 산이 포함된 고정액 및 탈회액을 사용하였을 경우 모든 병리검사가 불가능할 정도로 검체가 불량하였다. 그러나 EDTA 계열의 탈회액으로 처리한 검체들은 EBV ISH에서는 비특이적 반응이 없어졌으며 FISH, DNA, RNA 검사에서도 병리진단이나 각종 연구에 적합한 수준의 결과를 얻었다. 골수생검조직의 고정방법과 탈회방법을 개선함으로써 ISH, FISH, DNA 검사뿐만 아니라 RNA 연구도 가능하게 하며 각종 검사법의 민감도, 특이도 및 재현성을 확보할 수 있게 되었다. 골수생검조직을 이용한 각종 검사법의 안정화로 환자의 진단, 예후 예측 및 치료 방침결정에 기여 할 수 있을 것으로 생각된다.
A bone marrow biopsy that has undergone decalcification with 10% nitric acid could not be used for various pathological tests and had extremely limited reproducibility. The fixing solution of each experimental group was differentiated in usage, one solution including acid and the other not. The use ...
A bone marrow biopsy that has undergone decalcification with 10% nitric acid could not be used for various pathological tests and had extremely limited reproducibility. The fixing solution of each experimental group was differentiated in usage, one solution including acid and the other not. The use of the decalcification solution was separated into either acidic or alkaline (EDTA), and further experiments were conducted with differing time phases. When using a fixing solution and decalcification solution which included acid, the specimens were faulty to the extent that all pathological tests were impossible. However specimens that were processed with an EDTA type decalcification solution did not display a non-specific reaction in EBV ISH and were even able to produce results that were at a level suited to various studies or a pathological diagnosis in the FISH, DNA, RNA tests. By improving the fixing and decalcification of bone marrow biopsy, the study was able to make possible ISH, FISH, DNA tests as well as RNA study, and secured the sensitivity, specificity, and reproducibility of various test methods. The stabilization of various test methods that use bone marrow biopsy contributes to the diagnosis, prognosis, prediction, treatment of the patient and provide guidelines for decision-making.
A bone marrow biopsy that has undergone decalcification with 10% nitric acid could not be used for various pathological tests and had extremely limited reproducibility. The fixing solution of each experimental group was differentiated in usage, one solution including acid and the other not. The use of the decalcification solution was separated into either acidic or alkaline (EDTA), and further experiments were conducted with differing time phases. When using a fixing solution and decalcification solution which included acid, the specimens were faulty to the extent that all pathological tests were impossible. However specimens that were processed with an EDTA type decalcification solution did not display a non-specific reaction in EBV ISH and were even able to produce results that were at a level suited to various studies or a pathological diagnosis in the FISH, DNA, RNA tests. By improving the fixing and decalcification of bone marrow biopsy, the study was able to make possible ISH, FISH, DNA tests as well as RNA study, and secured the sensitivity, specificity, and reproducibility of various test methods. The stabilization of various test methods that use bone marrow biopsy contributes to the diagnosis, prognosis, prediction, treatment of the patient and provide guidelines for decision-making.
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문제 정의
본 실험은 삼성서울병원 병리과에서 수행된 2009년도 질 향상 활동 과제이며, 목적은 골수생검조직을 처리하는 다양한 종류의 고정액과 탈회액 중에서 최적의 고정액, 고정시간, 탈회액, 탈회시간을 찾고, 고정액 및 탈회액으로 인한 DNA 파괴를 최소화함으로써 각종 분자병리검사의 가능성을 추구하고, 동시에 검사의 재현성을 확보하는데 있다.
제안 방법
실험 방법으로는 고정액은 산 포함 고정액과 산 비포함 고정액으로 구분하고, 고정시간은 4, 8, 24시간으로 나누어 실험하였으며 탈회액은 산성 탈회액, 알칼리성 탈회액(EDTA 계열)으로 구분하고, 탈회시간은 4, 8, 12, 24, 32, 48시간으로 나누어 실험하였다. 고정액 및 탈회액 조합은 1단계로 산 포함 고정액과 산성 탈회액, 산 포함 고정액과 알칼리성 탈회액으로, 2단계는 산 비포함 고정액과 산성 탈회액, 산 비포함 고정액과 알카리성 탈회액으로, 3단계는 산 비포함 고정액과 알카리성 탈회액으로 조합하여 실험하였다.
