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문제 정의
- 본 연구에서는 일반적으로 접하기 쉽고 음용이 가능한 형태의 옥수수수염 추출액을 이용하여 지역사회 폐렴의 주요 원인균인 K. pneumoniae에 대한 항균능력 보유여부를 시험하였다. K.
- 이에 본 연구에서는 미국 Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI)의 항균제 감수성 검사의 표준균주인 Escherichia coli ATCC 25922균주[7]와 K. pneumoniae ATCC 13883 균주 및 임상에서 분리된 세균들을 대상으로 옥수수 수염 추출액의 항균효과를 확인하고자 하였다.
제안 방법
- 배지의 중앙에 ertapenem 디스크(30 μg, BBL)를 놓은 후, 시험균주를 백금이로 디스크로부터 평판의 가장자리로 한 줄로 굵게 접종하였다. 36℃로 호기성 환경에서 18시간 배양 후 시험균주 접종선중앙쪽 말단부가 다른 부위에 비해서 더 넓게 증식되면 양성으로 판정하였다(Table 1).
- Double-disk synergy (DDS) 시험을 하였다[9]. 세균 부유액을 면봉으로 Mueller-Hinton 한천에 고르게 접종한 후, 배지의중앙에 amoxicillin-clavulanic acid (20 μg/10 μg, BBL), 그 주위에는 30 μg의 cefotaxime, ceftazidime 및 aztreonam 디스크를 놓았다.
- E. coli ATCC 25922의 탁도를 McFarland No. 0.5로 맞춘후 MacConkey 한천(BBL)에 고르게 접종하였다. 배지의 중앙에 ertapenem 디스크(30 μg, BBL)를 놓은 후, 시험균주를 백금이로 디스크로부터 평판의 가장자리로 한 줄로 굵게 접종하였다.
- 5% agarose gel (Seakem LE agarose, FMC Bioproducts, MA, USA)에 20분간 전기영동하여 증폭산물의 유무를 확인하였다. PCR 증폭산물을 추출하여서 sequencease version 2.0 DNA sequenicing kit (US biochemicals, OH, USA)를 이용하여서 양방향으로 염기서열을분석하였다.
- SHV-2a, -5, -12, GES-5, CTX-M형 및 KPC형 β-lactamase를생성하는 세균은 class A ESBL 생성여부 확인을 위한 DDS시험에서 모두 양성반응을 보였고 GES-5, NDM-1 및 KPC형 β-lactamase 생성세균은 carbapenemase 생성여부를 확인하는 carbapenem 디스크를 이용한 Hodge 변법시험에서 양성반응을 보였으며 NDM-1 생성균주는 EDTA와 carbapenem 디스크를 이용한 MBL 생성여부를 확인하는 시험에서 양성반응을보였다(Table 1).
- 항균제 내성세균 30주는 본연구팀이 수집한 것으로 이들이 생성하는 효소는 broad-spec-trum β-lactamase (BSBL)인 SHV-1 (n=1), extended-spectrum β-lactamase (ESBL)인 SHV-2a (n=2), SHV-12 (n=5), CTX-M-14 (n=1), CTX-M-15 (n=1), CTX-M-3과 SHV-12 동시생성균주(n=2), CTX-M-14와 SHV-12 동시생성 균주(n=1)였으며 carbapenemase인 GES-5 (n=5), KPC-2 (n=6), KPC-3 (n=4), NDM-1 (n=2)이었다. 대상 균주의 균종은 MALDI-TOF (Bruker Daltonics, Bremen, Germany) 및 16S rRNA 염기서열분석으로 동정하였다.
- pneumoniae의 항균제 내성획득 기전은 항균제에 대한 가수분해 능이 있는 효소의 생성, 세포외막 단백(outer membrane protein)의 변화, 결합 단백의 변성에 의한 친화도 변이, 유출 펌프(efflux pump)의 과량발현 등 비효소적 기전이 있으며 이 가운데 가장 중요한 기전은 효소의 생성이다. 따라서 본 연구의 대상이 된 K. pneumoniae는 이 균이 생성하는 주요 효소인 β-lactamase의 종류에 따라 효소를 생성하지 않는 표준균주, BSBL 생성균주, ESBL 생성균주 및 carbapenemase 생성 균주로 구분하였다(Table 1).