골수 생검조직을 10% 중성 완충 포르말린 고정액과 5% EDTA, 10% EDTA, Tris/EDTA 탈회액에 넣은 후 고정 및 탈회시간을 24/32시간, 24/48시간에서 실험하였다. 10% 중성 완충 포르말린 고정액으로 고정한 후 EDTA 탈회액으로 탈회 시 각각의 검사에서 양호한 성적을 얻었다(Table 5).
골수생검조직을 10% 포르말린 고정액과 5% 질산, TBD-1, 5% EDTA, 10% EDTA, Tris/EDTA 탈회액에 넣은 후 고정 및 탈회시간을 24/8시간, 24/32시간, 24/48시간에서 실험하였다. 10% 포르말린 고정액으로 교체한 후 각각의 검사에서 호전되었으나 검체에 적용하기에는 미흡하였다.
골수생검조직을 초산 아연 포르말린 고정액과 5% 질산, TBD-1, 5% EDTA, 10% EDTA, Tris/EDTA 탈회액에 넣은 후 고정 및 탈회시간을 4/4시간, 24/8시간, 24/32시간, 24/48시간에서 실험하였다. 고정액으로 사용한 초산 아연 포르말린 고정액은 박절 용이성은 용이하나 EBV 동소교잡반응, C-MYC 형광동소교잡반응, DNA 중합 효소연쇄반응 검사의 검체로는 부적합한 것으로 나타났다(Table 3).
실험 방법으로는 고정액은 산 포함 고정액과 산 비포함 고정액으로 구분하고, 고정시간은 4, 8, 24시간으로 나누어 실험하였으며 탈회액은 산성 탈회액, 알칼리성 탈회액(EDTA 계열)으로 구분하고, 탈회시간은 4, 8, 12, 24, 32, 48시간으로 나누어 실험하였다. 고정액 및 탈회액 조합은 1단계로 산 포함 고정액과 산성 탈회액, 산 포함 고정액과 알칼리성 탈회액으로, 2단계는 산 비포함 고정액과 산성 탈회액, 산 비포함 고정액과 알카리성 탈회액으로, 3단계는 산 비포함 고정액과 알카리성 탈회액으로 조합하여 실험하였다.
대상 데이터
본 실험에 사용된 검체는 2009년도에 삼성서울병원에 내원한 환자의 골수생검조직(463건)을 이용하였다.
본원에서 개선한 탈회 방법은 동일한 검사를 시행하는 의료진들에게 검사 결과의 질을 향상시킬 수 있는 방법이 될 것으로 생각된다. 또한 골수를 이용한 유전자 발현 연구를 하는 혈액종양내과, 병리과, 진단검사의학과에서는 골수생검조직과 함께 다른 생검조직으로도 연구를 할 수 있게 되어 이 분야의 연구발전에 크게기여할 것으로 생각된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
조직처리과정중 고정 단계의 목적은 무엇인가?
조직처리과정 중 가장 중요한 단계는 고정이며 그 목적은 자가융해 방지, 부패 방지, 조직의 보존, 조직의 경화, 염색의 매염 효과를 얻기 위한 것이다(KAUPCLS, 2006).
고정액의 종류는 무엇이 있는가?
고정액은 10% 중성 완충 포르말린 용액, Zenker 용액, Bouin 용액, Carnoy 용액 등이 있으며 골조직을 고정하기 위해서는 10% 중성 완충 포르말린 용액을 일반적으로 사용한다. 그 이유는 탈회작용으로 생기는 결체조직의 팽창이 비교적 적기 때문이다(Cotelingam, 2003; Lee 등, 2008).
골조직을 고정하기 위해 포르말린 용액을 사용하는 이유는?
고정액은 10% 중성 완충 포르말린 용액, Zenker 용액, Bouin 용액, Carnoy 용액 등이 있으며 골조직을 고정하기 위해서는 10% 중성 완충 포르말린 용액을 일반적으로 사용한다. 그 이유는 탈회작용으로 생기는 결체조직의 팽창이 비교적 적기 때문이다(Cotelingam, 2003; Lee 등, 2008).
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