- 5로 맞춘후 MacConkey 한천(BBL)에 고르게 접종하였다. 배지의 중앙에 ertapenem 디스크(30 μg, BBL)를 놓은 후, 시험균주를 백금이로 디스크로부터 평판의 가장자리로 한 줄로 굵게 접종하였다. 36℃로 호기성 환경에서 18시간 배양 후 시험균주 접종선중앙쪽 말단부가 다른 부위에 비해서 더 넓게 증식되면 양성으로 판정하였다(Table 1).
- 균주이다. 본 연구를 위하여 각 그룹별로 해당되는 세균에 대해 McFarland No. 0.5의 탁도에서 각각 103배와 104배희석하여 3회 반복시험 하였다.
- 5로 탁도를 맞추었다. 세균 부유액을 면봉으로 Mueller-Hinton 한천(BBL)에 고르게 접종한 후, EDTA 디스크(5 mM)를 가운데 두고 imipenem과 meropenem 디스크(각 10 μg, BBL)를 양옆에 두되 가장자리 간격이 1.5 cm가 되도록 배치하였다. 세균이 접종된 배지는 36℃ 항온기에 18시간배양 후 결과를 판독하였는데, 두 디스크 사이에서 상승효과에 의한 억제대의 확장현상이 관찰되면 양성으로 판정하였다.
- Double-disk synergy (DDS) 시험을 하였다[9]. 세균 부유액을 면봉으로 Mueller-Hinton 한천에 고르게 접종한 후, 배지의중앙에 amoxicillin-clavulanic acid (20 μg/10 μg, BBL), 그 주위에는 30 μg의 cefotaxime, ceftazidime 및 aztreonam 디스크를 놓았다. 중앙과 주변 디스크의 가장자리 간격은 1.
- 5 cm가되게 하였다. 세균이 접종된 배지는 36℃ 항온기에 18시간 배양 후 결과를 판독하는데, 두 디스크 사이에서 상승효과에 의한 억제대의 확장현상이 관찰되면 양성으로 판정하였다 (Table 1).
- 5 cm가 되도록 배치하였다. 세균이 접종된 배지는 36℃ 항온기에 18시간배양 후 결과를 판독하였는데, 두 디스크 사이에서 상승효과에 의한 억제대의 확장현상이 관찰되면 양성으로 판정하였다.
- 시험 균주를 36℃ 항온기에서 18시간 진탕배양 한 후, 새로운 배지에 1% 접종하여 탁도가 McFarland No. 0.5가 될 때까지 재배양하였으며, 배양액을 103배와 104배 희석한 후, 평판배지에 도말배양하고 다시 36℃ 항온기에서 18시간배양하여 균주의 집락생성 여부를 확인하였으며 이를 3회 반복실험 하였다.
- 시험 세균의 genomic DNA 추출액 2 μl, primer 각 1 μl (10 pmole)를 Taq DNA polymerase 1 unit/10 μl, 2X reaction buffer, 4 mM MgCl2, enzyme stabilizer, sediment, loading dye, pH9.0의 0.5 mM 각 dATP, dCTP, dGTP 및 dTTP가 포함된 2X Prime Taq premix (Genetbio, Daejeon, Korea)에 혼합하여 Gene Amp PCR System 9600 (Perkin-Elmer Cetus Co., Norwalk, Ct., USA)으로 94℃에서 30초간 denaturation, 60℃ 에서 30분간 annealing, 72℃에서 30분간 extension을 30회 반복 시행하였다. 증폭산물 3 μl를 1.
- 시험을 위하여 선택된 세균들은 표준균주, BSBL 생성균주, ESBL 생성균주 및 carbapenemase 생성균주 등 4개 그룹으로분류하였으며 표준균주를 제외한 균주들을 모두 임상에서 분리된 균주이다. 본 연구를 위하여 각 그룹별로 해당되는 세균에 대해 McFarland No.
- 시험을 위해 수집한 세균을 대상으로 ampicillin, cephalothin, cefoxitin, ceftazidime, cefotaxime, ertapenem 및 meropenem에 대한 항균제 감수성 검사를 시행하였다. 표준 균주로 사용된 E.
- 001 g이 포함된 powder를 멸균증류수 1,000 ml 넣고 MacConkey 한천 평판배지(BBL, Cockeysville, MI, USA)를 제조하였다. 옥수수 수염의항균력 확인을 위해서 멸균증류수 대신 옥수수 추출액을 50% 혹은 100%를 넣어 MacConkey 한천 평판배지를 제조하였다.
- acid)-disk synergy 시험으로 선별하였다. 즉, 순배양된 집락을 백금침으로 채취한 후, tryptic soy broth 배지(BBL)에 접종하여 McFarland No. 0.5로 탁도를 맞추었다. 세균 부유액을 면봉으로 Mueller-Hinton 한천(BBL)에 고르게 접종한 후, EDTA 디스크(5 mM)를 가운데 두고 imipenem과 meropenem 디스크(각 10 μg, BBL)를 양옆에 두되 가장자리 간격이 1.
- , USA)으로 94℃에서 30초간 denaturation, 60℃ 에서 30분간 annealing, 72℃에서 30분간 extension을 30회 반복 시행하였다. 증폭산물 3 μl를 1.5% agarose gel (Seakem LE agarose, FMC Bioproducts, MA, USA)에 20분간 전기영동하여 증폭산물의 유무를 확인하였다. PCR 증폭산물을 추출하여서 sequencease version 2.
- 추출액의 제조는 건조된 옥수수수염 218.2 g을 전기 약탕기에 1차 증류수 2,000 ml를 넣고 물의 양이 반으로 이 될 때까지 가열한 후, 추출액을 filter paper (Adantec No.2, Japan)를 이용하여 감압여과하였다.
- 평판배지는 pancreatic digest of gelatin 17.0 g, peptone 3.0 g, lactose 10.0 g, bile salt 1.5 g, sodium chrolide 5.0 g, agar 13.5 g, neutral red 0.03 g, crystal violet 0.001 g이 포함된 powder를 멸균증류수 1,000 ml 넣고 MacConkey 한천 평판배지(BBL, Cockeysville, MI, USA)를 제조하였다. 옥수수 수염의항균력 확인을 위해서 멸균증류수 대신 옥수수 추출액을 50% 혹은 100%를 넣어 MacConkey 한천 평판배지를 제조하였다.
대상 데이터
- 본 연구를 위하여 E. coli ATCC 25922, K. pneumoniae ATCC 13883 각 1주와 임상에서 분리된 항균제 내성 K. pneumoniae 30주를 대상으로 하였다(Table 1). 항균제 내성세균 30주는 본연구팀이 수집한 것으로 이들이 생성하는 효소는 broad-spec-trum β-lactamase (BSBL)인 SHV-1 (n=1), extended-spectrum β-lactamase (ESBL)인 SHV-2a (n=2), SHV-12 (n=5), CTX-M-14 (n=1), CTX-M-15 (n=1), CTX-M-3과 SHV-12 동시생성균주(n=2), CTX-M-14와 SHV-12 동시생성 균주(n=1)였으며 carbapenemase인 GES-5 (n=5), KPC-2 (n=6), KPC-3 (n=4), NDM-1 (n=2)이었다.
- 이들 균주에 대해 carbapenemase 생성 여부확인을 위한 modified-Hodge 시험과 EDTA synergy 시험에서 음성반응을 보였고 carbaepenmase 생성 유전자 확인을 위한 PCR에서도 음성반응을 보여 이들 균주가 chromosomal AmpC-β-lactamase의 과량생성 혹은 ESBL 생성과 함께 세포의 외막에 존재하는 porin 소실 등이 원인인 것으로 유추되었다[17]. 본 연구의 대상이 된 ESBL 생성 균주는 in vitro에서 ceftazidime에 활성이 있는 SHV형과 cefotaxime에 활성이 있는 CTX-M형이 선정되었다. 이들 균주는 옥수수수염 추출액 0%, 25%, 50%, 100% 함유 배지에 균주를 McFarland No.
- NDM-1 생성균주 가운데 UKP12110 균주는 CTX-M-15 ESBL을 동시에 생성하여 모든 시험항균제에 내성을 보였고 UKP12111균주는 ceftazidime 과 cefotaxime을 제외한 모든 시험항균제에 내성을 보였다. 본 연구의 대상이 된 class A carbapenemase 생성균주는 GES-5형, KPC-2형 및 KPC-3형 등이었다. 이들 균주는 옥수수수염 추출액 0%, 25%, 50%, 100% 함유 배지에 균주를 Mc-Farland No.
- 실험을 위해 수집된 균주 가운데 BSBL 생성균주는 SHV-1 을 생성하는 KSK15102 1주뿐이었다. 이 세균은 ampicillin, cephalothin에 내성, ceftazidime에 중간내성이었고 cefoxitin, cefotaxime, ertapenem, meropenem 및 imipenem 항균제에감수성을 보였으나 옥수수 추출액 제조배지에는 감수성을 보이지 않았다(Fig.
- 디스크 확산법으로 시험하였다[7]. 항균제 디스크로 ampicillin, cephalothin, cefoxitin, ceftazidime, cefotaxime, meropenem 및 ertapenem 디스크(BBL)를 사용하였다. 결과의 정확성을 위해 E.
이론/모형
- Hodge 변법으로 carbapenemase 생성여부를 확인하였다 [11]. E.
- Lee 등[12]의 방법에 따라 EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid)-disk synergy 시험으로 선별하였다. 즉, 순배양된 집락을 백금침으로 채취한 후, tryptic soy broth 배지(BBL)에 접종하여 McFarland No.
- 디스크 확산법으로 시험하였다[7]. 항균제 디스크로 ampicillin, cephalothin, cefoxitin, ceftazidime, cefotaxime, meropenem 및 ertapenem 디스크(BBL)를 사용하였다.
성능/효과
- 본연구를 위해 수집된 균주 가운데 BSBL 생성균주는 blaSHV-1 유전자를 보유한 KSK15102 균주이었으며, 이 세균은 penicillin 계 항균제인 ampicillin과 1세대 cephalosporin 항균제인 cephalothin에 내성이었고 3세대 cephalosporin 항균제인 ceftazidime에 중간내성, cefotaxime에는 감수성을 보였으며 cephamycin계 항균제인 cefoxitin과 carbapenem계 항균제인 ertapenem, meropenem 및 imipenem 항균제에 감수성을 보였다(Table 1). BSBL을 생성하는 KSK15102 균주는 옥수수수염 추출액 0%, 25%, 50%, 100% 함유 배지에 균주를 Mc-Farland No. 0.5의 탁도에서 103배 희석한 경우, 각각 평균 967 개, 674개, 648개 및 839개로 확인되었고 104배 희석한 경우, 각각 평균 313개, 272개, 292개 및 344개로 확인되어 BSBL 생성균주는 옥수수수염 추출액에 감수성을 보이지 않는 것으로나타났다(Fig. 2A).
- pneumoniae ATCC 13883은 ampicillin을 제외한 모든 항균제에 감수성을 보였으며 TEM-1, SHV-1, SHV-11 등 BSBL만 생성하는 균주는 ampicillin과 cephalothin 항균제를 제외한 모든 항균제에 감수성을 보였다. CMY-1, -2 및 FOX-1을 생성하는 세균은 ampicillin, cephalothin 및 cefoxitin에 내성을 보였고 SHV-2a, -5, -12 및 CTX-M형 ESBL을 생성하는 균주는 ampicillin, cephalothin, ceftazidime, cefotaxime 등에 내성을 보였다. 또한 KPC형과 NDM-1형을 생성하는 세균은 ertapenem과 meropenem 항균제 모두에 내성을 보였고 GES-5를 생성하는 세균은 ertapenem 항균제에는 내성을 보였으나 meropenem 항균제에는 감수성으로 확인되었다(Table 1).
- 5의 탁도에서 103배 희석한 경우, 각각 평균 755 개, 692개, 687개 및 662개로 확인되었고 104배 희석한 경우, 각각 평균 220개, 290개, 236개 및 206개로 확인되다. Class B MBL 생성균주는 NDM-1형이었는데 이들 균주는 옥수수수염 추출물 0%, 25%, 50%, 100% 함유 배지에 균주를 Mc-Farland No. 0.5의 탁도에서 103배 희석한 경우, 각각 평균 934 개, 728개, 668개 및 673개로 확인되었고 104배 희석한 경우, 각각 평균 306개, 283개, 322개 및 244개로 확인되어 carbapenemase 생성균주는 옥수수수염 추출액에 감수성을 보이지 않는 것으로 나타났다(Fig. 2C, 2D).
- 이들은 SHV-12 생성균주가 5주(AJK05004, AJK05008, BDK05003, BDK05007, KSK15105)이었고 CTX-M-14 (AJK05011), SHV-2a (AJK05019) 및 SHV-2a와 CTX-M-14 동시생성(KSK15103)균주가 각 1주이었으며 SHV-12와 CTX-M-3 동시생성균주도 2주(HYK05001, KSK15106) 있었다. ESBL 생성균주는 ampicillin과 cephalothin에 모두 내성이었고 ceftazidime 혹은 cefotaxime 항균제 가운데 하나에 내성을 보였으며 일부 세균(KSK15103, KSK15105, KSK15106)은 ertapenem 항균제에 내성을 보이기도 하였다(Table 1). ESBL 생성 K.
- 또한 KPC-3를 생성하는 균주들은 모두 meropenem과 imipenem 항균제에 중간내성을 보였다(Table 1). NDM-1 생성균주 가운데 UKP12110 균주는 CTX-M-15 ESBL을 동시에 생성하여 모든 시험항균제에 내성을 보였고 UKP12111균주는 ceftazidime 과 cefotaxime을 제외한 모든 시험항균제에 내성을 보였다. 본 연구의 대상이 된 class A carbapenemase 생성균주는 GES-5형, KPC-2형 및 KPC-3형 등이었다.
- PCR 산물의 염기서열 분석결과 blaSHV-1 (8주), blaSHV-2a (8 주), blaSHV-5 (2주), blaSHV-11 (2주) 및 blaSHV-12 (18주)로 가장 흔하였고 blaTEM-1 (10주), blaCTX-M-3 (2주), blaCTX-M-14 (2주), blaCTX-M-15 (1주), blaGES-5 (5주), blaKPC-2 (6주), blaKPC-3 (4주) 및 blaNDM-1 (2 주)이 확인되었으며 blaCMY-1과 blaCMY-2 유전자도 검출되었다 (Table 1).
- 항균제 디스크로 ampicillin, cephalothin, cefoxitin, ceftazidime, cefotaxime, meropenem 및 ertapenem 디스크(BBL)를 사용하였다. 결과의 정확성을 위해 E. coli ATCC 25922의 감수성을 동시에 시험하였다(Table 1).
- 하지만 이들 균주 가운데 AJK05004, BDK05007 및 KSK15105 균주는 cephamycin 항균제인 cefoxitin에도 내성이었으나 AmpC β-lactamase 생성여부를 확인할 수 있는 PCR에서 음성반응을 보여 이에 대한 추가적인 연구가 필요할 것으로 생각된다. 또한 BDK05007과 KSK15105 균주는 carbapenem 항균제인 ertapenem에 내성을 보였고 KSK15105 균주는 meropenem 내성, imipenem에 중간내성을 보였다. 이들 균주에 대해 carbapenemase 생성 여부확인을 위한 modified-Hodge 시험과 EDTA synergy 시험에서 음성반응을 보였고 carbaepenmase 생성 유전자 확인을 위한 PCR에서도 음성반응을 보여 이들 균주가 chromosomal AmpC-β-lactamase의 과량생성 혹은 ESBL 생성과 함께 세포의 외막에 존재하는 porin 소실 등이 원인인 것으로 유추되었다[17].
- KPC형 carbapenemase 를 생성하는 균주의 특성은 ampicillin, cephalothin, cefoxitin, ceftazidime, cefotaxime, ertapenem, meropenem 및 imipenem 항균제에 중간 혹은 내성이었으며 이들은 모두 KPC β-lactamase 외에 다른 β-lactamase를 동시에 생성하였다. 또한 KPC-3를 생성하는 균주들은 모두 meropenem과 imipenem 항균제에 중간내성을 보였다(Table 1). NDM-1 생성균주 가운데 UKP12110 균주는 CTX-M-15 ESBL을 동시에 생성하여 모든 시험항균제에 내성을 보였고 UKP12111균주는 ceftazidime 과 cefotaxime을 제외한 모든 시험항균제에 내성을 보였다.
- CMY-1, -2 및 FOX-1을 생성하는 세균은 ampicillin, cephalothin 및 cefoxitin에 내성을 보였고 SHV-2a, -5, -12 및 CTX-M형 ESBL을 생성하는 균주는 ampicillin, cephalothin, ceftazidime, cefotaxime 등에 내성을 보였다. 또한 KPC형과 NDM-1형을 생성하는 세균은 ertapenem과 meropenem 항균제 모두에 내성을 보였고 GES-5를 생성하는 세균은 ertapenem 항균제에는 내성을 보였으나 meropenem 항균제에는 감수성으로 확인되었다(Table 1).
- 속한다[8]. 본 연구를 위해 수집된 SHV-12 생성균주 5주 (AJK05004, AJK05008, BDK05003, BDK05007, KSK15105), SHV-2a 생성균주(AJK05019) 및 SHV형과 CTX-M형 ESBL을 동시 생성 균주(HYK05001, KSK15103)는 모두 ESBL의 전형적인 특성을 가지고 있었으며 CTX-M-14 생성 균주(AJK05011)는 전형적인 cefotaximase의 특성을 보였다(Table 1). 하지만 이들 균주 가운데 AJK05004, BDK05007 및 KSK15105 균주는 cephamycin 항균제인 cefoxitin에도 내성이었으나 AmpC β-lactamase 생성여부를 확인할 수 있는 PCR에서 음성반응을 보여 이에 대한 추가적인 연구가 필요할 것으로 생각된다.
- 본 연구를 위해 수집된 carbapenemase 17주 가운데 GES-5 생성균주(BDK07044, BDK07057, BDK07242, BDK 07254, BDK07274)는 모두 ampicillin, cephalothin, cefoxitin, ceftazidime, cefotaxime, ertapenem, meropenem 및 imipenem 항균제에 중간 혹은 내성이었고 blaGES-5 유전자뿐 아니라 blaSHV-12 유전자도 보유하고 있었으며 blaCMY-1 유전자를 동시에 보유한 균주(BDK07274)도 있었다. KPC형 carbapenemase 를 생성하는 균주의 특성은 ampicillin, cephalothin, cefoxitin, ceftazidime, cefotaxime, ertapenem, meropenem 및 imipenem 항균제에 중간 혹은 내성이었으며 이들은 모두 KPC β-lactamase 외에 다른 β-lactamase를 동시에 생성하였다.
- 본 연구의 결과 일반적으로 음용이 가능한 옥수수수염 추출액은 임상에서 항균제에 노출된 항균제 내성획득 K. pneumoniae에 대한 감수성은 보이지 않았지만 지역사회를 통해 감염될 수 있는 K. pneumoniae에 의한 폐렴 등에는 충분히 예방효과가 있는 것으로 확인되었다.
- 본연구를 위해 수집된 균주 가운데 BSBL 생성균주는 blaSHV-1 유전자를 보유한 KSK15102 균주이었으며, 이 세균은 penicillin 계 항균제인 ampicillin과 1세대 cephalosporin 항균제인 cephalothin에 내성이었고 3세대 cephalosporin 항균제인 ceftazidime에 중간내성, cefotaxime에는 감수성을 보였으며 cephamycin계 항균제인 cefoxitin과 carbapenem계 항균제인 ertapenem, meropenem 및 imipenem 항균제에 감수성을 보였다(Table 1). BSBL을 생성하는 KSK15102 균주는 옥수수수염 추출액 0%, 25%, 50%, 100% 함유 배지에 균주를 Mc-Farland No.
- 실험의 대상이 된 표준균주는 E. coli ATCC 25922와 K. pneumoniae ATCC 13883이며 두 균종 가운데 K. pneumoniae ATCC 13883 균주는 제조된 배지에서 증식되지 않아 옥수수추출액 제조배지에 대한 감수성이 있는 것으로 확인되었다 (Fig. 1).
- 본 연구의 대상이 된 class A carbapenemase 생성균주는 GES-5형, KPC-2형 및 KPC-3형 등이었다. 이들 균주는 옥수수수염 추출액 0%, 25%, 50%, 100% 함유 배지에 균주를 Mc-Farland No. 0.5의 탁도에서 103배 희석한 경우, 각각 평균 755 개, 692개, 687개 및 662개로 확인되었고 104배 희석한 경우, 각각 평균 220개, 290개, 236개 및 206개로 확인되다. Class B MBL 생성균주는 NDM-1형이었는데 이들 균주는 옥수수수염 추출물 0%, 25%, 50%, 100% 함유 배지에 균주를 Mc-Farland No.
- 본 연구의 대상이 된 ESBL 생성 균주는 in vitro에서 ceftazidime에 활성이 있는 SHV형과 cefotaxime에 활성이 있는 CTX-M형이 선정되었다. 이들 균주는 옥수수수염 추출액 0%, 25%, 50%, 100% 함유 배지에 균주를 McFarland No. 0.5의 탁도에서 103배 희석한 경우, 각각 평균 962개, 718개, 657개 및 859개로 확인되었고 104배 희석한 경우, 각각 평균 391개, 474개, 468개 및 461개로 확인되어 ESBL 생성균주는 옥수수수염 추출액에 감수성을 보이지 않는 것으로 나타났다(Fig. 2B).
- 표준 균주로 사용된 E. coli ATCC 25922와 K. pneumoniae ATCC 13883은 ampicillin을 제외한 모든 항균제에 감수성을 보였으며 TEM-1, SHV-1, SHV-11 등 BSBL만 생성하는 균주는 ampicillin과 cephalothin 항균제를 제외한 모든 항균제에 감수성을 보였다. CMY-1, -2 및 FOX-1을 생성하는 세균은 ampicillin, cephalothin 및 cefoxitin에 내성을 보였고 SHV-2a, -5, -12 및 CTX-M형 ESBL을 생성하는 균주는 ampicillin, cephalothin, ceftazidime, cefotaxime 등에 내성을 보였다.
후속연구
- 본 연구를 위해 수집된 SHV-12 생성균주 5주 (AJK05004, AJK05008, BDK05003, BDK05007, KSK15105), SHV-2a 생성균주(AJK05019) 및 SHV형과 CTX-M형 ESBL을 동시 생성 균주(HYK05001, KSK15103)는 모두 ESBL의 전형적인 특성을 가지고 있었으며 CTX-M-14 생성 균주(AJK05011)는 전형적인 cefotaximase의 특성을 보였다(Table 1). 하지만 이들 균주 가운데 AJK05004, BDK05007 및 KSK15105 균주는 cephamycin 항균제인 cefoxitin에도 내성이었으나 AmpC β-lactamase 생성여부를 확인할 수 있는 PCR에서 음성반응을 보여 이에 대한 추가적인 연구가 필요할 것으로 생각된다. 또한 BDK05007과 KSK15105 균주는 carbapenem 항균제인 ertapenem에 내성을 보였고 KSK15105 균주는 meropenem 내성, imipenem에 중간내성을 보였다.
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